亲和层析实验：常规方法（四）
2.配基吸附对于多肽、蛋白质或核酸，通常采用的共价吸附是, 通过胺反应将配基上的氨基吸附在树脂表面。溴化氰活化表面与伯胺发生反应形成亚胺碳酸盐是最常见的胺反应吸附。最典型的伯胺是赖氨酸侧链（Hermanson,1992;PorathetaU1%7)(详见第 28 章）。这种活化形式的优点在于可以使用商业化的预活化树脂，与蛋白质的偶联效率几近 100%。虽然过去一直普遍使用这种方法，但也存在许多缺点:①连接导致配基从树脂上脱落;②配基直接吸附到介质表面, 无间隔;③由于溴化氰具有毒性，需要增加安全防范。而且，可能需要通过交联限制这种固定方式存在的缺陷 (KorpelaandHinkkanen，1976;KowalandParsons，1980)。酰胺键的共价吸附是一种替代溴化氰活化作用的方法，可以通过活化的羧基表面 (如羟基琥珀酯) 形成，或者用偶联试剂对羧基进行原位活化，如冲乙基 N-(3-二甲氨基) 碳二亚胺 ......阅读全文
DNA亲和层析的技术方法
DNA亲和层析是利用亲和层析的原理与技术分离能与特定DNA序列相互作用的技术方法。总的过程包括两步，即：一、将某一类细胞中所有的蛋白质过含有该类细胞各种片段的DNA层析柱，用低浓度盐溶液洗去不与DNA作用的绝大多数蛋白，用中浓度盐溶液洗脱大部分与能DNA相互作用的蛋白。二、将第一步得到的能与DNA相
序列特异性DNA结合蛋白亲和层析纯化实验_DNA亲和层析法
实验材料制备性的DNA亲和层析树脂试剂、试剂盒缓冲液Z或其他柱缓冲液（如缓冲液Ze或TM)配制时含不同的KCl浓度（从缓冲液 Z 0.1 mol L KCl 至缓冲液 Z 1 mol L KCl对缓冲液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分纯化的蛋白质组分非特异性的竞争DNA柱再生缓冲液柱储存缓
亲和层析原理及分析方法
亲和层析的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中，特异的废物(S')才能和一定的酶(E)结合，产生复合物(E－S')一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生
实验室机械破碎样品的常规方法和设备
组织高速匀浆仪 通常破碎体积大的植物或者动物组织需要用可旋转、带有刀片的匀浆仪或者搅拌器 .这些仪器通常通过一个电动的马达带动不锈钢可旋转切割刀片,可以从顶部或者底部启动,这个过程中产生很少热量,但是样品需要置于冰上。匀浆仪的转速和刀片的尺寸,需要根据样品的体积和组织大小来确定。大部分匀浆仪产
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
步骤一 偶联寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步骤二 核酸亲和层析 实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 DNA 偶联至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通过它们本身的碱基实现的。从理论上讲，该方法也许干扰最佳结合序列的接近路径，但是这样一个简单的方法一直被广泛地成功应用。偶联效率的定量检测可经 A260 值测定评估，或者更精确地从偶联介质上水解核酸和进行磷酸盐测定。实
溶解受体的凝集素亲和层析实验
试剂、试剂盒 麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖溶解的胰岛素受体牛血清白蛋白[125I] 胰岛素（受体级）猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 D溶液 E结合缓冲液仪器、耗材 一次性小型塑料柱实验步骤 材料与设备麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖（~2.5 ml 沉积的微球）（Vector Laborat
溶解受体的凝集素亲和层析实验
本实验介绍关于溶解受体的凝集素亲和层析过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖溶解的胰岛素受体牛血清白蛋白[125I] 胰岛素（受体级）猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 D溶液 E结合缓冲液仪器、耗材一次性小型塑料柱实验步骤材料与设
亲和层析法去除交叉反应性抗体实验
本节介绍一种利用结合细菌蛋白质的基质去除粗制免疫球蛋白中与细菌编码蛋白质发生反应成分的方法（de Wet et al.1984)。该方法也适用于利用培养的细胞或组织抽提物去除交叉反应抗体。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒缓冲液和
溶解受体的凝集素亲和层析实验
溶解受体的凝集素亲和层析实验 试剂、试剂盒 麦胚凝集素（WGA)-琼脂糖 溶解的胰岛素受体
亲和层析法去除交叉反应性抗体实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 细胞裂解缓冲液 NaOH Tris-缓冲盐溶液 TBS Triton X-100 溶菌酶
亲和层析法去除交叉反应性抗体实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液细胞裂解缓冲液NaOHTris-缓冲盐溶液TBSTriton X-100 溶菌酶胰 DNA 酶 I制备用于文库筛选的抗体大肠杆菌培养液仪器、耗材 离心和转子亲和层析柱溴化氢活化的 Sepharose 4B实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试剂的组分请见附录 12将贮
亲和层析法制备溶菌酶的方法介绍
