蛋白质与免疫亲和介质结合实验
仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置 聚丙烯酰胺小胶实验步骤 材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)操作程序1) 将溶解、稀释的 AMS 沉淀物和洗过的免疫亲和介质混合后，于 0、5、15 和 30 min 各取样 100-ul。2) 立即离心样品，留上清，供 SDS-PAGE 电泳分析，测定核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物与抗体的结合率。注：游离的σ32 不会与免疫亲和柱结合，而上清中的核心 RNA 聚合酶复合物则可结合, 并可通过上清中核心β'β亚基（在 SDS 胶上，为~155kDa 的双带）的去除来检测。......阅读全文
蛋白质与免疫亲和介质结合实验
仪器、耗材 SDS-PAGE 电泳装置 聚丙烯酰胺小胶实验步骤 材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)操作程序1) 将溶解、稀释的 AMS 沉淀物和洗过的免疫亲和介质混合后，于 0、5、15 和 30 min 各取样 100-ul。2) 立即离心样品，留上清，供 SDS-PAG
蛋白质与免疫亲和介质结合实验
仪器、耗材SDS-PAGE 电泳装置 聚丙烯酰胺小胶实验步骤材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)操作程序1) 将溶解、稀释的 AMS 沉淀物和洗过的免疫亲和介质混合后，于 0、5、15 和 30 min 各取样 100-ul。2) 立即离心样品，留上清，供 SDS-PAGE
蛋白质与免疫亲和介质结合实验
材料与设备SDS-PAGE 电泳装置聚丙烯酰胺小胶（10%)操作程序1) 将溶解、稀释的 AMS 沉淀物和洗过的免疫亲和介质混合后，于 0、5、15 和 30 min 各取样 100-ul。2) 立即离心样品，留上清，供 SDS-PAGE 电泳分析，测
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验DNA亲和介质制备
实验材料两种带有结合位点的合成寡核苷酸各440μg试剂、试剂盒TE缓冲液 pH 7.810×T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液20 mmol L ATP (钠盐） pH 7.0150 m Ci mL [γ-32P] ATP (6000 Ci mmol)10 U μL T4噬菌体多核苷酸激酶（New Eng
DNA－亲和介质的制备实验
DNA 亲和介质的制备实验 试剂、试剂盒 ATP [y-32P]ATP T4多核苷酸激酶
DNA－亲和介质的制备实验
试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-
DNA－亲和介质的制备实验（一）
试剂、试剂盒 ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶
DNA－亲和介质的制备实验（二）
寡核苷酸的连接1) 取 10ul 10X 接头-激酶缓冲液加入 65ul 水中，将 DNA 震荡溶解于此溶液。2) 加 20ul 20 mmol/L ATP(pH7.0) 及 5ulT4 DNA 连接酶（30Weiss 单位)，得最终反应体积为 100ul。3) 在室温下孵育≥2 h。若 AP-1
磷酸交联AFFIGEL－10－亲和介质实验
实验方法原理 本方案描述了将磷酸肽链或非磷酸肽链交联到 Affi-Gel 10 亲和介质上以利用亲和柱层析法纯化抗体的方法。这里所详述的无水交联法是最有效的肽链交联方法。按此法的步骤最终能产生 3 ml 柱床体积的亲和树脂；每毫升Affi-Gel 10上能交联 3 μl 肽。实验材料 寡聚肽
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 饱和 AMS 沉淀物 偶联缓冲液
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒免疫亲和介质溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见下文)溴
免疫亲和层析实验
试剂、试剂盒 免疫亲和介质溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备免疫亲和介质（带固定化的 MAb NT73; 见
链亲和素生物素结合物免疫荧光标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 生物素荧光染料链亲和素仪器、耗材 离心机摇床实验步骤 1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。 2. 待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。 3.
