氯霉素乙酰基转移酶（CAT）测定
试剂、试剂盒 Tris-缓冲液 Tris 三硝基甲苯（Triton） CAT 稀释缓冲液CAT 酶标准物闪烁液 聚丙烯闪烁杯仪器、耗材 微量离心管微量离心机实验步骤 一、材料灭菌物品1. D-PBSA2. 多孔培养板：6 孔，35 mm非消毒物品1. Tris-缓冲液：Tris-HCl，0.1mol/L，pH8.02. Tris/三硝基甲苯（Triton）：Tris-HCl，0.1mol/L，pH8.0，0.1%TritonX-100,4℃ 储存3. CAT 稀释缓冲液：Tris-HCl，0.1mol/L，pH8.0，50% 甘油，0.2%BSA4. 底物：含 250 mmol/L 氯霉素（GIBCO）的 100% 甲醇；分装，-70℃ 储存5. 14C-CoA：14C-丁酸辅酶 A（10μCi/mL；AmershamPharmacia）6. CAT 酶标准物：制备含 0.2、1.0、2.0、4.0、10U/mL 标准液的 CA......阅读全文
氯霉素乙酰基转移酶（CAT）测定
试剂、试剂盒 Tris-缓冲液 Tris 三硝基甲苯（Triton） CAT 稀释缓冲液CAT 酶标准物闪烁液 聚丙烯闪烁杯仪器、耗材 微量离心管微量离心机实验步骤 一、材料灭菌物品1. D-PBSA2. 多孔培养板：6 孔，35 mm非消毒物品1. Tris-缓冲液：Tris-HCl，0.1mol
氯霉素乙酰基转移酶（CAT）测定实验
实验方法原理 氯霉素乙酰转移酶报告基因(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)能将乙酰基从乙酰辅酶A转移到氯霉素上。本试剂盒采用荧光测定的方法，检测CAT活性，它的灵敏度接近同位素测定方法，而操作极
氯霉素乙酰基转移酶（CAT）测定实验
实验方法原理 氯霉素乙酰转移酶报告基因(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)能将乙酰基从乙酰辅酶A转移到氯霉素上。本试剂盒采用荧光测定的方法，检测CAT活性，它的灵敏度接近同位素测定方法，而操作极
氯霉素乙酰基转移酶（CAT）测定实验
通过测定转染细胞的报告基因表达，如β-gal或CAT,可以确定导人的DNA是否已被整合到宿主细胞主要用于（1）测定基因表达（2）基因整合评价（3）细胞的调控。来源于《动物细胞培养：基础技术指南（第五版）》实验方法原理氯霉素乙酰转移酶报告基因(chloramphenicol acetyltransfe
薄层层析法测定氯霉素酰基转移酶含量实验
试剂、试剂盒 CAT 反应混合物 1乙基乙酸裂解缓冲液不含钙盐和镁盐的磷酸盐缓冲液薄层层析（TLC) 溶剂Tris-Cl放射性墨水仪器、耗材 干冰 乙醇浴不溶于乙醇的墨水的记号笔旋转真空蒸发器橡胶棒 薄层层析板薄层层析槽预设为 65°C 的水浴实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的组分请见
薄层层析法测定氯霉素酰基转移酶含量实验
材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的组分请见附录 1。贮存液稀释到适当浓度。CAT 反应混合物 11mol/LTris-Cl(pH7.8)50ul[14C] 氯霉素 (60mCi/mmol, 用水稀释到 0.1mCi/ml)10ul乙酰辅酶 A(新鲜
薄层层析法测定氯霉素酰基转移酶含量实验
本方案中，我们列出了三种不同的分析方法，可以用来测定报道基因载体 pCAT3 转染哺乳动物细胞后表达的 CAT 酶活性（请见图 17-3）。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料用携带感兴趣 DNA 的 pCAT 载体转染的哺乳动物培养细
二氢硫辛酰胺乙酰基转移酶实验
分光光度法 Stopped 实验 实验方法原理 实验材料
二氢硫辛酰胺乙酰基转移酶实验
