蛋白质分离和分析——免疫印迹和免疫检测
实验步骤基 本 方 案 1 液体容器中的蛋白质印迹材 料待分析样品标准分子质量蛋白质，预 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma)转移缓冲液无粉手套Scotch-Brite 垫 片（3M ) 或类似海绵Whatman 3M M 滤纸或类似物转 移膜：0.45um 硝 酸 纤 维 素 膜（Millipore 或 Schleicher& Schuell)， P V D F 膜(Millipore Immobilon P ) ，中 性 尼 龙 膜（Pall Biodyne A )，或者正电荷尼龙膜(Pall Biodyne B ; Bio-Rad Zetabind)电 印 迹 装 置（E C 装置， Bio-R a d 或 Hoefer)不可擦拭圆珠笔或软笔芯铅笔1.准备抗原样品，用小型或标准大小单向或双向凝胶分离蛋白质，上样时将预染的或生物素化的标准分子质量蛋白......阅读全文
蛋白质分离和分析——免－疫－印－迹－和－免－疫－检－测
实验步骤基 本 方 案 1 液体容器中的蛋白质印迹材 料待分析样品标准分子质量蛋白质，预 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma)转移缓冲液无粉手套Scotch-Brite 垫 片（3M ) 或类似海绵Whatman 3M M 滤纸或类
蛋白质分离和分析——免－疫－亲－和－层－析
详细阐述利用亲和层析分离蛋白质的过程，进行蛋白质分析时，需将此规模缩小至微量离心管中进行免疫沉淀过程，对于单一的蛋白质或由相同亚基组成的蛋白质，经单向凝胶电泳后检测到单一的 蛋 白 质 条 带对荧光染色法进行了阐述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的检测。为了确定蛋白质是否是特异性抗原，可采用相对应的抗体进
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的纯化
实验步骤基 本 方 案 1 用透析和凝胶过滤层析法纯化 IgM此 法 纯 化 的 IgM 可达到较好纯度，可用于酶解、异 硫 氰 酸 盐 荧 光 素（FITC) 标记 、生物素标记或放射性标记。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)腹 水 或 单 克 隆 抗 体（MAb) 上 清（单 元 1.4)
免－疫－球－蛋－白－M(IgM)和－免－疫－球－蛋－白－D(IgD)－的纯化实验
实验步骤备 选 方 案 1 硫 酸 铵 沉 淀 法 纯 化 IgM此法适用于多数 IgM 抗体，尤其是一些在水中不能形成沉淀的 IgM 抗体。附 加 材 料（其 他 材 料 见 基 本 方 案 1 )饱和硫酸铵（SAS)硫酸铵结晶（CAS)硼酸缓冲液，可选备 选 方 案 2 甘 露 聚 糖 结 合
免－疫－复－合－物－方－法－检－测－酪－氨－酸－蛋－白－激－酶
实验步骤基 本 方案 酪 氨酸 蛋白 激酶 的免 疫 沉淀 和自 身 磷 酸化 检 测以下步骤可以釆用淋巴或非淋巴细胞、原代细胞或培养的细胞系、活化或非活化的细胞。材 料（带 V 项 目 见 附 录 1)待检测的细胞 冰预冷的 PBS含蛋白酶抑制剂的 I X 细 胞 裂 解 液（新鲜配置并于冰上保存
酶－联－免－疫－吸－附－实－验2
十 字 交 叉 连 续 稀 释 分 析 法 （criss-cross serial-dilution analysis) 测定试剂最适浓度实验步骤展开
免－疫－球－蛋－白－G－(IgG)－片－段－的－水－解
一个新的抗体需要片段化的时候往往要进行摸索性的试验。选择反应时间的时候宁可保留部分抗体不被完全降解，这样可以避免蛋白酶过分裂解后导致抗体结合位点的破坏 。实验步骤木 瓜 蛋 白 酶 水 解 IgG 成 Fab 片段摸索性试验此 法 适 用 于 小 鼠（任何亚类）、大鼠、人 、山羊、绵羊、马 、鸡 、
免－疫－球－蛋－白－融－合－蛋－白－的－构－建
实验步骤 基 本 方 案 1 免疫球蛋白融合蛋白的构建材 料编码靶基因的 D N A展开
抗－磷－酸－化－酪－氨－酸－的－印－迹－检－测
实验步骤基 本 方 案 抗 磷 酸 化 酪 氨 酸 印 迹 检 测 的 准 备 及 分 析材 料一抗： lmg/m l 4 G 1 0 抗磷酸化酪氨酸单抗（UpstateBiotechnology) 或类似抗体P B S溶于 PBS/0. 0 2 % (m / V ) 叠 氮 钠 的 5 0 % (
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（一）
一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，
【抗疫药】羟氯喹连续合成和连续分离
一、背景介绍 新型冠性病毒疫情蔓延全球，急需寻找有效药物。除了瑞德西韦，氯喹与羟氯喹同时被WHO和美国总统点名加入海外抗疫候选药物单用或组合应用的多国多中心临床试验（Solidarity Clinical Trial）。 美国选用氯喹/羟氯喹作为新型冠性病毒治疗候选药物的原因在于这是
T－C－R－库－的－抗－原－谱－/－免－疫－扫－描－技－术－分－析
实验步骤基 本 方 案 1 人 和 小 鼠TCR受体库多样性的免疫扫描技术分析材 料展
干细胞的鉴定实验——免－疫－电－镜－胶－体－金－标－记－技－术
