用BioRad385GradientFormer灌制线性梯度凝胶实验
实验方法原理 丙烯酰胺浓度逐渐增加(凝胶孔径线性减小）的线性梯度凝胶有着更多的优点。首先，线性梯度凝胶可以分离更大分子量范围的蛋白质。其次，它还能将分子量非常相近的蛋白质分离开。最常用于梯度胶的丙烯酰胺浓度是4 % 〜20 % ，但具体采用哪一范围的丙烯酰胺浓度还是取决于被分离的蛋白质的大小（见表2.2和表2.4)。试剂、试剂盒 异丁醇丙烯酰胺仪器、耗材 制胶板 梯度混合 搅拌 子实验步骤 （1）计算每一凝胶灌制模具所需溶液体积。a•用间隔片的厚度乘以要灌制的凝胶的长、宽及胶的数目后，再除以2。b.装好凝胶灌制模具后，加水至所需位置，测量用去的水的体积，并除以2。注意在灌制凝胶前灌胶装置必须是干燥的。(2)从凝胶灌制模具顶部或底部灌入凝胶溶液。①从顶部灌入：a.装好凝胶三明治夹板，如图2.6所示。b•剪短连接管，使流出管的夹子和泵，以及泵与三明治夹板之间的距离最短。连接管与梯度混合器和蠕动泵。用胶条将管的末端固定在玻璃板中间......阅读全文
尿素梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳与折叠分析实验
Goldenberg 和 Creighfn(1984) 引入用含尿素浓度梯度的聚丙烯酰胺凝胶来分析蛋白质的折叠状态。对该操作程序的进一步描述连同技术考虑和理论解释均可见于 Goldenberg(1989) 的文献。下面的操作程序是根据 Goldenberg 和 Creighton(1984) 及 G
Percoll梯度法染色实验
实验材料：染色质试剂、试剂盒：精胺、精咪、Percoll、溶液仪器、耗材：聚碳酸酯离心管实验步骤：1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液，匀浆分离得到的染色质。Perco
甘油梯度法染色实验
实验材料：染色质试剂、试剂盒：甘油、染色质、分离缓冲液溶液仪器、耗材：JS-13 转桶式转头实验步骤：准备 5 份 6 ml 的 10%、20%、30%、40%、50%（v/v）甘油/染色质分离缓冲液溶液。2. 用 JS-13 转桶式转头在 4℃，1000 r/min 离心 50 分钟进行染色质梯度
蔗糖梯度纯化法实验
实验材料：染色质粗品试剂、试剂盒：聚碳酸酯离心管仪器、耗材：Dounce 匀浆器实验步骤：准备两种 18ml，浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液（聚胺，水相或己二醇法的缓冲液），然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中，用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品
ABIVeriti――真正意义上的温度梯度PCR仪
ABI作为PCR仪中最值得信赖的品牌，引领了PCR仪一系列创新性设计革命。Veriti系出名门，秉承了一贯的可靠性，并是真正意义上的梯度多重控温(六合一)梯度PCR仪。 温度梯度PCR仪进展 温度梯度PCR仪最先由Eppendorf公司在1998年研发成功推向市场(Mastercyc
蛋白质组技术的研究进展（一）
大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年，流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代，许多DNA序列信
胰岛素亲和层析实验
试剂、试剂盒部分纯化的胰岛素受体NaCl胰岛素琼脂糖溶液 F溶液 G溶液 H仪器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 浓缩器银染试剂盒实验步骤材料与设备部分纯化的胰岛素受体，得自 WGA-琼脂糖柱层析（见本单元实验 3)NaCl(5mol/L)胰岛素琼脂糖（~2 ml 预装胶）（SigmaC
