光镜下双／多重免疫标记实验
试剂、试剂盒 石蜡切片实验步骤 1. 石蜡切片（贴片前的载玻片应预涂不含有荧光色素的黏片剂），厚 5 μm，常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，人 PBS（pH 7.4，0.01 mol/L）。2. 1％ 人血清白蛋白（HSA）孵育 10 min（亦可用 10％ 正常羊血清代之），不洗。3. 抗 ACTH 血清（McAb）1:200，孵育 30 min，37℃，湿盒。4. 0.05 mol/L TBS（pH 7.4，内含 1％ Triton X-100，下同）洗，10 min×3。5. 羊抗鼠 IgG-TRITC 1:100，湿盒，室温避光反应 1 h。6. 0.05 mol/L TBS（pH 7.4）洗 10 min×3（第一重 ACTH-TRITC 标记染色已完成）。7. 切片逐级乙醇脱水，二甲苯透明，空气干燥后，置于装有多聚甲醛粉末的密闭容器内，放在 80℃ 烤箱或温箱内以甲醛蒸气固定 2～4 h，使第一重染色中二抗的不饱和抗原......阅读全文
非标记抗体免疫电镜实验
实验方法原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的
非标记抗体免疫电镜实验技术
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
(一) 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的
免疫电镜相关技术实验——酶标记免疫电镜技术
实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物，在不改变抗原抗体的免疫反应特异性，亦不降低酶活性条件下，与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
电镜下双/多重免疫标记实验
电镜下的双重免疫标记染色不是靠颜色区分，而是靠标记物的不同电子密度或颗粒的不同大小来区别不同抗原，有别于光镜下的双重免疫标记方法。多采用双重免疫金标记，其最大优点是高电子密度、分辨率高、抗原定位精确、颗粒大小可人工控制、标记试剂易制备。但也存在一些不足，如非特异吸附干扰大（背景）、对所用试剂质量要求
非标记抗体免疫电镜实验——经典法
不标记抗体法通过系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。用于（1）抗体观察（2）免疫学研究。实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有
光镜下双/多重免疫标记实验——免疫荧光双重标记TRITCFITC
双重或多重标记是利用免疫学和细胞化学原理，在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物，或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位标记两种或两种以上抗原-抗体复合物，达到在同一细胞或亚细胞水平显示不同抗原成分（定性、定位、定撤），分析不同抗原成分相互间功能的增消关系，操作遵循的原则与要求同单
病毒免疫荧光实验_荧光素标记抗体
实验材料荧光色素试剂、试剂盒抗体实验步骤荧光标记抗体方法有直接标记法和间接标记法两种。(1) 直接法：较为常用，具体步骤是：1) 抗体溶液的制备：用 0.01mol/L pH 7.1 PBS 将待标记抗体稀释至 20mg/ml;2) 荧光素：根据待标记抗体的总量，按 0.01mg 荧光素/mg 蛋白
光镜下双/多重免疫标记实验
试剂、试剂盒 石蜡切片实验步骤 1. 石蜡切片（贴片前的载玻片应预涂不含有荧光色素的黏片剂），厚 5 μm，常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，人 PBS（pH 7.4，0.01 mol/L）。2. 1％ 人血清白蛋白（HSA）孵育 10 min（亦可用 10％ 正常羊血清代之），不洗。3. 抗 ACTH
免疫电镜相关技术实验——胶体金标记免疫电镜技术
实验材料病毒试剂、试剂盒胶体金仪器、耗材电子显微镜实验步骤免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电
免疫沉淀实验——免疫沉淀放射性标记抗原
实验材料蛋白质试剂、试剂盒SDS仪器、耗材离心机实验步骤1. 按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改：（2b）按所需选用步骤4b所提供的其中之一备择物（①，②，③）预澄清放射性抗原溶液。（4b）加入1 μl 抗原特异性抗血清，或3 μg 抗原特异性单抗，或抗质特异性杂交瘤培养上 清（克隆化细
标记的免疫技术
免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。如将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物（例如放射性核素、荧光素、酶等）进行标记，则在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物
标记的免疫技术
免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。如将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物（例如放射性核素、荧光素、酶等）进行标记，则在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物
