蛋白质N端测序服务Edman法
服务简介几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端,蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关,对蛋白进行N-端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。对蛋白N端测序主要分类两大类,其一为非质谱技术,其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处。蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的。Edman化学降解是测定蛋白质一级结构的方法主要是从蛋白质或多肽氨基酸末端进行分析,其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联,苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)转化为苯异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三个主要的化学步骤,每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基,同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解,而后通过转移的PTH-氨基酸鉴......阅读全文
蛋白质N端测序服务Edman法
服务简介几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端,蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关,对蛋白进行N-端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。对蛋白N端
蛋白质N端测序样品要求
检测仪器:岛津 PPSQ-31A 蛋白多肽自动测序仪 一、 蛋白质N端测序的主要应用: 1.样品:蛋白质,多肽样品的氨基酸序列测定 2.优势:能连续测定 60 个以上的氨基酸序列 3.来源:天然提取(动物/植物/微生物);合成多肽;重组蛋白等 二、 样品要求:
蛋白质N端测序样品要求
检测仪器:岛津 PPSQ-31A 蛋白多肽自动测序仪 一、 蛋白质N端测序的主要应用: 1.样品:蛋白质,多肽样品的氨基酸序列测定 2.优势:能连续测定 60 个以上的氨基酸序列 3.来源:天然提取(动物/植物/微生物);合成多肽;重组蛋白等 二、 样品要求:
蛋白质N端测序样品要求
检测仪器:岛津 PPSQ-31A 蛋白多肽自动测序仪 一、 蛋白质N端测序的主要应用:样品:蛋白质,多肽样品的氨基酸序列测定2.优势:能连续测定 60 个以上的氨基酸序列3.来源:天然提取(动物/植物/微生物);合成多肽;重组蛋白等二、 样品要求:纯度:>95(基于摩尔数)2.含量:50-100pm
蛋白质测序——Edman降解法
蛋白质测序可用于: (1)鉴定蛋白质; (2)表征蛋白质翻译后修饰。 (3)分析蛋白质一级结构与功能的关系。实验方法原理主要有质谱法,利用蛋白质测序仪进行测序以及利用蛋白质对应DNA或mRNA进行间接测序。传统的蛋白质测序实验一般包括以下步骤:1.肽链的拆开和分离;2.测定蛋白质分子中多肽链的数目;
N-端封闭蛋白质内部序列测定实验
实验材料 蛋白质样品(约 200 mol) 试剂、试剂盒 1%乙酸溶液(含丽春红 S 染料)1% 乙酸0.2 mol/L NaOH0.1 mol/L 乙酸溶液(含PVP-40)消化缓冲液1 mg/ml 胰蛋白酶层析溶液 A层析溶液 B 仪器、耗材 0.22 μm
N-端封闭蛋白质内部序列测定实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 蛋白质样品(约 200 mol)
N-端封闭蛋白质内部序列测定实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质样品(约 200 mol)试剂、试剂盒 1%乙酸溶液(含丽春红 S 染料)1% 乙酸0.2 mol/L NaOH0.1 mol/L 乙酸溶液(含PVP-40) 消化缓冲液 1 mg/ml 胰蛋白酶层析溶液 A 层析溶液 B仪器、耗材 0.22 μm 硝酸纤维素膜酸洗过的
科学依据/蛋白质测序仪
自著名的 Edman 降解技术成功从 N 末端开始测定蛋白质序列以来,蛋白质的结构分析有了重大进展。岛津 PPSQ -21A 蛋白测序仪(Protein sequencer)能够适于多种方法制备的样品。可进行 Pmol 水平的氨基酸序列分析。 LC 分析采用恒溶剂成分洗脱方式,氨基酸的鉴定、装置维护
用质谱数据对肽段从头测序实验(一)
实验方法原理单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列,即相邻肽段间相差一个氨基酸残基,用质谱分析肽阶梯,通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱,但碎片离子由人工完全解析。用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生,由 C 未端或N未端断
用质谱数据对肽段从头测序实验
实验方法原理 单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列,即相邻肽段间相差一个氨基酸残基,用质谱分析肽阶梯,通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱,但碎片离子由人工完全解析。用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生,由 C 未端或N未端
用质谱数据对肽段从头测序实验
方案一 方案二 方案三 实验方法原理 单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列,即相邻肽段间相差一个氨基酸残基,用质谱分析肽阶梯,通常用 MALD
2D-凝胶的蛋白-Edman-测序实验
试剂、试剂盒 SDS 抽样缓冲液分离胶缓冲液浓缩胶缓冲液SDS-PAGE 电泳缓冲液实验步骤 3.1 Cleveland 肽图谱[5]( 1 ) 样品进行 2D-PAGE 分离,然后用考马斯亮蓝(CBB ) 染色,去除含有蛋白质点的凝胶碎片。( 2 ) 用电泳浓缩仪洗脱凝胶中的蛋白质,2W 恒功率洗
2D-凝胶的蛋白-Edman-测序实验