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
试剂、试剂盒 丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵 NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇（2-丁醇)二乙醚 NaOAcMgCl2 乙醇TBE 甲酰胺加样缓冲液 TE仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤 材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵（10%;w/v)N,
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验 试剂、试剂盒 丙烯酰胺 双丙烯酰胺 尿素
用制备凝胶电泳纯化寡核苷酸实验
试剂、试剂盒丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵NNN'N'-四甲基乙二胺合成的互补寡核苷酸仲丁醇（2-丁醇)二乙醚NaOAcMgCl2乙醇TBE甲酰胺加样缓冲液TE仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩仪实验步骤材料与设备丙烯酰胺双丙烯酰胺尿素过硫酸铵（10%;w/v)N,N,N'
变性梯度凝胶电泳技术的技术原理
双链DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的DNA 片段能够被区分开，但同样长度的DNA 片段在胶中的迁移行为一样，因此不能被区分。DGGE/TGGE 技术在一般的聚丙烯酰胺凝胶基础上，加入了变性剂（尿素和甲酰胺）梯度，从而能够把同样长度但序列不同的DN
双向电泳操作步骤——第一向凝胶
实验材料蛋白质试剂、试剂盒丙烯酰胺TEMED磷酸过硫酸铵溴酚蓝NaOH仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 在干净的1.5 mm 内径的凝胶柱管上作好标记以指示应灌制凝胶柱的髙度。用橡皮筋将凝胶柱管捆绑成束，在一水平面上垂直竖起管束，从其顶部向下推压，使各柱管的底部平齐。2. 用三、四层Paraf
胰岛素亲和层析实验
胰岛素亲和层析实验 试剂、试剂盒 部分纯化的胰岛素受体 NaCl 胰岛素琼脂糖
变性聚丙烯酰胺凝胶的胶室制备
在凝胶灌制中胶室底部漏胶不可避免，需要准备较多的胶液以防漏胶过多而灌胶不足。胶室的制备对漏胶多少极为重要。一般胶室玻璃板间两边放置有间隔片而底部无间隔片，而底部是最容易发生漏胶的地方。为防止漏胶常用方法有用胶布封边或用琼脂糖凝胶封底。用胶布封边时胶布一遇水就失去粘性，特别是在玻璃板的两个底角，常
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（二）
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很长一段时间内作为各种生化分析中分辨完整蛋白质的备选方法。这主要是因为对于疏水性很强的蛋白质,SDS 是最好的增溶去污剂，所有的蛋白质，包括碱性很强的蛋白质，都向同一方向移动, 分离取决于各自的表观分子质量 (通常称为分
蛋白质SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳2
（4）10% 过硫酸铵，5ml（0.5g过硫酸铵, 加5ml蒸馏水, 新鲜配置），-20℃保存一个月左右。（5）10% （w/v）SDS，10g SDS加蒸馏水100ml, 室温保存。（6）10% TEMED 0.1ml TEMED , 加0.9 ml蒸馏水。（7） 2×上样缓冲液（10ml）：0.