链亲和素生物素结合物免疫荧光标记实验
免疫荧光标记是微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法，在临床上得到了广泛的应用。实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光
亲和色谱法配基与载体的结合
配基要结合到载体上,首先要活化载体上的功能基团,再将配基连接到活化基团上。此偶联反应必须在温和条件下进行,不致使配基和载体遭到破坏;且偶联后要反复洗涤载体,以除去残存的未偶联的配基,还要测定偶联的配基的量。最常用的载体是琼脂糖4B(Sepharose4B)。把琼脂糖与溴化氰在pH值为11条件下进行处
磷酸交联AFFIGEL－10－亲和介质实验——肽链交联
本实验描述了将磷酸肽链/非磷酸肽链和磷酸酪氨酸交联到 Affi-Gel 10 亲和介质上以利用亲和柱层析法纯化抗体的方法。实验方法原理本方案描述了将磷酸肽链或非磷酸肽链交联到 Affi-Gel 10 亲和介质上以利用亲和柱层析法纯化抗体的方法。这里所详述的无水交联法是最有效的肽链交联方法。按此法的步
免疫印迹与免疫检测实验——亲和素生物素偶联
实验材料蛋白质试剂、试剂盒TTBS缓冲液TBS缓冲液过氧化物酶碱性磷酸酶仪器、耗材摇床硝酸纤维素膜尼龙膜实验步骤1. 在旋转摇床或摆动平台中持续摇动使膜与合适的封闭液平衡。对于硝酸纤维素膜或PVDF膜，需在室温封闭30~60 min。尼龙膜则需在37℃封闭2 h。2. 用TTBS溶液（用于硝酸纤
亲和免疫组织化学实验
实验方法原理 ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法，是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的，其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记，生物素标记的第二抗体与
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验_DNA亲和层析法
实验材料制备性的DNA亲和层析树脂试剂、试剂盒缓冲液Z或其他柱缓冲液（如缓冲液Ze或TM)配制时含不同的KCl浓度（从缓冲液 Z 0.1 mol L KCl 至缓冲液 Z 1 mol L KCl对缓冲液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分纯化的蛋白质组分非特异性的竞争DNA柱再生缓冲液柱储存缓
亲和色谱的介质应具备的条件
① 具有多孔网络结构 ② 非特异吸附小，基质化学性质应是惰性，表面电荷尽 可能低； ③ 理化性质稳定，不因共价偶联反应的条件及吸附条件 的变化而发生变化； ④ 基质必须能够活化或功能
亲和色谱的介质应具备的条件
① 具有多孔网络结构 ② 非特异吸附小，基质化学性质应是惰性，表面电荷尽 可能低； ③ 理化性质稳定，不因共价偶联反应的条件及吸附条件 的变化而发生变化； ④ 基质必须能够活化或功能
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒琼脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸钠-乙酸磷酸二氢钾仪器、耗材天平烧瓶螺旋搅拌器布氏漏斗实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」1. 制备 CNBr-活化的琼脂糖 4B以下步骤必须在通风橱中小心进行。用 3 mol/L NaOH 将琼脂糖 4B 悬液调整为 p
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 蛋白质
蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 琼脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸钠-乙酸磷酸二氢钾仪器、耗材 天平烧瓶螺旋搅拌器布氏漏斗实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」1. 制备 CNBr-活化的琼脂糖 4B以下步骤必须在通风橱中小心进行。用 3 mol/L NaOH 将琼
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
步骤一 偶联寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步骤二 核酸亲和层析 实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通过它们本身的碱基实现的。从理论上讲，该方法也许干扰最佳结合序列的接近路径，但是这样一个简单的方法一直被广泛地成功应用。偶联效率的定量检测可经 A260 值测定评估，或者更精确地从偶联介质上水解核酸和进行磷酸盐测定。实
蛋白质与生物小分子结合
生物大分子,首先先说一下什么是生物大疯子,生物大分子指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子.高相对分子量的生物有机化合物（生物大分子）主要是指蛋白质、核酸以及高相对分子量的碳氢化合物.常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、多糖.但是,这只是相对的说法,这个定义只是概念性的,与
磷酸交联AFFIGEL－10－亲和介质实验——磷酸酪氨酸交联
实验方法原理磷酸酪氨酸在肽交联时所用的无水条件下是不溶的，因此交联必须在水相条件下进行。按此节的步骤最终能产生 10 ml 柱床体积的亲和树脂；与肽类似，每毫升 Affi-Gel 10上能交联 3 μmol 磷酸酪氨酸。实验材料磷酸酪氨酸Affi-Gel 10试剂、试剂盒NaOH （可选）碳酸氢钠乙
配体与活化介质的偶联实验
配体与活化介质的偶联实验 试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液 Affi-Gel 10 磷
配体与活化介质的偶联实验
试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液Affi-Gel 10 磷酸钠（50 mmul L）乙醇胺实验步骤 材料磷酸盐缓冲液（50 mmol/L;PH7.5~8,0)Affi-Gel 10(Bio-Rad Laboratories)磷酸钠（50 mmul/L），含 NaCl(1mol/L)(PBS)乙醇胺（100