2D凝胶的蛋白Edman测序实验
试剂、试剂盒 SDS 抽样缓冲液分离胶缓冲液浓缩胶缓冲液SDS-PAGE 电泳缓冲液实验步骤 3.1 Cleveland 肽图谱[5]( 1 ) 样品进行 2D-PAGE 分离，然后用考马斯亮蓝（CBB ) 染色，去除含有蛋白质点的凝胶碎片。( 2 ) 用电泳浓缩仪洗脱凝胶中的蛋白质，2W 恒功率洗脱 2 h。洗脱后，再用 MQ 水透析两天，再冻干。a. 从 2D 胶中切下蓝色蛋白质点，用 MQ 水浸泡。b. 在装有蛋白质点（含有 5~20 块凝胶碎片）的 2 ml 离心管中加入 750 μl 电洗脱缓冲液摇晃 30 min。c. 将 12~15 cm 长的透析膜（小号，no.24，Wako，Osaka，Japan ) 放入 250 ml MQ 水中（用 300 ml 烧杯）煮沸 5 min。同时用 MQ 水浸湿小片玻璃纸。d. 关闭装有透析膜的容器的小口，打开容器的大口，装上透析膜，扭转，用夹子夹住加以封闭（图 18......阅读全文
2D－凝胶的蛋白－Edman－测序实验
试剂、试剂盒SDS 抽样缓冲液分离胶缓冲液浓缩胶缓冲液SDS-PAGE 电泳缓冲液实验步骤3.1 Cleveland 肽图谱[5]( 1 ) 样品进行 2D-PAGE 分离，然后用考马斯亮蓝（CBB ) 染色，去除含有蛋白质点的凝胶碎片。( 2 ) 用电泳浓缩仪洗脱凝胶中的蛋白质，2W 恒功率洗脱
2D－凝胶的蛋白－Edman－测序实验
试剂、试剂盒：SDS 抽样缓冲液 分离胶缓冲液
2D－凝胶的蛋白－Edman－测序实验
试剂、试剂盒 SDS 抽样缓冲液分离胶缓冲液浓缩胶缓冲液SDS-PAGE 电泳缓冲液实验步骤 3.1 Cleveland 肽图谱[5]( 1 ) 样品进行 2D-PAGE 分离，然后用考马斯亮蓝（CBB ) 染色，去除含有蛋白质点的凝胶碎片。( 2 ) 用电泳浓缩仪洗脱凝胶中的蛋白质，2W 恒功率洗
蛋白质测序——Edman降解法
蛋白质测序可用于： （1）鉴定蛋白质； （2）表征蛋白质翻译后修饰。 （3）分析蛋白质一级结构与功能的关系。实验方法原理主要有质谱法，利用蛋白质测序仪进行测序以及利用蛋白质对应DNA或mRNA进行间接测序。传统的蛋白质测序实验一般包括以下步骤：1.肽链的拆开和分离；2.测定蛋白质分子中多肽链的数目；
Edman－Sequencing－of－Proteins－from－2D－Gels
The Western blotting/sequencing technique using polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane is one of the most popular technique for Edman sequencin
蛋白质N端测序服务Edman法
服务简介几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。对蛋白N端
蛋白鉴定方法之微量测序
蛋白质的微量测序已成为蛋白质分析和鉴定的基石，可以提供足够的信息。 尽管氨基酸组分分析和肽质指纹谱（PMF）可鉴定由2-DE分离的蛋白，但最普通的N-末端Edman降解仍然是进行鉴定的主要技术。 目前已实现蛋白质微量测序的自动化。 首先使经凝胶分离的蛋白质直接印迹在PVDF膜或玻璃纤维膜上，染色
关于DNA测序测序凝胶的银染
染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子，大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。 1. 电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板，凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。 2. 固定凝胶：将凝胶（连玻璃板）放入塑料盘，用固定/停止溶液浸没，充分振荡20分钟或直至样品
磷酸化位点分析实验——高分辨凝胶电泳分离磷酸肽
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤在聚丙烯酰胺凝胶上用 2-DE 纯化磷酸肽是最近发表的制备技术，其结果与 2D-PP 结果相似。非变性凝胶等电聚焦结合碱性 40%PAGE 胶用于磷酸肽分离及比较分析。 32p 标记样品用放射自显影或磷储屏检测。用 Edman 测序方法鉴定蛋白质并确定磷酸化位
美国UVP公司推出BioSpectrum－2D－凝胶成像系统
美国UVP的BioSpectrum 2D凝胶成像系统为全自动、计算机控制系统，是专门为快速获取二维(如DIGE胶)成像所设计，并可直接进行分析。 系统特点： 使用该凝胶成像系统可获得高分辨率的2D 图像。全自动的制冷CCD(830万像素)与激光扫描相比，灵敏度
蛋白质的微量测序分析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 凝胶缓冲液谷胱甘肽疏基乙酸考马斯亮蓝仪器、耗材 电泳仪微量注射器实验步骤 1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。4.
