蛋白质纯度测定实验（一）
在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。纯化过程可能已将某一杂质的浓度降低到检测下限以下，但色谱峰中还有残留。毫无疑问，表观纯度取决于所选择的测定方法及其灵敏度。由于大多数分离方法都能够有效地去除非蛋白质类杂质，因此本章节将主要介绍蛋白质样品中蛋白质类杂质的检测方法。有关核酸、脂类、碳水化合物杂质的检测方法在本系列其他卷中有所介绍。随着蛋白质类生物制品的流行, 蛋白质纯度已经成为药品管理的重大问题。人用药品注册技术要求国际协调会 (TheInternationalConferenceonHarmonisation,ICH) 关于生物制品的质量指导原则（ICHQ6......阅读全文
蛋白质含量测定实验——Bradford法
蛋白质含量测定实验可以用于：（1）测定蛋白质浓度；（2）检测所提取的蛋白质含量。实验材料蛋白质试剂、试剂盒牛血清NaCl考马斯亮蓝仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 分别在两组微量离心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白，以 0.15 mmol/l NaCl补足至100 ul，同时以两管
蛋白质含量的测定方法（一）
实验原理：蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法、双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法
实验用水所要求的纯度
实验用水所要求的纯度 随着试验用分析系统灵敏度的提高，对水的纯度也有了更高的要求。实验的再现性除了要有良好的技巧，还受到所用化学试剂纯度和分析仪器精密度的影响。实验中用来配制溶液的化学试剂，及所使用的水纯度也非常重要，因此，为了数据的再现性，使用稳定水质的纯水很有必要。 实验室常见的水的种类 1、蒸
蛋白质一级结构的测定方法（一）
研究蛋白质的一级结构从确定组成蛋白质的单元结构棗氨基酸算起，已有150年的悠久历史，直到1955年，Sanger首次阐明胰岛素的氨基酸排列顺序，为研究蛋白质的一级结构开辟了道路。这在分子生物学的发展进程中是一个重要突破。目前关于核酸的一级结构研究，由于Sanger等发明了加减法，可以得到了突
Lowry－检测法测定蛋白质浓度实验
实验方法原理 Lowry 法又称为 Folin-酚试剂法。首先在碱性溶液中形成铜-蛋白复合物，然后这一复合物还原磷钼酸-磷钨酸试剂 （Folin-酚上级），产生钼蓝和钨蓝复合物的深蓝色，这种深蓝色 的复合物在745～750 nm 处有最大的吸收峰，颜色的深浅（吸收值）与蛋白质浓度成正比，可根
蛋白质磷酸化的测定实验
代谢标记 X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质 实验材料 细胞
Lowry－检测法测定蛋白质浓度实验
Lowry检测法 实验方法原理 Lowry 法又称为 Folin-酚试剂法。首先在碱性溶液中形成铜-蛋白复合物，然后这一复合物还原磷钼酸-磷钨酸试剂 （F
Lowry－检测法测定蛋白质浓度实验
实验方法原理Lowry 法又称为 Folin-酚试剂法。首先在碱性溶液中形成铜-蛋白复合物，然后这一复合物还原磷钼酸-磷钨酸试剂 （Folin-酚上级），产生钼蓝和钨蓝复合物的深蓝色，这种深蓝色 的复合物在745～750 nm 处有最大的吸收峰，颜色的深浅（吸收值）与蛋白质浓度成正比，可根据 750
高效液相怎么测定样品纯度
1.配制一已知浓度的标准品，根据其和样品的峰面积的比值来对比可得出，但此法较局限，两者相差太大，准确性不高2，由低到高配制不同浓度的标液，以峰面积和浓度制作标准曲线，根据样品的峰面积得其浓度。3.在样品和标准品里在加入一种性质相似的物质,通过加入物质的峰面积或峰高的变化,就可以看出标准品和样品进样体
核酸纯度、浓度与分子量测定实验——Ethidium－bromide染色法
实验方法原理利用一系列不同浓度的DNA标准溶液（0、2.5、5、10、20、30、40、50 ng/ml），或已知浓度的DNA marker，和未知浓度DNA样品一起进行琼脂糖凝胶电泳，以EB染色后，在凝胶图象分析仪上观察，比较标准浓度及未知浓度的亮度，来求取DNA 的含量；比较DNA样品与DNA
实验室用水的纯度要求
分析仪器对实验室用水中的多种污染物十分敏感，比如重金属和可溶性有机物，尤其是食品、药物中的残留和有害元素检测、降低实验空白等等都直接与水的纯净度有密切关系。仪器越是高精端，对实验用水要求越是高。目前检测实验室多数存在用水概念不强、制备的纯度低、贮存期间细菌污染严重等情况，多了解实验室用水的纯度要求，
用于蛋白质表达的标签实验（一）
一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正
蛋白质凝胶染色法实验（一）
总蛋白质的检测1. 总蛋白质色度法染色简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银染法是可选择的色度方法。如果需要对切下的蛋白质进行质谱分析，则首选不会引入共价蛋白
如何正确使用氢气纯度仪（一）
氢气纯度仪顾名思义就是检测氢气纯度的仪器，关于正确使用氢气纯度仪的方法可以参照下面的步骤。 连接氢气纯度仪将测量管道上螺纹端与开关接头连接好，用扳手拧紧，关闭测量管道上另一端的针型阀；再把测试管道上的快速接头一端插入综合测试仪上的采样口；将排气管道连接到出气口；最后将开关接头与SF6电气设备测量接
蛋白质含量的测定实验——OLIN酚法
实验方法原理FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极不稳定, 易被酚类化合物还原成蓝色(蛋白质中的酚基将磷钼酸-磷钨酸还原成蓝色复合物)。在一定条件下, 蓝色强度与蛋白质的量成正比, 范围约在25～250 μg/ ml 蛋白质浓度。实验材料蛋
