报告基因：β半乳糖苷酶的原位染色实验
试剂、试剂盒 D-PBSA 染色液质粒实验步骤 一、材料非消毒物品 1. D-PBSA2. 底物：X-gal（nvitrogen），以二甲基甲酰胺配成 20 mg/mL，用多聚丙烯管-20℃ 避光保存，最长可达 6 个月 3. 固定液：1.8% 的甲醛和 0.05% 戊二醛，均以 PBSA 液配制；将 85 mL 水、10 mL 的 10×D-PBSA、5 mL 福尔马林（37% 甲醛溶液）及 0.2 mL 戊二醛（25% 溶液）混合，制备成固定液，于 4℃ 储存 4. 染色液：含 5 mmol/L 铁氰钾，5 mmol/L 亚铁氰钾，2 mmol/LMgCl2，以 D-PBSA 配制，4℃ 储存 5. 底物/染色液：1 mg/mLX-gal，以染色液配制，现用现配 6. 含 10% 甲醛的 D-PBSA 液 7. 将β-gal 的表达质粒作为报告基因转染（如：pcMV......阅读全文
酵母双杂交系统的研究过程
Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or tar
酵母双杂交系统的研究过程
Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or targe
姐妹染色单体分化染色实验
实验方法原理 细胞被培养在含有 5-溴脱氧尿苷（5-Bromodeoxyuridine：BUdR）的培养基中，当细胞在DNA 合成时，BUdR 能作为核苷酸的前体取代胸腺嘧啶核苷（Thymidine：TdR）被掺入到新合成的DNA中。在第一个细胞周期时，由于半保留复制的机制，中期染色体的每条染色单体
糖类染色实验——黏液物质染色
实验方法原理在人体和动物体中能够分泌黏液物质，依其物质中含有的酸基不同，所以分为中性黏液、酸性黏液和混合性黏液，也可被称为中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖，常用 Mowry 阿尔辛蓝高碘酸 Shiff 反应（ABPAS）染色方法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒阿尔辛蓝 8 GS冰醋酸蒸馏水麝香
姐妹染色单体分化染色实验
实验方法原理细胞被培养在含有 5-溴脱氧尿苷（5-Bromodeoxyuridine：BUdR）的培养基中，当细胞在DNA 合成时，BUdR 能作为核苷酸的前体取代胸腺嘧啶核苷（Thymidine：TdR）被掺入到新合成的DNA中。在第一个细胞周期时，由于半保留复制的机制，中期染色体的每条染色单体D
姐妹染色单体分化染色实验
实验概要本文介绍了姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation，SCD)的实验原理、操作步骤及注意事项等。实验原理姐妹染色单体分化染色法(Sister chromatid differentiation，SCD)是20世纪70年代中期发展起来的染色体处
β半乳糖苷酶基因在基因工程中的应用介绍
β-半乳糖苷酶基因在基因工程中的应用：β-半乳糖苷酶基因被广泛地应用于包括作为报告基因、构建载体、转基因研究和基因治疗等多个分子生物学研究领域。具体介绍如下：1在载体构建中的应用β-半乳糖苷酶可催化X-ga1（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 水解，产物呈蓝色，易于检测和观察，基于这一特
实验室检验检测工具漩涡混合器
漩涡混合器是一种将振荡和涡旋巧妙结合的实验室仪器,能够适用于多种混匀和漩涡振荡操作,使实验更加方便,快捷。发展过程:1.国内一般的振荡器和涡旋器是分开的,一台机器往往只能处理一项操作,大大限制了实验的过程,目前国外出现的混匀小精灵可以解决这种矛盾,它将振荡和涡旋巧妙的结合到一台机器上。它不但能混匀各
概述β半乳糖苷酶基因在基因工程中的应用
β-半乳糖苷酶基因被广泛地应用于包括作为报告基因、构建载体、转基因研究和基因治疗等多个分子生物学研究领域。具体介绍如下： 1、在载体构建中的应用 β-半乳糖苷酶可催化X-ga1（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 水解，产物呈蓝色，易于检测和观察，基于这一特点，β-半乳糖苷酶基因常
β半乳糖苷酶基因在基因工程中的应用
β-半乳糖苷酶基因被广泛地应用于包括作为报告基因、构建载体、转基因研究和基因治疗等多个分子生物学研究领域。具体介绍如下：1在载体构建中的应用β-半乳糖苷酶可催化X-ga1（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 水解，产物呈蓝色，易于检测和观察，基于这一特点，β-半乳糖苷酶基因常作为载体组分，
α葡糖苷的测定实验_测定－α葡糖苷酶
α-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶，麦芽糖酶。从末端切断 α-D-葡萄糖的非还原的 1，4 键相连的 α-D-葡萄糖残基。对于实验，麦芽糖分成两个葡萄糖，这是从己糖激酶的反应中测得的，而己糖激酶（HK）的反应又与葡萄糖 6-磷酸脱氢酶（G6PDH）相偶联。实验材料α-葡糖苷酶试剂、试剂盒乙酸缓冲液麦芽糖溶
荚膜染色实验
实验方法原理 荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色合在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高。制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。
鞭毛染色实验
实验方法原理 鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理含使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。实验材料 苏云金芽孢杆菌假单胞菌金黄色葡萄球菌试剂、试剂盒 硝酸银鞭毛染色液0.01％ 美蓝水溶液仪器、耗材 载玻片盖玻片凹载玻片无菌水凡士林显微镜实验步骤 1. 菌种的准备 要求用活跃生长
