报告基因：β半乳糖苷酶的原位染色实验
试剂、试剂盒 D-PBSA 染色液质粒实验步骤 一、材料非消毒物品 1. D-PBSA2. 底物：X-gal（nvitrogen），以二甲基甲酰胺配成 20 mg/mL，用多聚丙烯管-20℃ 避光保存，最长可达 6 个月 3. 固定液：1.8% 的甲醛和 0.05% 戊二醛，均以 PBSA 液配制；将 85 mL 水、10 mL 的 10×D-PBSA、5 mL 福尔马林（37% 甲醛溶液）及 0.2 mL 戊二醛（25% 溶液）混合，制备成固定液，于 4℃ 储存 4. 染色液：含 5 mmol/L 铁氰钾，5 mmol/L 亚铁氰钾，2 mmol/LMgCl2，以 D-PBSA 配制，4℃ 储存 5. 底物/染色液：1 mg/mLX-gal，以染色液配制，现用现配 6. 含 10% 甲醛的 D-PBSA 液 7. 将β-gal 的表达质粒作为报告基因转染（如：pcMV......阅读全文
羊水细胞染色体制备方法（原位法）
细胞培养1. 将羊水（约20ml）转移到无菌的离心管中，1000rpm离心10分钟；2. 去除上清液，用于其它分析，保留细胞悬液约0.5~1ml，用培养基混匀到2~2.5ml左右；3. 将细胞悬液平分到3只Chromslide培养皿中；4. 培养24/48小时后，向每只Chromslide培养皿中加
荧光原位杂交染色体分析技术
FISH是上世纪80年代中期发展起来并直到现在仍在不断改进、完善的技术。其基本过程是：首先制成染色体标本，和与所感兴趣的目的基因（或染色体片段）互补的探针，并在探针上标记荧光色素，当探针与染色体标本上的靶序列杂交后，利用荧光显微镜观察荧光信号从而获得染色体核型的信息。此技术具有灵敏度强、背景低、
荧光原位杂交染色体分析技术
FISH是上世纪80年代中期发展起来并直到现在仍在不断改进、完善的技术。其基本过程是：首先制成染色体标本，和与所感兴趣的目的基因（或染色体片段）互补的探针，并在探针上标记荧光色素，当探针与染色体标本上的靶序列杂交后，利用荧光显微镜观察荧光信号从而获得染色体核型的信息。此技术具有灵敏度强、背景低、
染色体荧光原位杂交技术简介
一、定义：在细胞遗传学，分子生物学和免疫学相结合基础上发展的一种新科学，他利用已知的核酸序列作为探针，以荧光素直接标记或以非放射性物质标记后与靶DNA结合，在通过荧光素标记，最后在荧光显微镜下观察杂交信号，从而对标本中的待测核苷酸进行定性，定位和定量分析。二、原理：利用DNA变性后双链解开变成单链，
准备大组织的厚切片进行β半乳糖苷酶染色
实验材料小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体试剂、试剂盒4%（m V)琼脂糖氰基丙烯酸盐黏合剂（如Superglue)l00 mmol L磷酸钠盐缓冲液 pH 8.0仪器、耗材振动切片机（如VT 1000S; Leica)实验步骤1) 固定和洗涤组织。2) 将组织放置在100 mL烧杯中，用吸管轻柔吸取
放射自显影原位杂交玻片的压片固定实验_甲苯胺蓝染色
实验材料水化并显影的原位杂交玻片试剂、试剂盒甲苯胺蓝染液仪器、耗材染色盘实验步骤1) 用水稀释甲苯胺蓝染液。按所期望染色程度，凭经验决定稀释度，由1:100稀释 起始。2) 玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡，然后在水中浸泡数次。按需求进行压片固定。
原位PCR实验的基本方法
① 固定组织或细胞：将组织细胞固定于预先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛处理，再灭活除去细胞内源性过氧化物酶。 ②蛋白酶K消化处理：用60ug/ml的蛋白酶K将固定好的组织细胞片55℃消化处理2h后，96℃2min以灭活蛋白酶K。 ③PCR扩增：在组织细胞片上，加PCR反应液，覆盖并加液
原位PCR实验的大致过程
大致过程 实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等。其基本方法为多聚甲醛固定组织或细胞，蛋白酶消化处理组织；在组织细胞片上滴加PCR反应液进行扩增，覆盖并加液体石蜡后，在原位PCR仪上进行PCR循环扩增，PCR扩增结束后用标记的探针进行原位杂交，最后显微镜观察结果。 实验玻片
报告基因实验——荧光蛋白（FP)－的显微检测
实验材料活体组织仪器、耗材落射荧光显微镜汞灯实验步骤表达突光蛋白的材料一般首先用落射荧光显微镜（epi-fluorescent microscopy) 来观察 ，尤其当研究表皮上表达的荧光蛋白或者用反褶积软件去掉从焦点之外采集的荧光时[18]。然而，对于较厚的材料，必须使用共聚焦显微镜，因为它可以
糖类染色实验——糖原染色
实验方法原理糖原由多糖衍化而来，是单纯的多糖。糖原易溶于水，所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原，常用高碘酸（periodic acid）-Shiff 反应（PAS）染色法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒高碘酸蒸馏水碱性复红盐酸焦亚硫酸钠（偏重亚硫酸钠）双重蒸馏水
FISH荧光原位杂交实验（原位杂交）
1. 实验目的 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和在生物学、医学领域的应用。掌握原位杂交技术的操作方法，熟练掌握荧光显微镜的使用方法。2. 实验原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗
荧光原位杂交实验——荧光原位杂交技术
荧光原位杂交可应用于：（1）动植物基因组结构研究；（2）染色体精细结构变异分析；（3）病毒感染分析；（4）肿瘤遗传学和基因组进化研究。实验方法原理用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵
淀粉葡糖苷酶的测定实验
基本方案 实验方法原理 4-α-D-葡聚糖葡萄糖水解酶，葡聚糖 1，4-α-葡糖苷酶通过水解末端 1，4- 和 1，6 连接的 α-1，6-葡糖苷键释放 β-
淀粉葡糖苷酶的测定实验
实验方法原理4-α-D-葡聚糖葡萄糖水解酶，葡聚糖 1，4-α-葡糖苷酶通过水解末端 1，4- 和 1，6 连接的 α-1，6-葡糖苷键释放 β-D-葡萄糖。这个实验与 α-葡糖苷酶类似，只是用糖原代替麦芽糖作为底物。一段时间以后（5 min）反应停止，葡萄糖被测出与己糖激酶/6-磷酸葡糖脱氢酶偶联
前列腺原位肿瘤模型的建立实验——原位种植法
前列腺原位肿瘤模型的建立可以：（1）连续活体监测前列腺癌发生、发展；（2）用于前列腺原位肿瘤生长及治疗的研究；（3）研究前列腺癌的生物学行为。实验方法原理10只BALB/C裸鼠前列腺背侧包膜内注入携带红色荧光蛋白（RFP）的前列腺癌PC-3细胞（PR7细胞）悬液20μL，第2、4、6、8周分别用非侵
荧光原位杂交实验
实验方法原理 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变
原位杂交实验步骤
原位杂交实验步骤一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1． 取400uL XL1-Blue菌种加入到含200ml LB培养基的锥形瓶中，37 ℃、100 rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1 mol／L CaCl_2重悬细菌，冰浴30 min， 离心，弃上清，倒
荧光原位杂交实验
实验方法原理 用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上
原位杂交实验步骤
原位杂交实验步骤 一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1． 取400uL XL1-Blue菌种加入到含200ml LB培养基的锥形瓶中，37 ℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1 mol／L CaCl_2重悬细菌，冰浴30 min，离心，弃上清，倒置，再加
RNA原位杂交实验
实验方法原理 原位杂交的原理是含有互补序列（探针）的被标记的单链 DNA 或 RNA 片段在适当 的条件下与细胞的 DNA 或 RNA 杂交形成稳定的杂交体。无论是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC RNA) 探针均能用于定位 DNA 和 mRNA，并
RNA原位杂交实验
实验方法原理 原位杂交的原理是含有互补序列（探针）的被标记的单链 DNA 或 RNA 片段在适当 的条件下与细胞的 DNA 或 RNA 杂交形成稳定的杂交体。无论是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC
RNA原位杂交实验
原位杂交（msituhybridization，ISH)，也称作杂交组织化学或细胞学的杂交，是一种能够从形态学上证明特异性的 DNA 或 RNA 序列存在于制备的个别细胞、组织部分、单细胞或染色体中的技术。原位杂交是研究异质细胞群中 DNA 和 RNA 序列的细胞定位的唯一方法。本实验来源「RNA
荧光原位杂交实验
实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、
报告基因的应用
实验概要报告基因被广泛地应用于细胞生物学中的基因表达和细胞相关内容的研究。常用的报告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、绿色荧光蛋白基因及萤火虫荧光素酶基因等。在这些报告基因中萤火虫荧光素酶基因因其表达产物－荧光素酶敏感性高，测定方法快速且宜于掌握，线性好，并且荧光素
报告基因实验——GUS－活性的组织化学检测
实验材料组织试剂、试剂盒HGUS 缓冲液磷酸盐缓冲液乙醇溶液仪器、耗材微量滴定板或者试管实验步骤1. 将组织置于新配制的 HGUS 缓冲液中（含有 X-Gulc 及其他添加物），足以完全浸没材料，试验在微量滴定板或者试管中进行。2. 吸真空 5~10 min，然后去掉真空条件。3. 铝箔包裹，37
Nature子刊：半乳凝素可直接对抗伪装细菌
科学家发现，我们的身体能产生一个蛋白质家族，它们能识别并杀死那些糖涂层非常类似于我们自身细胞的细菌。 这些蛋白质称为半乳凝素（galectins），它们能够从各种各样的致病细菌中识别出糖类，并有可能被作为抗生素来治疗某些感染。相关研究结果发表在2014年5月11日的《Nature Chemic
冰冻切片的原位杂交实验
实验材料 冰冻切片试剂、试剂盒 Tris·ClEDTA甘氨酸PBSSSC乙醇甲酰胺硫酸葡聚糖DTTNaCl仪器、耗材 加湿盒水浴锅培养箱实验步骤 1. 从冰箱中取出载玻片，平衡至室温，再打开玻片盒。置载玻片于架中，浸泡于以50 mmol/l Tris·Cl（pH7.5）/5 mmol/l EDTA
冰冻切片的原位杂交实验
细胞RNA的原位杂交实验用于在混杂的细胞群体和组织中、定位特异的mRNA在细胞中的存在位置。冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。实验材料冰冻切片试剂、试剂盒Tris·
冰冻切片的原位杂交实验
基本方案 实验材料 冰冻切片 试剂、试剂盒
荧光原位杂交实验的步骤
探针变性：将探针在75℃恒温水浴中温育5min，立即置0℃，5～10min，使双链DNA探针变性。 切片置于65℃下过夜烘烤。 二甲苯中室温脱蜡2次，每次10分钟，随后浸入100%乙醇中5分钟。 切片依次室温置于100％乙醇、85％乙醇和70％乙醇中各两分钟复水。将组织切片室温浸入去离子水