实验方法原理 实验材料 酶样品试剂、试剂盒 Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸转乙酰酶DL-二氢硫辛酰胺仪器、耗材 分光光度计实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」0.98 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品30℃ 时，于 240 nm 处吸收值发生变化，需使用石英比色皿。注意事项 其他 试剂
关于氯霉素乙酰转移酶的简介
氯霉素乙酰转移酶（Chloramphenicol Acetyltransferase ，CAT）是一种原核酶类，可以将氯霉素乙酰化而使其 失活，是细菌产生氯霉素抗性的主要原因。 在大肠杆菌中易表达，而且非常稳定，因此，氯霉素乙酰转移酶可被改造成检测氯霉素的理想工具酶。不同种类的抗性细菌可以产
报告基因分类及优缺点
报告基因（reporter gene）是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，其表达产物非常容易被鉴定。把它的编码序列和基因调节序列相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。作为报告基因必须具备的条件：（1）全序列已测定（2）表达产物在手提细胞中不存在，即无背景，
二氢硫辛酰胺乙酰基转移酶实验——Stopped－实验
实验材料酶样品试剂、试剂盒Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸转乙酰酶DL-二氢硫辛酰胺HCl羟胺FeCl3 试剂实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」0.98 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品30 ℃ 培养 15 min，加入 0.1 ml 1 mol/L HCl 停止，沸水浴 5 min。而
氯霉素乙酰转移酶的结构
内容信息最早对CAT结构的研究主要使用的是CATⅠ和CATⅢ的杂聚体，CAⅠ和CA’F1nⅡ亚基的分子量分别是25688和24965道尔顿，而CATⅢ的沉降平衡数据显示其分子量为70500道尔顿，这证明CATⅢ是一个三聚体（αβ2和α2β）的结构。在CATⅢ三聚体中，每一亚基六条链的β片层结构延伸通
常用报道基因的功能对比
道基因的对比报道基因作用方式优点缺点氯霉素乙酰基转移酶（CAT；细菌）CAT通过使乙酰基与抗生素共价连接的方式来解除氯霉素的毒性，报道基因实验通常检测n-丁酰基的一半从辅助因子n-丁酰辅酶A转移到具有放射活性的氯霉素上，被修饰的氯霉素的迁移率发生改变，并且能够掺入有机溶剂。没有内源活性；可使用自动化
氯霉素乙酰转移酶的结构特点
内容信息最早对CAT结构的研究主要使用的是CATⅠ和CATⅢ的杂聚体，CAⅠ和CA’F1nⅡ亚基的分子量分别是25688和24965道尔顿，而CATⅢ的沉降平衡数据显示其分子量为70500道尔顿，这证明CATⅢ是一个三聚体（αβ2和α2β）的结构。在CATⅢ三聚体中，每一亚基六条链的β片层结构延伸通
转染实验常用的报告基因（植物、动物）
报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其 它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。
氯霉素乙酰转移酶的基本信息
氯霉素乙酰转移酶（Chloramphenicol Acetyltransferase ，CAT）是一种原核酶类，可以将氯霉素乙酰化而使其失活，是细菌产生氯霉素抗性的主要原因。
氯霉素乙酰转移酶的基本信息
氯霉素乙酰转移酶（Chloramphenicol Acetyltransferase ，CAT）是一种原核酶类，可以将氯霉素乙酰化而使其失活，是细菌产生氯霉素抗性的主要原因。
氯霉素乙酰转移酶的定点突变介绍