蛋白质的微量测序分析实验
本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质的微量测序分析实验
基本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
凝胶阻滞试验分析 DNA 结合蛋白的方法是 Fried 和 Crothers(1981) 发明的，它是第一次为大肠杆菌乳糖阻抑物与其 DNA 结合位点的相互作用提供了动态的分析方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料作为对照的核提取物
凝胶中蛋白质的洗脱实验
SDS-PAGE 在确定样品中多肽的数量和大小方面已被证明是极有用的分析方法。若能熟练运用的话, 它还具有分离许多大小不一的单体蛋白质的能力。许多人在凝胶电泳应用的早期希望可以利用凝胶的高分辨率特性来获得小量的纯净蛋白质。实验步骤一、通过扩散来洗脱凝胶中的蛋白质将 SDS 从蛋白质中移除的早期方法由
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
实验材料 作为对照的核提取物或蛋白组分 核提取物或蛋白组分 试剂、试剂盒 Ficoll 400 聚
DNA－结合蛋白的凝胶阻滞分析实验
实验材料 作为对照的核提取物或蛋白组分核提取物或蛋白组分试剂、试剂盒 Ficoll 400聚乙烯醇蔗糖染色液10X Tris-氨基乙酸或Tris-硼酸-EDTA(TBE)缓冲液4%~7% 中性聚丙烯酰胺凝胶poly(dI-dC)32P标记的对照DNA32P标记的靶DNA仪器、耗材 杂交膜实验步骤 材
凝胶中蛋白质的洗脱实验
一、通过扩散来洗脱凝胶中的蛋白质将 SDS 从蛋白质中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 发表，但当用于微量的蛋白质时，这个方法既麻烦又会造成大部分蛋白质的损失。这一领域较多的早期方法已经发表（HagerandBurgess,1980)，但却需要重新讨论 (butbear
凝胶中蛋白质的洗脱实验
实验步骤 一、通过扩散来洗脱凝胶中的蛋白质 将 SDS 从蛋白质中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 发表，但当用于微量的蛋白质时，这个方法既麻烦又会造成大部分蛋白质的损失。 这一领域较多的早期方法已经发
蛋白质凝胶过滤层析实验
凝胶过滤层析（也叫分子筛）是利用具有多孔网状结构的颗粒的分子筛作用，根据被分离样品中各组分相对分子质量大小的差异进行分离的技术。 凝胶过滤层析（GF）法又称为排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖
关于DNA测序技术的测序凝胶板的制备
一、玻璃板的处理 银染测序的玻璃板一定要非常清洁，一般先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高(棕色)。短玻璃板经粘合溶液处理可将凝胶化学交联于玻璃板上。这一步对于在银染操作过程中防止凝胶撕裂至关重
DNA测序测序凝胶的银染的影响因素
测序产物的银染是显现序列信息的一种新方法，本系统的成败受几个因素的影响 ① 水的质量对于染色的成功极其重要。超纯水（NANOpureR或Milli-QR的水）或双蒸水可获得较好的效果，如果水中有杂质，则低分子量条带可能无法出现。 ② 碳酸钠也非常重要。使用新鲜的，美国化学学会级碳酸钠较好，如
蛋白质的微量测序分析实验2
测定N-末端封闭蛋白质的内部序列实验材料蛋白质试剂、试剂盒乙酸NaOH丽春红染料三氟乙酸仪器、耗材纤维素膜离心管滤膜实验步骤1. 电泳分离目标蛋白并转移到硝酸纤维素膜。 2. 将硝酸纤维素膜放入盛有50 ml 含0.1%丽春红S料的1%乙酸水溶液的经酸洗的petri 玻璃培养皿。轻轻摇动1 mi
蛋白质的微量测序分析实验1
验材料蛋白质试剂、试剂盒凝胶缓冲液谷胱甘肽疏基乙酸考马斯亮蓝仪器、耗材电泳仪微量注射器实验步骤1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。4. 剩余的1×
蛋白质的分离实验——凝胶层析法
蛋白质分离纯化是用生物工程下游技术从混合物之当中分离纯化出所需要得目的蛋白质的方法。应用于（1） 化学物质的分离、提纯、浓缩;（2）染料、染料中间体的浓缩及脱盐（3）超细粉体生产过程中的产品回收;（4）生产废水中有用物质的提纯、回用;（5）海洋生物提取物的浓缩、提纯（6）氨基酸、蛋白质的浓缩、提纯。
蛋白的常用蛋白鉴定方法
传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。 “满天星”式的2
关于DNA测序技术的测序凝胶的银染介绍
染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子，大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。 1.电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板，凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。 2. 固定凝胶：将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘，用固定/停止溶液浸没,充分振荡20分钟或直至样品中
蛋白质组鉴定技术
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE，那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里，我们不考虑传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效，而是因为它们通常耗时、耗
蛋白质组鉴定技术简述
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE，那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定。在这里，我们不考虑传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达。并不是因为这些方法无效，而是因为它们通常耗时、耗力，不
蛋白质组鉴定技术
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE，那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里，我们不考虑传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效，而是因为它们通常耗时