亲和层析法是利用蛋白质和酶的生物学特异性，即蛋白质或酶与其配体之间所具有的专一性亲和力而设计的色谱技术。酶一底物复合物形成之后，在一定的条件下分离复合物便得到纯净的酶。常常使用的吸附剂为几丁质及其衍生物，如：几丁质粉、羧甲基几丁质、几丁质包埋纤维素、脱氨几丁质粉、N-酰化壳聚糖、脱氨再生几丁质凝
细胞亲和层析的技术方法和步骤
DNA亲和层析是利用亲和层析的原理与技术分离能与特定DNA序列相互作用的技术方法。总的过程包括两步，即：一、将某一类细胞中所有的蛋白质过含有该类细胞各种片段的DNA层析柱，用低浓度盐溶液洗去不与DNA作用的绝大多数蛋白，用中浓度盐溶液洗脱大部分与能DNA相互作用的蛋白。二、将第一步得到的能与DNA相
脑片膜片钳实验方法（四）
5、突触反应的记录现在许多实验室都开始应用膜片钳技术记录培养神经元间、组织片中和异体移植组织中的突触传递。与尖电极记录相比，它具有明显的优势。如，记录的成功率较高，较高的信噪比，能较准确地钳制胞电位等。膜片钳甚至可以应用于在位突触活动的记录(Covey, 1996)。记录自发突触后反应 自发的
解读“出凝血”常规检测（凝血四项）
出血和凝血问题与多种疾病相关，但是约90％的出凝血问题可以由血凝学实验室给予诊断。目前常规的检测项目有凝血四项和血小板计数，这些简单的检查，要是理解到位，作用不可小觑。凝血四项：凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial
常规实验仪器有哪些？
常规实验仪器1、干燥箱2、电炉3、低温冰箱/保存箱4、摇床（振荡器）5、灭菌器6、恒温水浴/油浴7、超净工作台8、培养箱
常规实验仪器有哪些？
常规实验仪器1、干燥箱2、电炉3、低温冰箱/保存箱4、摇床（振荡器）5、灭菌器6、恒温水浴/油浴7、超净工作台8、培养箱
常规实验仪器有哪些？
常规实验仪器1、干燥箱2、电炉3、低温冰箱/保存箱4、摇床（振荡器）5、灭菌器6、恒温水浴/油浴7、超净工作台8、培养箱
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验2
核酸亲和层析实验材料样品蛋白质试剂、试剂盒平衡缓冲液（Tris-HClKClEDTA）非特异 DNA实验步骤在上样品液到核酸亲和柱之前，建议首先采用其他的纯化方法，如硫酸铵沉淀、离子交换或凝胶过滤层析等富集目的蛋白。这样可以除去绝大多数的污染物，并减少非特异结合。亲和层析柱一般来讲是短而粗的，例如长
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞 试剂、试剂盒 二硫苏糖醇 谷胱甘肽洗脱缓冲液 磷酸
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
实验材料 表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒 二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液TritonX-100DNase溶菌酶RNase凝血酶、肠激酶或 Xa 因子溶液SDS-聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 SorvallSS-34 转头或相当的转头谷胱甘肽-琼脂糖树脂皮下注射针头实验步骤
谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验
pGEX 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S 转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料表达 GST 融合蛋白的大肠杆菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇谷胱甘肽洗脱缓冲液磷酸缓冲钠盐溶液Tri
核酸亲和层析法纯化蛋白质实验1
核酸亲和柱的应用极大地促进了核酸结合调节蛋白特性的研究，这些蛋白质涉及基因表达、染色体修复和复制、基因重组等的调控。核酸结合蛋白可以结合单链 DNA、双链 DNA 或 RNA。DNA 结合蛋白结合 DNA 可以是序列特异的，也可以是非特异的。此外，含有特异寡核苷酸的亲和树脂能用于某些酶的分离，这些酶
常规细胞培养方法
原理 1 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱
厌氧菌的常规培养方法
厌氧菌培养是可以生长在没有氧气条件下的生物，有些厌氧菌可以在有氧气条件下生产，属于兼性厌氧；有些甚至不能容忍微量氧气的环境；属于专性厌氧。厌氧菌是非常普通的；很多都是人体正常菌群的一部分，厌氧微生物转地球生物群的50%；在医疗系统感染中厌氧菌的检出率至少在65%以上。厌氧菌属于人体内主要的正常
细胞培养常规方法
. 冻存细胞的复苏应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。2. 传代:对于贴壁细胞
快速检测常规采样方法
（1）散装食品①液体、半液体食品采样 以一池或一缸为一采样单位，即每一池或一缸采一份样本，采样前先检查样本的感官性状，然后将样本搅拌均匀后采样。如果池或缸太大，搅拌均匀有困难，可按池或缸的高度等距离分为上、中、下三层，在各层的四角和中间各取等量样本混合后，再取检验所需样本。对流动的液体样本，可定时
PCR产物常规纯化方法
大批量、廉价、用于测序的PCR产物纯化方法--PEG沉淀 最近，摸索了一下PEG沉淀PCR产物的方法，贴出来，与大家共享。 目的：探索一种方法，能将PCR产物大批量地、廉价地、纯度比较高地纯化出来，并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA，用于DNA测序。 有文献和方法说，不同浓度的PEG能沉淀不
常规红外样品制备方法
一、固体试样：常用的方法有压片法、石蜡糊法和薄膜法。 （1）压片法： 一般红外测定用的锭片为直径13 mm、厚度约1 mm左右的小片。取样品（约1 mg）与干燥的KBr（约200 mg）在玛瑙研钵中混和均匀，充分研磨后（使颗粒达到约2 μm），将混合物均匀地放入固体压片模具的顶模和底模之