试剂、试剂盒SDS 抽样缓冲液分离胶缓冲液浓缩胶缓冲液SDS-PAGE 电泳缓冲液实验步骤3.1 Cleveland 肽图谱[5]( 1 ) 样品进行 2D-PAGE 分离,然后用考马斯亮蓝(CBB ) 染色,去除含有蛋白质点的凝胶碎片。( 2 ) 用电泳浓缩仪洗脱凝胶中的蛋白质,2W 恒功率洗脱
2D-凝胶的蛋白-Edman-测序实验
试剂、试剂盒:SDS 抽样缓冲液 分离胶缓冲液
蛋白质结构分析小帮手岛津蛋白测序仪PPSQ51A/53A梯度系列
在生物体内包含有各种功能的蛋白质,这些蛋白质经过处理后成为成熟蛋白质并被释放到细胞外,它们在相互作用下可能会导致疾病。为了了解这些疾病的病因、并在疾病的预防、诊断、治疗及药物开发研究等方面取得进展,鉴定微量样品氨基酸序列的蛋白质鉴定分析工作就变得越来越重要。蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物
蛋白质自动测序仪的发展历史
1953年,瑞典化学家Edman采用异硫氰酸苯酯法测定蛋白质的N端序列,为氨基酸自动测序奠定了基础。 1967年,Edman和Begg根据异硫氰酸苯酯法测定原理设计了第一台蛋白质自动测序仪(旋转杯蛋白质测序仪),为蛋白质自动测序以及蛋白质自动测序仪的商品化生产提供了理论支持和样机。 1971
蛋白质测序
Edman降解法 实验方法原理 主要有质谱法,利用蛋白质测序仪进行测序以及利用蛋白质对应DNA或mRNA进行间接测序。传统的蛋白质测序实验一般包括以下步骤:1
氨基酸序列的测定方法
有两种方法,一是直接测序列法,常用Edman降解法,在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸(阿尔发)与PITC反应,标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱,在无水酸的存在下发发生降解,第一个氨基酸(AA1)经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析,可用;
氨基酸序列的测定方法
有两种方法,一是直接测序列法,常用Edman降解法,在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸(阿尔发)与PITC反应,标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱,在无水酸的存在下发发生降解,第一个氨基酸(AA1)经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析,可用;
蛋白鉴定方法之微量测序
蛋白质的微量测序已成为蛋白质分析和鉴定的基石,可以提供足够的信息。 尽管氨基酸组分分析和肽质指纹谱(PMF)可鉴定由2-DE分离的蛋白,但最普通的N-末端Edman降解仍然是进行鉴定的主要技术。 目前已实现蛋白质微量测序的自动化。 首先使经凝胶分离的蛋白质直接印迹在PVDF膜或玻璃纤维膜上,染色
蛋白质结构分析小帮手岛津蛋白测序仪PPSQ51A/53A梯度系列
在生物体内包含有各种功能的蛋白质,这些蛋白质经过处理后成为成熟蛋白质并被释放到细胞外,它们在相互作用下可能会导致疾病。为了了解这些疾病的病因、并在疾病的预防、诊断、治疗及药物开发研究等方面取得进展,鉴定微量样品氨基酸序列的蛋白质鉴定分析工作就变得越来越重要。蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物
大鼠N端前脑钠素(NTpro-BNP)ELISA检测法
大鼠N端前脑钠素(NT-pro BNP)ELISA试剂盒 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 NT-pro BNP 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 NT-pro BNP与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠NT-pro BNP,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的St
n端b型钠尿肽原高
门诊提问:b型钠尿肽高如何治疗?我的母亲前段时间感觉胸痛,我们就听医生的话做了检查,结果查出来b型钠尿肽高。b型钠尿肽高怎么治疗? 疾病解析: b型钠尿肽高,需要针对引起这种变化的原发疾病进行治疗。心功能不全是引起b型钠尿肽高的主要原因。患者有胸痛的症状,被检查出来这种情
蛋白质自动测序仪的工作原理
蛋白质测序仪主要检测的是蛋白质一级结构(氨基酸序列),其基本原理沿用艾德蒙(Edman)化学降解法,这也是经典的蛋白质测序方法。利用 Edman化学降解法测定蛋白质或多肽N末端序列,在测定过程中,氨基酸残基依次与异硫氰酸苯酯(PITC)作用,从蛋白质N末端依次切割下来,形成稳定的PTH氨基酸后进
新探针可实现对蛋白质N端组学深度富集检测
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/518515.shtm2月29日,中国科学院上海药物研究所研究员黄河、柳红合作,研究设计合成了一种含有吡啶甲醛片段的可断裂分子探针2PCA-Probe,可实现对蛋白质N-端的深度富集检测。相关研究发表于《美
新探针可实现对蛋白质N端组学深度富集检测
中国科学院上海药物研究所研究员黄河、柳红合作,研究设计合成了一种含有吡啶甲醛片段的可断裂分子探针2PCA-Probe,可实现对蛋白质N-端的深度富集检测。相关研究发表于《美国化学会志》。蛋白质水解是一种广泛存在的翻译后修饰方式,在多种生物过程中发挥重要作用。在正常组织中,大多数蛋白酶的活性受到严格调
自动多肽/蛋白质测序仪
2007年实验室对蛋白质测序仪的需求 Edman降解法是测定蛋白质序列的经典方法,该方法由瑞士生物化学家佩尔·维克托于1950年创立。Edman降解法通常是以周期的形式来表征。对于一个完整的周期,异硫氰酸苯酯标记上指定肽段的N末端,环化,之后被标记的氨基酸在酸性条件下从肽链中游离出
测定蛋白质的构型和功能要用什么仪器
构型这个概念是指 一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过共价键的断裂和重新形成是不会改变的。构型的改变往往使分子的光学活性发生变化。蛋白质的构型就是一级结构,指其氨基酸排列顺序。测定蛋白质的构型的主要有两种方法:Edman降解(Edman degradation)和质谱法。EDM
蛋白质组鉴定技术
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时