Hoechst染色实验
基本方案 试剂、试剂盒 Hoechst染料 二甲基亚砜染料 二苯亚胺 甲基
糖类染色实验
实验方法原理 糖原由多糖衍化而来，是单纯的多糖。糖原易溶于水，所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原，常用高碘酸（periodic acid）-Shiff 反应（PAS）染色法。实验材料 石蜡组织切片试剂、试剂盒 高碘酸蒸馏水碱性复红盐酸 焦亚硫酸钠（偏重亚硫酸钠）双
钙质染色实验
钙质沉积于骨组织或病理变化的组织中，多见于组织坏死、动脉粥样硬化和肿瘤等钙化的组织。在茜素的作用下，可与钙形成有色的螯合物（钙质）成分。实验方法原理钙质即钙化物质，在各种组织中都可以形成钙质，这种钙盐沉积物也可被称为钙盐沉着，形态多样化，有的呈颗粒状和片块状等。其主要成分为磷酸钙和碳酸钙。常用 Da
核酸染色实验
实验方法原理 在一般情况下，通过盐酸水解后使 DNA 残基分解碱基，然后从碳键处打断糖苷键而游离出醛基，再与无色复红液（Schiff）进行反应，形成紫红色的复合物（DNA）。常用 Feuhgen-Rossenbeck 染色法（孚尔根染色法）。实验材料 石蜡组织切片试剂、试剂盒 Schiff 试剂染色
Hoechst染色实验
试剂、试剂盒 Hoechst染料二甲基亚砜染料二苯亚胺甲基水杨酸仪器、耗材 荧光显微镜水浴锅烘箱培养箱实验步骤 1. 用水按1：500稀释1 mg/ml 的Hoechst 染液至终浓度2 μg/ml。将稀释染液加于切片上或将玻片浸于染液中，置室温2 min。2. 室温下，在水中洗2 min，晾干
Hoechst染色实验
Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。试剂、试剂盒Hoechst染料二甲基亚砜染料二苯亚胺甲基水杨酸仪器、耗材荧光显微镜水浴锅烘箱培养箱实验步骤1. 用水按1：500稀释1 mg/ml 的Hoechst 染液至终浓度2 μg/ml。将稀释染
钙质染色实验
实验方法原理 钙质即钙化物质，在各种组织中都可以形成钙质，这种钙盐沉积物也可被称为钙盐沉着，形态多样化，有的呈颗粒状和片块状等。其主要成分为磷酸钙和碳酸钙。常用 Dahl-McGec-Russell 茜素红 S 法染色。实验材料 石蜡组织切片试剂、试剂盒 二甲苯无水乙醇中性树胶蒸馏水茜素红乙酸淡绿氢
荧光原位杂交实验步骤
荧光原位杂交实验步骤1）探针变性将探针在75oC恒温水浴中温育5min，立即置0oC，5～10min，使双链DNA探针变性。2）标本变性①将制备好的染色体玻片标本于50oC培养箱中烤片2～3h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。 ②取出玻片标本，将其浸在70～75
电镜原位杂交技术实验
电镜原位杂交实验可以用于：（1）研究特定核苷酸序列的亚细胞定位；（2）许多研究者已经从光学显微观察扩展到对超微结构的观察。（3）特别是利用地高辛或生物素作为报告分子的非放射性探针，不必像放射性探针那样需要长时间暴露，因此整个过程可以在 24 h 内完成。实验方法原理从理论上讲，前包埋原位杂交技术的敏
原位杂交实验操作步骤
一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mllb培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的Ca
菌落原位杂交实验介绍
对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。将少数菌落转移到硝酸纤维素滤膜上（1） 在含有选择性抗生素的琼
电镜原位杂交技术实验
实验方法原理 从理论上讲，前包埋原位杂交技术的敏感性高于后包埋原位杂交技术，因为前者可观察到来自整个切片厚度的信号。但是，探针并不一定能穿透整个切片厚度，特别是用较长的探针。为了增加穿透性，经常应用冻融法或者蛋白酶和去污剂处理，而这样做会导致一些胞内成分如核糖体的丢失，严重时会造成超微结构的形态改变
FISH－荧光原位杂交实验
实验概要1. 通过实验了解荧光原位杂交技术的基本原理和实验技术 2. 掌握原位杂交技术的操作方法及荧光显微镜的使用方法 3. 了解其在生物学、医学领域的应用实验原理荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20
电镜原位杂交技术实验
实验方法原理 从理论上讲，前包埋原位杂交技术的敏感性高于后包埋原位杂交技术，因为前者可观察到来自整个切片厚度的信号。但是，探针并不一定能穿透整个切片厚度，特别是用较长的探针。为了增加穿透性，经常应用冻融法或者蛋白酶和去污剂处理，而这样做会导致
双荧光素酶报告基因实验中的质粒怎么找
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。是检测启动子的荧光报告载体，当然是将miR的启动子序列构建
报告基因实验——植物提取物中LUC活性的检测
实验材料植物组织试剂、试剂盒裂解液萤光素酶分析缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、完整组织1. 液氮速冻植物组织（5~50 mg)，研磨成粉末状。2. 100~400 ul 裂解液室温重悬，组织匀浆。3. 16000 g，4℃ 离心 15 min，弃掉破碎的细胞。4. 检测提取物中的蛋白质浓度。5.
培养细胞的染色实验——Giemsa染色法
实验方法原理Giemsa 染色是最常用的方法之一，它简便、快速，适用于多种细胞和染色体染色。试剂、试剂盒Giemse甘油甲醇Sorensen仪器、耗材滴管玻璃片实验步骤1. 染液制备（1）称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml，在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合，研磨至无颗粒；（2）再