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实验方法原理 接种同源或异源细胞—比如来自小鼠胚胎的细胞。待受测细胞克隆培养之前，中等密度，用射线照射或药物作用使其失去增殖能力。实验材料 第二代13天胎龄小鼠胚胎成纤维细胞丝裂霉素C仪器、耗材 克隆培养用培养基X射线或6GCo源实验步骤 1. 用胰蛋白酶消化原代培养的胚胎成纤维细胞（见方案 12.6、方案 13.2），以每毫升 105 个细胞再种入培养瓶中。2. 用以下其中之一的方法阻止进一步分裂：(a)通过放射处理i)原培养瓶中，细胞暴露于 60 Gy 照射细胞，用 X-光机或 γ 射线源 如 60Co（X 射线或 60Co源，能在 30 min 或更短时间内释放 30 Gy （可以取代丝裂霉素C））。ii)消化后细胞悬液，细胞暴露于 60 Gy 照射细胞，用 X-光机或 γ 射线源 如 60Co。然后以 1×105 ml 接种，或将照射过的细胞保存在 4°C，最长到 5 天。(b)通过丝裂霉素 C （丝裂霉素C，100 μ......阅读全文
实验概要本实验方法介绍了miPS建系的详细操作流程。主要试剂所用试剂盒： 逆转录病毒体系试剂盒 MIPD0-000-001慢病毒体系试剂盒 MIPD-000-02规格：5次 &nbs
实验概要hESCs的分离及建系主要试剂hESCs培养液、DPBS、0.25%Trypsin、1 mg/mL胶原酶Ⅳ、丝裂霉素C、0.1%明胶、囊胚培养液G2、胚胎冻存液、细胞基础培养液主要设备35 mm培养皿、4孔培养板、滤器、注射器针头；2 mL、5 mL、10 mL、15 mL、25 mL、50
实验概要人诱导性多能干细胞诱导主要试剂DPBS、0.25% Trypsin、1mg/mL胶原酶Ⅳ、丝裂霉素C、0.1%明胶、Polybrene、PE-TRA-1-60抗体、hESCs培养液、细胞基础培养液条件培养液hiPSCs的诱导是一个长时间的过程，在饲养层质量下降之后，可以选择使用条件培养液。条
人类干细胞通常是在一层饲养细胞上培养的，据认为，这可为细胞提供必需的营养物质，并有助于防止细胞分化。最近，一项新的研究对这种根深蒂固的做法提出了挑战。延伸阅读：更安全的干细胞培养新方法。 众所周知，干细胞是很难维持和培养。像所有的真核细胞一样，它们对养分的有效性、pH值、温度、氧气和二氧化碳的
原代肿瘤细胞的选择性培养：汇合饲养层肿瘤细胞筛选实验饲养层技术取决于通过其他接触抑制细胞形成的单层预防成纤维细胞的过度生长。 饲养层技术并不能选择性抑制正常上皮细胞， W为正常表皮细胞和正常乳腺上皮都能在 汇合的伺养层上形成克隆。然而，神经胶质瘤研究的结果表明，在同种饲养层上选择培养等同的正常细胞是
实验概要monESCs传代、冻存及复苏主要试剂DMEM/F12培养液、monESCs培养液、冻存液C、1 mg/mL胶原酶Ⅳ主要设备15 mL离心管，5 mL、10 mL移液管，冻存管、6孔培养板、倒置显微镜实验步骤传代前一天首先准备好MEF饲养层细胞，饲养层细胞要求密度为1.2×104～1.5×1
来自美国加州大学旧金山分校，格莱斯顿研究院等处的研究人员发现了对于诱导多能干细胞发育十分关键的环境因素，这一发现将为了解这些细胞如何形成提供新的观点，也将加速干细胞再生医学的发展。相关成果公布在Cell Stem Cell杂志上。 领导这一研究的是格莱斯顿研究院的资深研究员山中伸弥，这
实验方法原理在指数生长中期，用丝裂霉素C处理饲养层细胞，将细胞培养形成汇合的单层。通过胶原蛋白酶消化从活检标本分离肿瘤细胞，或者用胰蛋白酶消化从原代培养物获得肿瘤细胞，然后将肿瘤细胞接种到汇合的单层上（图24.1）。上皮性肿瘤细胞可以在3周至3个月内形成克隆。纤维肉瘤和神经胶质瘤并不总是形成克隆，而
实验方法原理 在指数生长中期，用丝裂霉素C处理饲养层细胞，将细胞培养形成汇合的单层。通过胶原蛋白酶消化从活检标本分离肿瘤细胞，或者用胰蛋白酶消化从原代培养物获得肿瘤细胞，然后将肿瘤
为了能够适用于医学移植，人类胚胎干细胞（hESCs）需要保持一种“未分化”状态，即它们没有变换成其他类型的细胞。为了确定培养hESCs的最好方法能使它们保持未分化状态，也能生长、增殖和存活，研究人员经常使用动物来源的血细胞“饲养层”，通常来自于小鼠（小鼠胚胎成纤维细胞MEFs）。然而，这种方法存
印度理工学院孟买分校的研究人员使用由聚丙烯酰胺制成一种无细胞毒性的水凝胶，代替传统的塑料组织培养皿，可在实验室中培养更多的表皮主要构成细胞——角质形成细胞。 研究人员在英国《皇家化学学会进展》期刊上报告说，这种新方法利用细胞与材料之间的张力，使功能角质形成细胞快速繁殖，并不依赖饲养层或任何外源
实验概要hESCs传代、冻存及复苏主要试剂KODMEM、0.25%Trypsin、1 mg/mL胶原酶Ⅳ或者Dispase、0.1%明胶、细胞基础培养液、hESCs培养液、冻存液C主要设备2 mL移液管、5 mL移液管、10 mL移液管、15 mL移液管、25 mL移液管、15 mL离心管、50 m