实验步骤免 疫 电 镜 胶 体 金 标 记 技 术免疫电镜技术是利用抗原抗体特异性结合的原理，在细胞超微结构水平上定位、定性和定量，原位显示抗原大分子的技术。 1971 年 Faulk 等将胶体金标记抗体技术应用到电镜中，开始了免疫电镜胶体金标记技术。该技术的优点是：胶体金颗粒致密，易于辨认 ；定位
酶－联－免－疫－吸－附－实－验——抗体夹心ELISA法检测可溶性抗原
实验步骤抗 体 夹 心 ELISA 法检测可溶性抗原该检测方法比抗原直接结合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2〜5 倍（图 I.1. 3)。附 加 材 料（其他材料见基本方案）特 异 性 抗 体（单 克 隆 或 多 克 隆 ）或 者 来 自 抗 血 清 、腹 水 或 杂 交 瘤 上 清 液（单
酶－联－免－疫－吸－附－实－验——间－接－ELISA－法检测特异性抗体
实验步骤 该检测方法使用毫克级的纯化或半纯化抗原，能筛选抗血清和杂交瘤上清液中的特异 性 抗 体（图 1.1.1) 。 Img 纯化抗原可用于 80〜800 个微量滴定板的筛选。一、材 料显色剂：碱 性 磷 酸 酶 标 记 的 蛋 白 A (Sigma 公 司），碱 性 磷 酸 酶 标 记 的 蛋
脂筏的分离和应用（一）
基本方案通过蔗糖梯度浮选 法 制备 去 污剂 抗 性的 膜 并 通 过免 疫 印 迹 对蛋 白质进行分析材 料细胞，贴壁或非贴壁N E /P 缓冲液，单独或包含以下一种或多种组分：1 % 、 2 % 或 5 % (W V ) TritonX-IOO0.lmol/L 碳酸钠， pHll5 % 、 3
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（三）
四、化学发光信号4.1 信号捕捉虽然化学发光蛋白质印迹法十分常用，但是对于难于捕获的信号的捕捉却很棘手。蛋白质印迹法要用到一系列需要技巧的技术，因此许多因素都会导致无法捕捉到信号。由于变量较多 (表 33. 2)，问题印迹的问题诊断和排除就如同大海捞针一样困难。传统的方案在检测某一个蛋白质时通常
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测2
四、化学发光信号4.1 信号捕捉虽然化学发光蛋白质印迹法十分常用，但是对于难于捕获的信号的捕捉却很棘手。蛋白质印迹法要用到一系列需要技巧的技术，因此许多因素都会导致无法捕捉到信号。由于变量较多 (表 33. 2)，问题印迹的问题诊断和排除就如同大海捞针一样困难。传统的方案在检测某一个蛋白质时通常都是
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测
实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测
实验步骤一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中，蛋白
和疫情赛跑，质谱战“疫”在行动
2020年突如其来的新冠疫情不仅给公共卫生造成了极大负担，更直接影响和重塑了传染病的研究模式。新冠肺炎疫情持续期间，相关科研论文产出呈现井喷之势。在Pubmed搜索“Covid-19 or SARS CoV-2”，结果显示相关论文数量为145112篇。组学技术在传染病的表征、致病机制、临床检测、疫苗
中国部分疫源地宿主及环境中鼠疫噬菌体的分离和鉴定
6月18日，青海省科技厅组织专家对青海省地方病预防控制所、中国疾病预防控制中心传染病预防控制所和青海省疾病预防控制中心合作完成的“中国部分鼠疫自然疫源地野生型鼠疫噬菌体及其宿主菌的微生态学研究”项目进行了成果评价。专家委员会认为，项目对于全国鼠疫预防控制措施、鼠疫治疗药物筛选、噬菌体和宿主菌相互
蛋白质分离和分析
基 本 方 案 可 溶 性 或 膜 结 合 抗 原 的 分 离材 料抗 体（Ab)-Sepharose (单兀 12. 2)活 化 的（对照）Sepharose填料，用于制 备 A b -Sepharose填 料（单 元 12. 2)，但去除了抗体或偶联时用无关抗体替代细胞或匀浆的组织T S A 溶
脂筏的分离和应用1
实验步骤基本方案通过蔗糖梯度浮选 法 制备 去 污剂 抗 性的 膜 并 通 过免 疫 印 迹 对蛋 白质进行分析材 料细胞，贴壁或非贴壁N E /P 缓冲液，单独或包含以下一种或多种组分：1 % 、 2 % 或 5 % (W V ) TritonX-IOO0.lmol/L 碳酸钠， pHll5 %
疫荧光技术间接法测抗体实验步骤
间接法测抗体⑴基本原理染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的
化学发光免疫分析(CLIA)技术原理和类型/增强发光酶免...
化学发光免疫分析(CLIA)技术原理和类型/增强发光酶免疫分析化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放
技术答疑：放免和酶联免疫试验的区别
先说区别：（1）放射免疫分析（RIA）通过放射活性分子共价交联至抗体或抗原上，免疫反应后测定放射活性分子的放射信号来定量检测相应抗体或抗原等，可用于测定包括病毒、细菌、寄生虫、肿瘤以及小分子药物等的多种抗原和抗体。由于该方法特异性好，灵敏度高，且仪器自动化，操作简便，样品制备简单等，因而自50年代末
助力战“疫”－滴露抗疫医基金成立
近日，由国家卫生健康委员会、中国友好和平发展基金会联合利洁时集团旗下滴露品牌共同成立了“滴露抗疫医基金”。该基金旨在对疫情防控过程中做出突出贡献的医护人员进行专项奖励。 截止2月18日，国家卫生健康委员会已经派出3.2万余名医务人员驰援湖北武汉。在这场战“疫”中，医务人员做出了巨大的努力与牺牲