用－Bradford方法测定蛋白质含量实验
实验方法原理溶解蛋白质，与染料混匀，l0min 后阅读 O.D.。实验步骤材料十二烷基硫酸钠（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考马斯亮蓝 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%)，溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷酸：将 10
N－端封闭蛋白质内部序列测定实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质样品（约 200 mol）试剂、试剂盒 1％乙酸溶液（含丽春红 S 染料）1％ 乙酸0.2 mol／L NaOH0.1 mol／L 乙酸溶液(含PVP-40) 消化缓冲液 1 mg／ml 胰蛋白酶层析溶液 A 层析溶液 B仪器、耗材 0.22 μm 硝酸纤维素膜酸洗过的
蛋白质含量测定实验——folin—酚试剂法
蛋白质含量测定实验可以用于：（1）测定蛋白质浓度；（2）检测所提取的蛋白质含量。实验方法原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即f
N－端封闭蛋白质内部序列测定实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 蛋白质样品（约 200 mol）
N－端封闭蛋白质内部序列测定实验
实验材料蛋白质样品（约 200 mol） 试剂、试剂盒1％乙酸溶液（含丽春红 S 染料）1％ 乙酸0.2 mol／L NaOH0.1 mol／L 乙酸溶液(含PVP-40)消化缓冲液1 mg／ml 胰蛋白酶层析溶液 A层析溶液 B仪器、耗材0.22 μm 硝酸纤维素膜酸洗过的玻璃／Petri 培养皿
用－Bradford方法测定蛋白质含量实验
实验方法原理 溶解蛋白质，与染料混匀，l0min 后阅读 O.D.。 实验步骤 材料 十二烷基硫酸钠（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L
蛋白质浓度测定（双缩脲法）实验
实验原理测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有凯氏定氮法；比色法主要包括双缩脲法、Folin-酚试剂法及 染料结合法；紫外分光光度法等双缩脲(Biuret)法：在碱性溶液中，双缩脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)与二价铜离子作用形成紫红色的络合物，这一反应称双缩脲反应。凡分子中含二个或二个以上
用－Bradford方法测定蛋白质含量实验
实验方法原理 溶解蛋白质，与染料混匀，l0min 后阅读 O.D.。实验步骤 材料十二烷基硫酸钠（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考马斯亮蓝 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%)，溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷
实验室检测仪器电导率仪的水质纯度的测定
水的电导率反映了水中电解质总量,是一个非常重要的指标。不但在实验室及一切生产高纯用水的地方需要监测蒸馏水或去离子水的质量,而且在锅炉用水、工业废水、河流、环境监测等方面,也需要测定水的电导率,以估价水质。目前,用得最多的是评价水的纯度。纯水可离解成H+和OH-,绝对纯水的电导率,在25 ℃时,理论值
溶菌酶纯度鉴定与分子量测定
一、实验目的和内容目的：1. 通过本次实验的学习与操作，使学生在实验过程更好的理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）测定蛋白质纯度与分子量的原理与依据；2. 要求学生掌握电泳原理以及SDS－PAGE垂直板电泳分离蛋白质技术；3. 熟悉垂直板电泳操作原理和方法，凝胶染色与脱色方法，凝胶图谱的绘制与计算
L胱氨酸试剂纯度的测定
一．实验原理： 在溴酸钾的标准溶液中，加入过量的溴化钾，将溶液酸化，发生反应生成溴。在有过量溴存在的强酸性溶液中（盐酸浓度1mol/L），胱氨酸和溴1：5发生反应，剩余的溴用碘化钾还原，析出的碘可用硫代硫酸钠标准溶液滴定。 二．实验内容和实验步骤： 1．硫代硫酸钠标准溶液的配制
紫外吸收法测定核酸浓度与纯度
实验概要学习测定DNA或RNA的浓度与纯度。实验原理核酸分子中的碱基集团含有共轭双键，它们对紫外光有强烈的吸收。核酸的最大吸收波长在260 nm，吸收低峰在230 nm。可以利用核酸的这一特性对其浓度进行测定。在波长260 nm下，A260=1时，双链DNA的含量为50 µg/ml，单链DN
高纯度的纯水，实验室的实验基础
超纯水机是广泛应用于凝胶分析培养基制备，毛细管电泳，生命科学，动物细胞及植物细胞、组织培养，IVF，氨基酸分析，分子生物学，有机物分析，离子色谱分析毛细管电泳，环保实验分析，精密仪器分析以及分析试剂及药品配置、稀释等领域的基础实验室仪器。 超纯水机是一种将自来水转化成达到实验室要求纯度纯水的机器。超
高纯度的纯水，实验室的实验基础
超纯水机是广泛应用于凝胶分析培养基制备，毛细管电泳，生命科学，动物细胞及植物细胞、组织培养，IVF，氨基酸分析，分子生物学，有机物分析，离子色谱分析毛细管电泳，环保实验分析，精密仪器分析以及分析试剂及药品配置、稀释等领域的基础实验室仪器。 超纯水机是一种将自来水转化成达到实验室要求纯度纯水的机器。超
细胞周期测定实验（一）
标签： 细胞周期 体外培养 周期测定细胞周期测定可以：（1）作为生物相容性评价指标；（2）用于研究细胞凋亡；（3）作为选择细胞的依据。实验方法细胞计数法BrdU渗入法流式细胞仪测定法实验方法原理流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单