为了研究反应中底物识别，催化和特殊侧链交互作用对蛋白结构各方面的影响，包括对其稳定性和反应活性的影响，CATⅢ己经有超过60种的定点突变类型。特殊的点突变类型有助于研究每一个酪氨酸残基在配体结合时荧光发生改变的过程中所起的作用，有助于进一步的阐明CATⅢ和氯霉素交互作用的NMR结果。对cat基因
关于氯霉素乙酰转移酶的结构介绍
最早对CAT结构的研究主要使用的是CATⅠ和CATⅢ的杂聚体，CAⅠ和CA’F1nⅡ亚基的分子量分别是25688 和24965道尔顿，而CATⅢ的沉降平衡数据显示其分子量为70500道尔顿，这证明CATⅢ是一个三聚体（αβ2和α2β）的结构。 在CATⅢ三聚体中，每一亚基六条链的β片层结构延
冷凝集素测定（CAT）临床意义
正常参考范围：阴性临床意义：凝集价>1：64具有诊断意义，如在病程中，冷凝集素效价逐渐上升，则对诊断价值更大。支原体肺炎、肝硬化、多发性骨髓瘤 、疟疾、恶性淋巴瘤等冷凝集素有不同程度的升高。冷凝集素效价升高可在传染过程中出现，特别是传染性单核细胞增多症和支原体所致 非典型性肺炎；慢性的冷凝集
氯霉素乙酰转移酶的基本功能
细菌的氯霉素抗性和CAT有着直接的关系。当含有CAT的细菌暴露于氯霉素时，可以使氯霉素乙酰化而失活。
氯霉素乙酰转移酶的主要功能
细菌的氯霉素抗性和CAT有着直接的关系。当含有CAT的细菌暴露于氯霉素时，可以使氯霉素乙酰化而失活。
二氢硫辛酰胺乙酰基转移酶实验——分光光度法
实验方法原理实验材料酶样品试剂、试剂盒Tris-HClCoA乙酰磷酸磷酸转乙酰酶DL-二氢硫辛酰胺仪器、耗材分光光度计实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」0.98 ml 实验混合物0.02 ml 酶样品30℃ 时，于 240 nm 处吸收值发生变化，需使用石英比色皿。展开 注意事项其他试剂0.1
氯霉素乙酰转移酶的活性位点的介绍
1、氯霉素结合位点 氯霉素结合与定位在亚基交界面的一个深深的袋子结构中。尽管形成袋子结构的大多数氨基酸位于形成交界面的其中的一个亚基中，在催化中起关键作用的195位的组氨酸却位于另外的一个亚基。氯霉素的苯环与29位亮氨酸，31位半胱氨酸，160亮氨酸，172位异亮氨酸的侧链结合，其二氯基团和1
琥珀氯霉素的含量测定
取本品适量，精密称定，按琥珀氯霉素每10mg加乙醇1 ml 使溶解，再用水稀释使成每1ml 中约含20μg 的溶液，照分光光度法（附录Ⅳ A），在276nm 的波长处测定吸收度，按C11H12Cl2N2O5 的吸收系数（E1% 1cm）为298 计算。
琥珀氯霉素的含量测定
取该品适量,精密称定,按琥珀氯霉素每10mg加乙醇1ml 使溶解,再用水稀释使成每1ml 中约含20μg 的溶液,照分光光度法（附录Ⅳ A）,在276nm 的波长处测定吸收度,按C11H12Cl2N2O5 的吸收系数（E1% 1cm）为298 计算。
氯霉素的含量测定方法
含量测定照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品适量,精密称定,加甲醇适量(每10mg氯霉素加甲醇lml)使溶解,用流动相定量稀释制成毎1ml中约含0.1mg的溶液,摇匀。对照品溶液取氨霉素对照品适量,精密称定,加甲醇适量(每10mg氯霉素加甲醇1ml)使溶解,用流动相定量稀释制成每1
粒子轰击的定义
在1987年，Vlein首先报道了应用此技术将TMV（烟草花叶病毒）RNA吸附到钨粒表面，轰击洋葱表皮细胞，经检测发现病毒RNA能进行复制，并以同样技术将CAT(Chloraphericol acetyltransferase氯霉素乙酰转移酶基因)基因导入洋葱表皮细胞。该技术已在烟草、水稻、小麦、黑
粒子轰击细胞法的定义和应用
在1987年，Vlein首先报道了应用此技术将TMV（烟草花叶病毒）RNA吸附到钨粒表面，轰击洋葱表皮细胞，经检测发现病毒RNA能进行复制，并以同样技术将CAT(Chloraphericol acetyltransferase氯霉素乙酰转移酶基因)基因导入洋葱表皮细胞。该技术已在烟草、水稻、小麦、黑