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蛋白质定量实验

试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G250乙醇磷酸实验步骤 (1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品,可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度(microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比值太高, 可能会增加反应混合物的 PH 而导致反应背景较高。(2) 将标准品和待测样品加人到一次性的比色皿中 (应该使用一次性的塑料比色皿或微孔板,因为染料会黏附到各种材料容器的表面上)。(3)Bradford 试剂预热至室温。将 ImL 染料溶液加人到 25 uL 蛋白质样品中,混勻,室温孵育 10 min。(4) 检测 450rnn 和 595nm 处的吸光度 (可以使用 570~610nm 的基于滤光器的仪器,对检测性能不会有明显的降低)。(5) 对 595 nm 处的数据作图,或为提高在低反应值处的精度,对 595 nm/......阅读全文

AB SCIEX在沪发布新一代组学技术平台 提供极致的数据完整性

  2014年7月3日,由美国AB SCIEX公司协办组织的全国生物质谱学术报告会——生物质谱前沿技术邀请报告会在上海复旦大学隆重召开。10位中外名家围绕生物质谱前沿技术和热点问题分别作了精彩专题报告,参会者达到500余人。AB SCIEX公司在会议期间正式发

第三期原子光谱沙龙活动报道

基于元素标记和等离子体质谱测量的蛋白质定量标记 中国科学院高能物理研究所 王萌博士   首先,来自中国科学院高能物理研究所的王萌博士为大家做了题为《基于元素标记和等离子体质谱测量的蛋白质定量标记》的报告。   已有的蛋白质组学定量方法   蛋白质是生物功能的执行者,它是生命复杂性的起

应用Orbitrap Fusion对TMT标记样本进行MS2定量方法...(三)

Peptide and Unique Peptide Identified Using SPS MS3 Quantitation Method among 16 Samples  Distribution of Protein Group Identified and Quant

赛默飞世尔科技“蛋白质组学解决方案”网络视频讲座

  3月30日下午,赛默飞世尔科技蛋白质组学市场专员唐佳向大家作了题为《蛋白质组学研究方法和Thermo蛋白质组学解决方案》的报告

蛋白质组最新研究进展

  蛋白质组(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins提出,指由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变。 在转录时,一个基因可以多种mRNA形式剪接,一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物,蛋白质组中蛋

张玉奎院士:蛋白质组相对定量新方法

  第5届亚洲与大洋洲质谱会议暨第33届中国质谱学会学术年会于2014年7月17日上午在北京大学盛大召开。在大会报告中,来自中国科学院大连化学物理研究所的张玉奎院士带了题为《蛋白质组相对定量新方法》的报告。中国科学院大连化学物理研究所 张玉奎院士  蛋白质组相对定量新方

蛋白质组学概念的起源和发展

  蛋白质组学的诞生和发展,离不开多学科和技术的逐渐交叉融合。这些学科技术包括(但不限于)基因组学、生物化学、分析化学、自动化、基于电磁场的精密质谱仪、信号处理、数理统计和计算机科学。近年来,分子医学、大数据技术和人工智能的发展,进一步加速推动了蛋白质组学的成长,使之在精准医疗领域展示出越来越大的应

LC-MS技术临床应用培训班报告(二)

  分析测试百科网讯2016年4月20日,液相色谱-质谱(LC-MS)技术临床应用培训班在上海中山医院举办。纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任兼北美华人临床化学学会(NACCCA)主席张岩教授、金域临床质谱检测中心赵蓓蓓、中国科学院生物物

第十四届全国离子色谱学术大会报告(一)

  2012年9月17日~18日,第十四届全国离子色谱学术报告会在历史悠久的古城西安隆重召开,大会期间共有来自全国40多位离子色谱专家做大会报告,内容涉及离子色谱理论研究、检测方法建立、样品处理方法研究、联用技术、仪器功能开发等。分析测试百科网作为本届大会的应邀媒体,将对大会报告

