蔗糖梯度纯化法实验
实验材料：染色质粗品试剂、试剂盒：聚碳酸酯离心管仪器、耗材：Dounce 匀浆器实验步骤：准备两种 18ml，浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液（聚胺，水相或己二醇法的缓冲液），然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中，用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品溶液轻轻地加到梯度上，用带吊桶式转头的 JS-13 ( Beckman Instruments ) 或 HB-4 ( Sorvall) 离心机在 2500 g 离心 15 分钟。3. 3 ml —份轻轻地从梯度顶部取出样品，取少量用相差显微镜检查染色质的存在情况。4. 收集含染色体的组分在 3000 g 离心 10 分钟。5. 用大约为起始染色体粗品溶液体积 1/30 的分离缓冲液重悬浮染色体，继续下一步研究。......阅读全文
蔗糖梯度纯化法实验
实验材料：染色质粗品试剂、试剂盒：聚碳酸酯离心管仪器、耗材：Dounce 匀浆器实验步骤：准备两种 18ml，浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液（聚胺，水相或己二醇法的缓冲液），然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中，用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品
染色体分离实验——蔗糖梯度纯化法
实验材料染色质粗品试剂、试剂盒蔗糖分离缓冲液仪器、耗材聚碳酸酯离心管实验步骤1. 准备两种 18ml，浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液（聚胺，水相或己二醇法的缓冲液），然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中，用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品溶液轻轻
线粒体分离实验—用蔗糖密度梯度法纯化线粒体
实验材料线粒体悬液试剂、试剂盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA仪器、耗材Bockman SW28 号转头实验步骤1. 在用于 Bockman SW28 号转头（或与其等同的产品）的 Uitradear 离心管中，小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一层 15 ml 1.5 mol
λ噬菌体臂的纯化（通过蔗糖密度梯度离心）实验
实验方法原理 与插入型载体不同，置换型载体的基因组含有中部的填充片段，为了容纳外源 DNA 片段，填充片段必须被去除。该过程一般被称为“λ 臂的制备”，包括用限制酶消化 λDNA 使两臂与填充片段分开以及随后的臂的纯化。
λ噬菌体臂的纯化（通过蔗糖密度梯度离心）实验
实验方法原理 与插入型载体不同，置换型载体的基因组含有中部的填充片段，为了容纳外源 DNA 片段，填充片段必须被去除。该过程一般被称为“λ 臂的制备”，包括用限制酶消化 λDNA 使两臂与填充片段分开以及随后的臂的纯化。实验材料 λ 噬菌体 DNA试剂、试剂盒 EDTA乙醇正丁醇乙酸钠蔗糖凝胶上样缓
λ噬菌体臂的纯化（通过蔗糖密度梯度离心）实验
与插入型载体不同，置换型载体的基因组含有中部的填充片段，为了容纳外源 DNA 片段，填充片段必须被去除。该过程一般被称为“λ臂的制备”，包括用限制酶消化 λDNA 使两臂与填充片段分开以及随后的臂的纯化。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理与插入型载体不同，置换型载体的基因组
连续梯度法纯化闭环DNA
实验概要本实验介绍了氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法(即连续梯度法)纯化闭环DNA的原理及操作步骤等。实验原理用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于线性 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。许多年来，纯化大量质粒 DNA 的首选方法是 CsCl
蔗糖梯度为何界面模糊
蔗糖每降低一个浓度梯度,其数量及就降低一个,即低浓度是其相邻的高浓度的1/10,而当这个浓度梯度小数小到一定程度时,就大约相等了,因而一会后界面就会变得模糊了.
梯度离心时为什么会形成蔗糖梯度？
蔗糖溶液在超速离心的状态下，会形成一个连续的梯度。虽然它是溶液，但溶质毕竟是有重量的。你在生活中仔细观察的话，把墨水超速离心，也能看到一个连续的浓淡梯度，原理是差不多的。分子量越大，形成浓度梯度的离心转速就较小一些。除了蔗糖以外，还有氯化铯的浓度梯度，这些都是为了分离不同分子量的物质所存在的。
Percoll梯度法染色实验
实验材料：染色质试剂、试剂盒：精胺、精咪、Percoll、溶液仪器、耗材：聚碳酸酯离心管实验步骤：1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液，匀浆分离得到的染色质。Perco
甘油梯度法染色实验
实验材料：染色质试剂、试剂盒：甘油、染色质、分离缓冲液溶液仪器、耗材：JS-13 转桶式转头实验步骤：准备 5 份 6 ml 的 10%、20%、30%、40%、50%（v/v）甘油/染色质分离缓冲液溶液。2. 用 JS-13 转桶式转头在 4℃，1000 r/min 离心 50 分钟进行染色质梯度
各级分蔗糖酶活性测定及纯化率计算实验_考马斯亮蓝法
用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度，本实验中，蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min，每产生1毫克葡萄糖所需酶量。本实验旨在测定各级分的蛋白质含量及蔗糖酶活性。实验方法原理用测定生成还原糖( 葡萄糖和果糖) 的量来测定蔗糖水解的速度, 本实验中, 蔗糖酶的活力单位指在一定
通过甘油分级梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 本方案适用于制备噬菌体原种、制备噬菌体颗粒（用来获得 DNA 进行亚克隆）以及制备 λ 噬菌体臂。实验材料 λ 噬菌体颗粒悬浮液试剂、试剂盒 EDTA甘油SM胰 DNase Ⅰ仪器、耗材 Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号离心管实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液E
通过甘油分级梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
本方案适用于制备噬菌体原种、制备噬菌体颗粒（用来获得 DNA 进行亚克隆）以及制备 λ 噬菌体臂。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案适用于制备噬菌体原种、制备噬菌体颗粒（用来获得 DNA 进行亚克隆）以及制备 λ 噬菌体臂。实验材料λ 噬菌体颗粒悬浮液试剂、试剂盒ED
