用于蛋白质表达的标签实验（一）
一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素亲和力和可溶性的选择在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启动子、低转录起始或稀有密码子的存在引起的表达问题都可以通过在装配过表达质粒时将矫正序列（correctivesequence) 引入基因中和使用补充了稀有 tRNA 的大肠杆菌来得到解决。将高表达的内源性蛋白质融合在外源目标蛋白质的 N 端不仅是一个提高产量的方法，而且还可以增加目标蛋白质的可溶性: 这是可溶性标签的基本原理。另外，亲和标签对蛋白质的纯化至关重要，它提供了多种策略使目标蛋白质结合在亲和基质上 (表 I6.1)。一些蛋白质标签既可作为亲和标签，又可作为可溶性标签。例如，谷胱甘肽-S-转移酶 (glutathione-S-tamsferase，GST) 可以提高某些蛋白质的可溶性，而可溶......阅读全文
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTE 仪器、耗材 Eppendorf 试管 实验步骤 实验方案 A 1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质： 2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。 3.时收集上清液（含有释放的 cDNA
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE 仪器、耗材 Eppendorf 试管 实
标签酶消化释放标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTE仪器、耗材 Eppendorf 试管实验步骤 实验方案 A1.向含有 Dynabeads 的每个试管中加入下列物质：2.65℃ 下酶解 Ih(每 IOmin 混合 1 次)。3.时收集上清液（含有释放的 cDNA 标签）4.用 LoTE 扩容到 200mL。5.等体
补平标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 BSA LoTE cDNA标签 实验步骤
补平标签实验
是对差异显示技术（DD）实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军 实验步骤 实验方案 A 1.向两个含有释放的 cDNA 标签的试管中加入： 2.在 37°C
补平标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签实验步骤 实验方案 A1.向两个含有释放的 cDNA 标签的试管中加入：2.在 37°C 下孵育 30 min。3.加入 150ul LoTE 扩容到 200ul。4.如上所述，用等体积的 PCI 抽提，乙醇沉淀（实验方案 A，第 2 步)。5.将
双标签的分离实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 BSA LoTE cDNA标签 实验步骤 一、用
连接为双标签实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液 LoTE cDNA标签 实验步骤
双标签的分离实验
试剂、试剂盒 溶液与缓冲液BSALoTEcDNA标签 实验步骤 一、用 NlaIII 消化双标签，释放接头 1.向 480ul 已纯化的 PCR 产物中加入下列成分： 2.在 37℃ 下消化 Ih(不要热失活酶，否则将致使 22~26bp 的小双标签变性)。 3.消化
连接为双标签实验
是对差异显示技术（DD）实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验 现代神经科学研究技术 作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军 试剂、试剂盒 溶液与缓冲液LoTEcDNA标签 实验步骤 实验方案 A 1.此实验方