2014质谱沙龙年末巨献 再掀质谱临床应用热潮

  2014年12月28日,“北京市继续教育-质谱沙龙2014报告会”在首都医科大学附属北京朝阳医院举行。本次质谱沙龙活动由首都医科大学附属北京朝阳医院、AB SCIEX公司主办,北京艾米诺医学研究有限公司、分析测试百科网、默沙东

AB Sciex视频讲座“AB Sciex 电喷雾质谱在蛋白质组学中的应用”

  4月12日,AB Sciex 公司在分析测试百科网成功举办了题为“AB Sciex 电喷雾质谱在蛋白质组学中的应用”的网络视频讲座。AB Sciex 亚太应用支持中心的靳文海博士首先为大家简单介绍了蛋白质组学和质谱技术发展方向,接下来重

定量蛋白质组学方法分类

1 背景和意义从生命活动的直接执行者——蛋白质的角度研究生命现象和规律(特别是疾病防治和病理研究)已成为研究生命科学的主要手段。而这些研究往往离不开对细胞、组织或器官中含有蛋白质种类和表达量的研究。对处不同时期、不同条件下蛋白质表达水平变化的研究,识别功能模块和路径,监控疾病的生物标志物,这些研究都

中科院Nature开源性刊物发表蛋白质研究新技术

  来自中科院大连化学物理研究所的研究人员开发一种新型的同位素标记策略,可对6种不同的蛋白质样品进行可靠标记并进行同时定量。并证实这一策略适用于高通量检测蛋白质周转(turnover)动态。这一研究成果发表在国际著名刊物Nature旗下开源性刊物Scientific Reports上。   中

国内外蛋白质组学大腕云集 聚焦生物质谱前沿技术

  2014年7月3日,全国生物质谱学术报告会--生物质谱前沿技术邀请报告会在上海复旦大学隆重召开。此次活动旨在积极促进我国生物质谱技术的发展和应用,加强国内外相关研究领域的专家学者之间的交流与合作,特邀瑞士苏黎世联邦技术学院分子系统生物学

质谱检测法如何进行蛋白质分析?

  MS/MS操作模式  串联质谱仪通常使用的都是离子模式来鉴定蛋白质的氨基酸序列。目前所有的MS/MS质谱仪都具有该功能。不过其它特殊的质谱仪也具有MS/MS功能。如果要发现蛋白质中的某个功能基团则需要用到母离子扫描功能或者中性丢失扫描功能,而这就必须用到三重四级杆质谱仪,如Q-Q-Q质谱仪,或四

数据非依赖采集DIA 解决方案(四)

Skyline 软件Skyline 软件是华盛顿大学 MacCoss 教授实验室开发的目标蛋白质组学分析软件(https://skyline.gs.washington.edu),是 DIA/SWATH 数据处理的权威工具,由于功能全面、性能强大而受到普遍认可,是目前使用最广泛的 DIA/S

应用Orbitrap Fusion对TMT标记样本进行MS2定量方法...(一)

应用Orbitrap Fusion对TMT标记样本进行MS2定量方法以及SPS MS3定量方法的比较1. 前言目前,蛋白质组学研究已经由传统的大规模鉴定逐步转向了靶向蛋白质组学,研究内容已经由蛋白质鉴定扩展到了蛋白质相对和绝对定量,蛋白质相对定量方法中应用最普遍的为标记定量,包括:ICAT,DIAR

“组学国标”项目结硕果:最精准的mRNA测序与蛋白质组质谱

  二代测序、蛋白质组质谱,这些“高大上”的组学手段早已不是稀罕事,使人们对生命和疾病的理解进入了一个崭新的时代。这些组学技术大量用于科研的同时,在应用领域却陷入了巨大的困境。  蛋白质组质谱技术和RNA测序目前几乎没有任何值得一提的临床应用,即便是在临床应用得相对较多的DNA测序,也饱受重复性差、

一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白(二)

Skyline 中嵌入的 mProphet 软件会根据同一肽段的多个子离子峰的 feature 进行打分。 Feature 包括子离子共流出峰形、保留时间偏差、 dotp 值、信噪比等。为了区分假阳性的子离子峰, mProphet 可以建立 decoy 库,也可以将打分排名第二的肽段作为decoy,