实验概要小鼠诱导性多能干细胞诱导及建系主要试剂0.05%Trypsin、0.25% Trypsin、0.1%明胶、细胞基础培养液、DPBS、冻存液A、iPSCs诱导培养液实验材料35 mm、60 mm、100 mm培养皿，15 mL、50 mL离心管、体视镜实验步骤①每隔24 h为感染后的细胞换液，
4.软琼脂克隆分离法 本法仅适用于悬浮培养的类淋巴细胞或恶性程度高的贴壁细胞，而正常贴壁细胞在软琼脂中不能形成克隆。 （1）将对数生长期的细胞制成单个细胞悬液(贴壁细胞用0.25%胰蛋白酶消化使之分散成单个细胞)作活细胞计数。调整细
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，
实验概要mESCs传代主要试剂细胞基础培养液、DPBS、mES培养液A、mESCs培养液B、0.25% Trypsin主要设备35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、冻存管、倒置显微镜、离心机实验步骤（1）传代前一天准备好饲养层细胞，饲养层细胞要求接种密度大致
重点注意事项：--XerumFreeTM不含任何的生长因子，因此也不含有bFGF和胰岛素。培养干细胞时我们建议添加bFGF或胰岛素或IGF。--XerumFreeTM不含硒，培养干细胞时我们建议用含有硒的培养基。2.2.2 hESCs 和hiPSCs的无饲养层培养按照上面的包被步骤在含有
实验概要长期培养检测法检测造血干细胞（LTC-IC）主要试剂DPBS，HSCs培养液，MethoCult®培养基，HSCs稀释液、细胞基础培养液、HLTM液体主要设备离心机，超净台，体视镜，倒置显微镜镜，96孔培养板、100 mm培养皿，3mL注射器，16号钝针头，移液器，涡旋仪，5 mL、10mL
实验步骤2.3 小 鼠 胚 胎 饲 养 细 胞（MEF) 的 制 备最广泛地用于支持 h E S 的伺养层细胞来自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎饲养细胞（MEFs) ，尽管它们可能是最原始的间叶细胞的
体外分化法 实验方法原理 胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经
体外分化法 实验方法原理 胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经
小鼠胚胎干细胞培养可以：（1）细胞保种；（2）用于干细胞研究；（3）用于细胞生理学、形态学等研究；（4）动物克隆。实验方法原理胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培养基内选择（第3步），在有bFGF存在的情况下扩增（第4步）并最终分化在第5步
实验方法原理收集胚胎，除去绒毛膜，用胰蛋白酶分散胚胎细胞，然后在胚胎成纤维细胞饲养层上培养从斑马鱼囊胚和原肠期胚获得的原代细胞。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纤维细胞饲养层人重组白血病抑制因子试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培
实验概要小鼠胚胎干细胞向神经干细胞的定向诱导分化主要试剂无菌水、0.1%明胶、DPBS、0.05%Tripsin、fibronection、Laminin、细胞基础培养液、N2B27培养液、mES培养液C、小鼠EB培养基、神经干细胞培养液（NSC培养液）主要设备35 mm、100 mm培养皿、12孔
实验方法原理 通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。
通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。实验方法原理通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。实验材料用于传代培养的Dispase试剂、试剂盒生长培养液洗液消
实验方法原理 通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。
实验方法原理 通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。实验材料 用于传代培养的Dispase试剂、试剂盒 生长培养液洗液消化液仪器、耗材 培养瓶实验步骤 一、酶消化1. 用洗液（洗液：添加 5% FBS、200 U/ml 青霉素
下面为美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）入库细胞的基本要求： （1）培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态，细胞已传代数等。 （2）冻存液 培养基和保护剂名称。 &