液相色谱仪离子交换色谱通常对线性梯度的要求
通常对线性梯度的要求是（1）洗脱液的总体积应足够大，一般梯度至少要四倍床体积，使分离的各个峰有较好的分辨率；（2）梯度上限要有足够强的洗脱能力，使吸附的最紧密的物质也能够从柱子上被洗脱下来；（3）梯度的斜率不应太大，以确保各峰能够分开，但又不应太小，以免峰形过宽甚至形成拖尾；一般认为，梯度体积越大，
蛋白质分离和分析——免－疫－印－迹－和－免－疫－检－测
实验步骤基 本 方 案 1 液体容器中的蛋白质印迹材 料待分析样品标准分子质量蛋白质，预 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma)转移缓冲液无粉手套Scotch-Brite 垫 片（3M ) 或类似海绵Whatman 3M M 滤纸或类
缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶的概念
中文名称缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶英文名称buffer-gradient polyacrylamide gel定 义凝胶缓冲液成分有pH、离子强度或盐种类等连续或不连续梯度变化的聚丙烯酰胺凝胶。旨在提高凝胶电泳分离的范围和分辨力。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶的定义和用途
中文名称缓冲液梯度聚丙烯酰胺凝胶英文名称buffer-gradient polyacrylamide gel定 义凝胶缓冲液成分有pH、离子强度或盐种类等连续或不连续梯度变化的聚丙烯酰胺凝胶。旨在提高凝胶电泳分离的范围和分辨力。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法
1.胶板准备(1)胶板的清洁是灌胶能否成功的第一关键步骤。反复使用时要将玻璃板和间隔片上凝胶去除干净，彻底洗净后干燥。用乙醇擦拭玻璃板上残留水渍。不能有一点残留的凝胶和残渣，否则灌胶时会产生气泡。(2)灌胶前要对玻璃板分别进行处理。长玻璃用亲和硅烷，短玻璃用剥离硅烷处理，便于电泳结束后长短玻璃板的分
变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法
1.胶板准备(1)胶板的清洁是灌胶能否成功的第一关键步骤。反复使用时要将玻璃板和间隔片上凝胶去除干净，彻底洗净后干燥。用乙醇擦拭玻璃板上残留水渍。不能有一点残留的凝胶和残渣，否则灌胶时会产生气泡。(2)灌胶前要对玻璃板分别进行处理。长玻璃用亲和硅烷，短玻璃用剥离硅烷处理，便于电泳结束后长短玻璃板的分
梯度电泳的概念
中文名称梯度电泳英文名称gradient electrophoresis定 义所用的凝胶浓度从上到下呈梯度改变的凝胶电泳，或所用的缓冲液的成分呈梯度分布的电泳。这两种设计都是为了提高电泳的分辨率或适用范围。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
梯度电泳的定义和应用介绍
中文名称梯度电泳英文名称gradient electrophoresis定 义所用的凝胶浓度从上到下呈梯度改变的凝胶电泳，或所用的缓冲液的成分呈梯度分布的电泳。这两种设计都是为了提高电泳的分辨率或适用范围。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
原代细胞培养后，碘克沙醇梯度溶液分析主要细胞器
试剂和器材： 1. OptiPrepTM（600g/L的碘克沙醇）；2. 匀浆介质：0.25mmol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、20mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；3. OptiPrepTM稀释液：0.25mmol/L蔗糖、6mmol/L乙二胺四乙酸、120mmol/L
液相色谱仪色谱实验相关术语线性和非线性
线性（linearity）仪器（或元件）的输出与输入呈一次函数关系的特性。非线性（non--1inearity）仪器（或元件）的输出与输入不是一次函数关系的特性。
用于基因组文库的真核DNA的部分酶切（制备反应）实验
实验方法原理 通过限制酶部分酶切可将高分子质量 DNA 片段化。在预实验中，建立了适宜的部分酶切条件。对于将用于克隆的基因组 DNA 来说，预实验的结果确定了对其进行制备的三个大规模反应的条件，这将在本方案叙述。实验材料 限制性内切核酸酶基因组 DNAλ 噬菌体 DNA质粒寡聚体试剂、试剂盒 乙酸铵
用于基因组文库的真核DNA的部分酶切（制备反应）实验
实验方法原理 通过限制酶部分酶切可将高分子质量 DNA 片段化。在预实验中，建立了适宜的部分酶切条件。对于将用于克隆的基因组 DNA 来说，预实验的结果确定了对其进行制备的三个大规模反应的条件，这将在本方案叙述。
用氟电极测定F浓度的原理
一.目的1.掌握直接电位法测定的原理及实验方法。2.掌握用标准加入法和Gran作图法测定水中微量氟离子方法。3.学会正确使用氟离子选择性电极和酸度计或离子计。二.原理水中氟含量的高低对人体健康有一定影响, 饮用水含氟为 0.5mg/L左右为宜。氟含量过高易患氟斑牙或发生氟中毒, 而过低又会引起龋齿病
GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹1
[实验原理]免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上，用得最多的材料