一小时 DDA 鉴定 DIA 定量 4000 个 Hela 蛋白(二)

500 ng Hela 细胞裂解液用相同的色谱柱,相同的色谱梯度,将 QE HF 切换至 DIA 扫描模式进行 3 次 DIA 数据采集。在一次扫描循环中,目标母离子质核比范围 400–1000,四极杆的隔离窗口为 12 Da,包含 50 次 MS/MS 扫描。每一张 MS/MS 谱图中

第二十九期质谱沙龙活动报道

Triple TOF 5600 在生物标志物发现中的应用  郭立海博士作了题为《Triple TOF 5600 在生物标志物发现中的应用》的报告,主要介绍了蛋白质组发展趋势及其对质谱技术的要求,Triple TOF 5600分析蛋白质的三种应用,Triple TOF 5600独特的设计支持了同时定性

首届中国计算蛋白质组学研讨会第一轮通知

  The First China Workshop on Computational Proteomics (CNCP2010)   2010年11月10日至11日, 北京   一.会议简介   随着蛋白质组学的兴起,特别是质谱技术的快速发展,蛋白质组学研究中产生的数据规模越来越大。依靠简单

SWATH技术常见问题与解答

SWATH(Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra)采集模式是苏黎世联邦理工学院及AB SCIEX(全球领先的生命科学分析技术公司)的科学家联合推出的一项基于质谱应用的新技术。利用此项技术,科学家有史以来首次

郭天南:全景式组学研究为新冠重症早诊断提供决策依据

  分析测试百科网讯 在新冠肺炎COVID-19疫情肆虐全球之际,PCR技术在快速筛查中已大显神威,但进入临床后如何更早地区分轻症和重症患者,从而更准确地治疗和用药?5月27日中国研究人员在《Cell》发表文章,利用蛋白质组学和代谢组学的全景式分析,发现了重症患者体内应对病毒进攻特征性的分子改变,并

等电聚焦和二维凝胶电泳实验

对于复杂混合物,如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分,通过两步正交的分离 (orthogonalseperation),二维凝胶 (2D 胶)电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷,即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量,即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电

【盘点】定量蛋白组学将在未来10年飞速发展

  人类基因组计划的成功实施,我们已初步掌握了自身的遗传信息。但阐明人类基因组整体功能的功能基因组学仍任重而道远。蛋白质作为生命活动的"执行者",自然成为生命科学研究的新"宠儿"。几乎在所有生命科学领域内,科学研究工作者都需要对细胞、组织或完整生物体的蛋白进行定性描述或定量检测。对一种细胞、组织或完

质谱检测法与蛋白质分析(二)

传统的和最新的蛋白质组学研究策略虽然到目前为止,还没有一种蛋白质组学研究策略能够对某个蛋白质组进行常规的、完整的分析,但是现在的技术已经非常强大,我们相信,很快就能进行全蛋白质组学研究了。而且,对某个亚蛋白质组(比如某个细胞器或亚细胞结构的蛋白质组)进行研究早就已经不是什么难题了,这已经成为了一种常

质谱仪

最近又有几项有关质谱仪的最新进展问世,这些新成果的出现又给我们的生物大分子研究工作补充了“弹药”。在蛋白质测序方面,基于碰撞诱导裂解技术(CID),又新出现了可变裂解技术(Alternate fragmentation technique),该新技术是基于处在碰撞池中的离子具有的电子传递特性开发出来

等电聚焦和二维凝胶电泳实验

等电聚焦和二维凝胶电泳实验             试剂、试剂盒 样品缓冲液

近期《自然》期刊系列中发挥关键作用的赛默飞质谱仪

   【导语】在2011年10-11月期间,在一级科学刊物Nature和Nature Methods上有14篇科研论文使用赛默飞世尔LTQ-Orbitrap或TSQ质谱仪产生数据,聚焦的主题包括:目标物发现与定量研究,Top-down蛋白质组研究绘制蛋白质异构体,同位素标签方法的精度,提高糖蛋白质组