酵母菌细胞的诱变实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD磷酸钠缓冲液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸钠仪器、耗材 试管摇床离心机平板实验步骤 1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5~10 s，细胞重悬于1 ml 无菌水中，重复洗涤。再用1.5 ml 无菌的0.1 mol/l pH7.0的磷酸钠缓冲液重悬细胞。3. 在13 mm×100 mm 培养试管中先加入1 ml 缓冲液，然后加入0.7 ml 细胞悬液，剩余细胞在冰浴中保存留作对照。往试管中加入50 μl EMS，在旋涡混合器上振荡使分散均匀，在旋转摇床上于30℃温育1 h。4. 将0.2 ml 细胞悬液加入装有8 ml 无菌的5%硫代硫酸钠的培养试管中，灭活EMS，终止诱变。如果细胞......阅读全文
酵母菌细胞的诱变实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD磷酸钠缓冲液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸钠仪器、耗材 试管摇床离心机平板实验步骤 1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5
酵母菌细胞的诱变实验——甲乙硫醚诱变
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD磷酸钠缓冲液甲乙硫醚刀豆氨酸硫代硫酸钠仪器、耗材试管摇床离心机平板实验步骤1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5~10
酵母菌细胞的诱变实验——紫外光诱变
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD刀豆氨酸仪器、耗材紫外光杀菌灯紫外光放射量测定器实验步骤1. 将过夜培养的酵母菌培养液接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养。离心5~10 s，用1 ml 无菌水重悬沉淀细胞，重复洗涤1次，再用1 ml 无菌水重悬。 2. 检查细胞密度，记录数据后将细胞密度调
酵母菌基因组转座子的诱变实验
实验方法原理 实验材料 诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒 10×TE缓冲液 pH 8.0无菌 E. coli tets kans (如 DH5c×)14 cm的LB培养基平板培养基中加入3 mg mL的四环素和40μg mL的卡那霉素LB培养基丙三醇无菌NotⅠ非限制性内切核酸酶及
酵母菌基因组转座子的诱变实验
基本方案 小载体聚合酶链反应 mTn诱变基因产物的表位标记 实验方法原理 实验材料
酵母菌基因组转座子诱变实验—mTn诱变基因产物表位标记
实验材料mTn诱变酵母菌株试剂、试剂盒pGAL-cre含有2% (W V)棉籽糖的-Leu-Ura Raff CM缺失成分培养基平板和培养基含有2% {m V)半乳糖的-Leu Gal CM缺失成分培养基含有2% (m V)葡萄糖的-Leu Glc CM缺失成分培养基5-FOA培养基平板（5-FOA
耐高温酵母菌株的诱变选育
实验概要通过实验，观察紫外线对酵母菌的诱变效应，并学习物理因素诱变育种的方法。实验原理紫外线对微生物有诱变作用，主要引起是DNA的分子结构发生改变（同链DNA的相邻嘧啶间形成共价结合的胸腺嘧啶二聚体），从而引起菌体遗传性变异。测定紫外光的剂量有直接法（以尔格/平方毫米表示绝对剂量）和间接法（以辐照时
酵母菌基因组转座子的诱变实验——基本方案
实验材料诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒10×TE缓冲液 pH 8.0无菌 E. coli tetskans (如 DH5c×)14 cm的LB培养基平板培养基中加入3 mg mL的四环素和40μg mL的卡那霉素LB培养基丙三醇无菌NotⅠ非限制性内切核酸酶及缓冲液Ura3_酵母菌培养一
酵母菌细胞密度检测实验
实验材料酵母菌仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 在培养基中细胞的密度可以通过分光光度计测定的菌液在600 nm 波长的光密度OD600值来放映。2. 要得到可靠的测量结果，菌液最好稀释到OD600值1以下，在这个范围内，毎0.1OD600相对于约3×105细胞/ml。如此推算，1OD600
酵母菌细胞融合实验
实验概要学习酵母菌原生质体制备和再生技术，为了解酵母菌为材料的外源基因转移等技术奠定基础。实验原理酵母菌如酿酒酵母，在遗传学和分子生物学的研究中有很大作用，尤其是近些年来，随着科技的进步，酵母菌的遗传操作如转化、基因克隆和外源基因在酵母受体中的表达等技术都有了突破性的进展。作为受体系统的酵母菌原生质
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇 乙醇 矿物油或者一个蜡珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突变 PCR 缓冲液
USE－诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态试剂、试剂盒 退火缓冲液贮存液合成缓冲液噬菌体 T4DNA 连接酶噬菌体 T4DNA 聚合酶或测序酶单一位点的限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变引物选择引物质粒 DNA仪器、耗材 70°C
诱变－PCR－实验
试剂、试剂盒 氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高纯度的脱氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物琼脂糖凝胶用溴化乙锭染色仪器、
诱变－PCR－实验
