免疫电镜相关技术实验——胶体金标记免疫电镜技术
实验材料病毒试剂、试剂盒胶体金仪器、耗材电子显微镜实验步骤免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电子密度，比铁蛋白颗粒还易辨认，故可用作免疫透射电镜的示踪物。后来研究发现，当胶体金的直径为 0. 8nm 或 1. 0nm 时，其穿透组织、细胞的能力增强而不影响观察结果。超小粒胶体金经银增强系统处理后，观察分辨效果更佳。胶体金对电镜检查的包埋标本和冷冻超薄切片的非特异性吸附都较低，因此，已被广泛地应用于各种电镜检查。......阅读全文
免疫电镜相关技术实验——胶体金标记免疫电镜技术
实验材料病毒试剂、试剂盒胶体金仪器、耗材电子显微镜实验步骤免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电
免疫电镜相关技术实验——酶标记免疫电镜技术
实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物，在不改变抗原抗体的免疫反应特异性，亦不降低酶活性条件下，与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
免疫电镜相关技术实验—病毒颗粒免疫电镜技术
病毒是极微小的生物体，用电镜观察时，由于其变形、损伤或杂质的存在，以及标本中病毒的数量有限，只靠其形态特点较难确切辨认。为了提高辨认的准确性，可应用特异性抗体，使其与病毒结合，在电镜下可清晰地辨认特异性抗体及其结合的病毒。这种将免疫学检测方法应用于电镜检查的技术就是免疫电镜技术 (Immunoele
免疫电镜相关技术实验
实验方法原理 该方法是用电镜直接观察病毒抗原与相应抗体结合后形成的大分子复合物。实验材料 病毒试剂、试剂盒 抗体仪器、耗材 电子显微镜实验步骤 直接将病毒抗原与对应抗体孵育后上电子显微镜观察即可。具有简单易行，抗原和抗体用量少在该时间内即可得到结果等优点，可用于检出病毒或进行病毒分型，并已用于临床诊
非标记抗体免疫电镜实验技术
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的
非标记抗体免疫电镜实验技术
(一) 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的
免疫电镜胶体金标记法
第四节 免疫电镜胶体金标记法 金标法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，
断裂标记免疫电镜技术（2）
)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸，室温固定2h，系列酒精或丙酮脱水，常规电镜包埋。⑦切半薄片，光镜定位合适的断裂部位，再切超薄切片，铀铅染色，透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术，常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C
断裂标记免疫电镜技术（1）
断裂-标记免疫电镜技术此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用3
非标记抗体免疫电镜技术
一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜技术
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组
断裂—标记免疫电镜技术介绍
此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。（1）临界点干燥法①固定：1.0%～2.5%戊二醛PBS液4℃1～2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用30%的甘油—PBS浸透
免疫电镜胶体金标记法1
金标法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫电镜胶体金标
免疫电镜胶体金标记法2
（4）胶体金与蛋白A的结合和纯化，依上法测得所需的比例超过10%，即每30ml胶体中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作为稳定剂，然后以15000r/min离心45min（不同方法制备的金离心速度不同），略带红色的松散的复合物沉淀即为PAg复合物。小心弃去上清液，加入PBS冲洗
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。(2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。(3)将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100℃蚀刻1mi
免疫学技术专题：非标记抗体免疫电镜技术
一、原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的
免疫电镜技术
近年来，免疫学方法与电镜技术相结合，形成了一种免疫电镜技术(Immunoelec-tronmicroscopy，IEM)，使抗原定位达到了亚细胞水平。该技术由以下环节组成：(一) 组织准备 用于免疫电镜检测的组织多种多样，所以各自在组织制备时都具有其特点。一般讲，组织力新鲜并进行无活动力状态处理，例
免疫电镜胶体金标记法操作大全
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原 反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫电镜胶体金
免疫标记电镜技术标本制备的要求
为保持组织的抗原性，固定剂不宜过强。 1.包埋前染色 优点是切片染色前不经过锇酸固定、脱水及树脂包埋等过程，抗原未被破坏，易于获得良好的免疫反应。特别适用于含抗原量较少的组织。 2.包埋后染色 优点是超微结构保存较好，方法简便，阳性结构有高度的可重复性，能在同一张切片上进行多重免疫染色。
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术介绍
（1）新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。（2）PBS（pH7.5）冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。（3）将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100℃蚀刻1min 。（4）制做断裂面复型。
电镜免疫胶体金―银法染色技术
免疫胶体金―银染色(immunogold-sliverstaining)技术系20世纪80年代Holgate将免疫 金染色和银显影方法结合而建立的一种新型检测技术，亦可用于电镜包埋前染色。其基本原理是先进行免疫胶体金染色标记抗原，使其结合在组织细胞抗原所在位置，然后进行物理显影，当显影剂中的对
非标记抗体免疫电镜实验
实验方法原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组
免疫细胞电镜技术
免疫细胞化学技术为在细胞水平上研究免疫反应做出了贡献，但由于光学分辨率的限制，不可能从细胞超微结构水平观察和研究免疫反应。因此，Singer于1959年首先提出用电子密度较高的物质铁蛋白(ferritin)标记抗体的方法，为在细胞超微结构水平研究抗原 抗体反应提供了可能。在此基础上，相继发展了杂交抗
酶免疫电镜技术
（一） 原理 酶免疫电镜技术是利用酶的高效率的催化作用对其底物的反应形成不同的电子密度，借助于电子显微镜观察，证明酶的存在，从而对抗原进行定位。（二）材料与试剂1．PBS液 取NaCl 8.5g，Na2HPO40.85g，KH2PO40.54g，加水至1 000ml即可。2．DAB溶液 取5m
扫描免疫电镜技术
实验概要本文介绍了扫描免疫电镜技术的具体操作步骤，扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。实验原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集
扫描免疫电镜技术
实验概要本文介绍了扫描免疫电镜技术的具体操作步骤，扫描免疫电镜技术可为研究细胞或组织表面的三维结构与抗原组成的关系提供可能性。实验原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集
免疫电镜胶体金标记法（简称金标法）
1、 包埋后染色 (超薄切片的金标记法)（1）超薄切片厚50～70nm左右，载于200～300网孔的镍网上；（2）滴1%的H2O2液1滴于蜡板上，将网的载片面轻浮于液滴上10min至1h；（3）双蒸水洗3次，每次10分钟。第1、2次洗法如（2），浮于液面上，第3次以盛双蒸水的注射器沿镍网面冲洗，水流
非标记抗体免疫电镜
原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