非标记抗体免疫酶组织化学实验
实验方法原理 首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作「桥梁」，将它们连接起来，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的定位。其基本流程为：抗原+特异性抗体 → 第二抗体（桥抗）→ 抗 HRP 抗体 → HRP → DAB+H2O2（显色）。因为桥抗
悬浮细胞的免疫荧光标记实验
实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。实验材料悬浮细胞试剂、试剂盒多聚
悬浮细胞的免疫荧光标记实验
实验材料 悬浮细胞试剂、试剂盒 多聚-L-赖氨酸仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1. 细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min，吸去培养液并以4℃PBS重悬细胞。 2. 离心吸去PBS，以1~2 ml 2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1% Triton X
组织切片的免疫荧光标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 PBS抗体仪器、耗材 玻片加湿盒实验步骤 1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。 2. 待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。 3. 稀释的第
组织切片的免疫荧光双标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 第一抗体IgG实验步骤 1. 当进行双标记实验时，最重要的准则是：第一抗体应为不同类型，从而使第二抗体能分别识别之。第一抗体最好是来源于不同免疫动物。但如使用单克隆抗体，这一要求就有可能达不到，当使用单抗时，不同型的抗体如IgG和IgM，可被第二抗体确切区分
组织切片的免疫荧光标记实验
实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。实验材料组织样品试剂、试剂盒PB
组织切片的免疫荧光双标记实验
间接免疫荧光显微镜检术可使两种或更多种抗原可以在同一切片，同一时间内被显示出来，可用于（1）细胞标记；（2）免疫荧光筛选干细胞。实验方法原理通过使用激发波长及发射波长均不相间的荧光染料而进行的。通常限用两种荧光染料，最常见的是罗丹明（绿光激发，发射红光）和荧光素（蓝光激发、发绿光）联合使用。实验材料
免疫学技术:悬浮细胞的免疫荧光标记实验
免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗体结合部位，检测出抗原或抗体。实验方法基本方案实验材料悬浮细胞试剂、试剂盒
光镜下双/多重免疫标记实验——双重免疫荧光染色
实验步骤1. 古兹菲德-雅各氏病（CJD）病人的尸解脑组织，4％ 中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，厚 5 μm（贴片前的载玻片应预涂不含有荧光色素的黏合剂）。2. 常规脱蜡，水化。3. 抗原修复（柠槺酸盐缓冲液 pH 6.0 中，高压灭菌器加热 100℃，20 min）及 96％ 甲酸孵育 2 m
免疫标记技术常用的标记物介绍
常用的标记物有荧光素、酶、放射性核素及胶体金等。免疫标记技术具有快速、定性或定量甚至定位的特点，是应用最广泛的免疫学检测技术。 常用的免疫荧光素主要有： 1 ．异硫氰酸荧光素 (FITC) ，最大吸收光谱为 490~495nm ，最大发射光谱为 520~530nm ，呈黄绿色荧光。 2 ．
单层生长细胞的免疫荧光标记实验
免疫荧光标记是微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法，在临床上得到了广泛的应用。实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光
单层生长细胞的免疫荧光标记实验
实验材料 单层细胞试剂、试剂盒 PBS多聚甲醛甲醇抗体仪器、耗材 离心机水浴锅培养箱实验步骤 1. 置生长成片的单层细胞于冰上冷却，吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。2. 如欲研究细胞表面抗原，则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原，则可用含0.1% Triton X-10
非标记抗体免疫电镜实验——快速法(琼脂扩散法)
实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜
原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗
免疫标记法及其分类
免疫标记法及其分类1.荧光免疫法原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示（△Mb）表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与