诱变 PCR 最大的优势是以一种没有偏好的方式引入了各种类型的突变，而不是获得高水平的单一的扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒氯仿 异戊醇乙醇矿物油或者一个蜡珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突变 PCR 缓冲液DNA 聚合酶Nati
USE－诱变实验
本方法中，两条寡核苷酸引物杂交到变性重组质粒 DNA 双链的同一条链上。一条引物（诱变引物）携带一个拟引进靶 DNA 序列的突变，第二条引物携带一个能破坏质粒单一限制酶位点的突变。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料带 mutS 表型（
USE－诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态 带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态 试剂、试剂盒
定点诱变实验
基本方案 利用PCR引物点突变 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
定点诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE寡核苷酸引物质粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蜡油无水乙醇仪器、耗材 离心管热循环仪离心机实验步骤 1. 利用突变区两侧的限制性内切酶位点将待诱变的DNA片段亚克隆进高拷贝数的载体中。 2. 用小量制备的质粒提取模板DNA，用TE缓冲液重悬100 ng DNA至终浓
酵母菌基因组转座子的诱变实验—－小载体聚合酶链反应
实验材料诱变转座子基因组文库质粒DNA试剂、试剂盒锚定囊泡引物1和2 、1 mol L MgCl2、普通小载体（UV)和mTn引物、转座子诱变酵母菌株、合适的限制性内切核酸酶（如AZmI或DraI)和缓冲液、10×T4 DNA连接酶缓冲液、5 mmol L ATP、400 U μL T4 DNA连接
酵母菌培养实验
今年就开始做这个天然酵种面包，一开始看了好多关于日本和台湾的书籍，关于天然酵种的做法，感觉是很简单的，但是又看到网上很多人都说失败率很高，我也看了好多高手做天然酵种，之前是对天然酵种是有点了解，但没亲身做过，自从德州农民做了天然酵种面包以后，好多人都在做天然酵种面包。我知道日本有很多面包房就用
区域特异性诱变实验
区域特异性诱变 实验方法原理 可在长达3‘的克隆化DNA片段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造
区域特异性诱变实验
区域特异性诱变实验，用于（1）基因诱导改造（2）基因的特定表达（3）临床抗肿瘤等靶点的发挥。实验方法原理可在长达3‘的克隆化DNA片段上产生大量的随机分布的核苷酸替换突变，在将DNA克隆到一个可用来分离单链DNA的载体后，用各种可造成特定碱基损伤的化学试剂处理。实验材料DNA试剂、试剂盒乙酸钠亚硝酸
区域特异性诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 乙酸钠亚硝酸钠TE无水乙醇dNTP反转录酶RNA酶洗脱液溴化乙锭仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 用限制性内切核酸酶消化DNA以获得目的DNA片段，将靶片段双向克隆到M13噬菌体载体或含有M13复制起始子的质粒载体中。从100 ml 感染细抱培养物中提取单链DN
DNA的接头分区诱变实验
Linker scanner mutations （接头分区突变）：体外在限制性片段加上位点，使两个DNA分子发生重组产生，结果在重组的位点加上连接序列。实验材料DNA试剂、试剂盒雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材培养箱水浴锅实验步骤1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA 试剂、试剂盒 雾水乙醇 EDTA T4 DNA连接酶 TE
DNA的接头分区诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 雾水乙醇EDTAT4 DNA连接酶TENaCl仪器、耗材 培养箱水浴锅实验步骤 1. 用Bal 31或外切核酸酶Ⅲ及S1核酸酶在质粒的目的区域产生一嵌套式的5’或3端'缺失突变体。首先在目的序列附近用一限制酶使质粒线性化，在用Bal 31消化时，应确定其切割效
酵母菌基因克隆实验
实验材料 酵母菌实验步骤 1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过
酵母菌RNA制备实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材 离心管离心机摇床实验步骤 1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期（OD600=1.0）。 2. 将培养液转移到50 ml，离心管，于4℃，1 500 g 离心3 min。 3. 弃上清，菌体沉淀用1 ml 冰冷的水
酵母菌的培养实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 葡萄糖仪器、耗材 摇床锥形瓶离心机实验步骤 1. 在30℃，氧气充足和以葡萄糖作碳源的条件下，野生型酿酒酵母菌生长得十分良好。当酵母菌在试管中培养时，接种酵母菌贮液后应轻轻振荡培养液以便菌体细胞分散均匀。2. 在作大体积液体培养时，酵母菌在锥形瓶中生长较好，使用瓶底
酵母菌细胞密度检测
实验材料 酵母菌仪器、耗材 分光光度计离心机实验步骤 1. 在培养基中细胞的密度可以通过分光光度计测定的菌液在600 nm 波长的光密度OD600值来放映。2. 要得到可靠的测量结果，菌液最好稀释到OD600值1以下，在这个范围内，毎0.1OD600相对于约3×105细胞/ml。如此推算，1OD