通过甘油分级梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 本方案适用于制备噬菌体原种、制备噬菌体颗粒（用来获得 DNA 进行亚克隆）以及制备 λ 噬菌体臂。 实验材料 λ 噬菌体颗粒悬浮液
吸附法纯化病毒实验
实验方法原理 实验材料 待纯化的病毒试剂、试剂盒 凝胶材料仪器、耗材 烧杯实验步骤 磷酸钙凝胶：这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶，由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物，用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮，置千 4℃ 4~5
酵母蔗糖酶的制备实验——研磨法
蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranoside fructohydrolase ) ( EC. 3 . 2 . 1 . 26 ) 特异地催化非还原糖中的α-呋喃果糖苷键水解, 具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖, 也能催化棉
各级分蔗糖酶活性测定－及纯化率的计算实验
实验方法原理用测定生成还原糖( 葡萄糖和果糖) 的量来测定蔗糖水解的速度, 本实验中, 蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min，产生1 毫克葡萄糖所需酶量。 用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量, 比活力为每毫克蛋白质的活力单位数。实验材料蛋白质试剂、试剂盒乙酸缓冲液葡萄糖蔗糖二硝基水杨酸仪器、耗材分
各级分蔗糖酶活性测定－及纯化率的计算实验
考马斯亮蓝法 实验方法原理 用测定生成还原糖( 葡萄糖和果糖) 的量来测定蔗糖水解的速度, 本实验中, 蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min，产生1
吸附法纯化病毒实验_凝胶吸附法
实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒凝胶材料仪器、耗材烧杯实验步骤磷酸钙凝胶：这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶，由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物，用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮，置千 4℃ 4~5小时使之充分沉淀后应用
染色体分离实验——甘油梯度法
实验材料染色质试剂、试剂盒甘油 染色质分离缓冲液溶液仪器、耗材JS-13 转桶式转头实验步骤1. 准备 5 份 6 ml 的 10%、20%、30%、40%、50%（v/v）甘油/染色质分离缓冲液溶液。2. 用 JS-13 转桶式转头在 4℃，1000 r/min 离心 50 分钟进行染色质梯度沉降
染色体分离实验——Percoll梯度法
实验材料染色质试剂、试剂盒精胺精咪Percoll 溶液仪器、耗材聚碳酸酯离心管实验步骤1. 在体积为 10 ml 分离得到的染色质物质中加入精胺和精咪至终浓度分別为 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液，匀浆分离得到的染色质。Percoll 溶液：
DNA纯化实验——PCR清洁试剂盒纯化法
实验方法原理硅胶膜可在高盐条件下结合DNA，又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性，所以被分离开来。 实验材料PCR产物试剂、试剂盒PCR清洁试剂盒仪器、耗材96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板实验步骤一
氯化铯溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA实验
实验方法原理 用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。实验材料 粗制质粒试剂、试剂盒 CsCl CsCl 再分带溶液乙醇溴化乙锭 石蜡油仪器、耗材 皮下注射针头折光仪一次性注射器实验步骤 一、材料1.
超速离心法纯化病毒实验——密度梯度离心
实验方法原理病毒的密度与细胞碎片不同，用梯度制备仪制成适宜的介质梯度如蔗糖梯度或 CsCl 密度梯度，将病毒悬液加到密度梯度的上层，进行超速离心，离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其自身密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中，吸出含有病毒的沉淀带，即可得到相当纯净的病毒。实验材料待纯化的病毒试剂、
吸附法纯化病毒实验——红细胞吸附法
实验方法原理用于某些可与红细胞吸附的病毒的浓缩，如正粘病毒和副粘病毒，由于红细胞吸附法是特异的，故可达到浓缩并纯化的目的。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液鸡红细胞悬液仪器、耗材烧杯水浴锅实验步骤用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞，常用的是鸡红细胞。基本步骤为：① 1%~3% 鸡
DNA纯化实验——DNA凝胶回收试剂盒纯化法
DNA纯化可用于：（1）获得高纯度的DNA；（2）浓缩DNA；（3）测序、遗传信息分析等分子生物学应用。实验方法原理本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至 8 μg DNA（70 bp-10 Kb），回收率为 60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中溶解，其中的保护剂能防止线状 D
氯化铯溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA实验（一）
用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。连续梯度法实验方法原理用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DN
通过CsCl－等密度梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 CsCl 等密度梯度离心用于制备最高纯度的感染性 λ 噬菌体颗粒，它没有任何细菌核酸的污染。从这种噬菌体颗粒中提取的 DNA 可用作 DNA 测序的模板、亚克隆至质粒载体和产生用于原位杂交的探针。这种方法第二个优点是，由它所
氯化铯溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA实验（二）
实验方法原理通过不连续或预先形成的氯化铯（CsCl）梯度离心，可在离心管中获得含有不同浓度 CsCl 的溶液分层，样品位于中层（三级梯度法）或底层（两级梯度法）。实验材料粗制质粒试剂、试剂盒CsCl溴化乙锭TE仪器、耗材皮下注射针头折光仪一次性注射器实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液CsCl ( 固