蛋白质组鉴定技术简述
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定。在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达。并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时、耗力,不适合高流通量的筛选。目前,所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序;进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。 (1) 图象分析技术(Image analysis)。 “满天星”式的2-DE图谱分析不能依靠本能的直觉,每一个图象上斑点的上调、下调及出现、消失,都可能在生理和病理状态下产生,必须依靠计算机为基础的数据处理,进行定量分析。在一系列高质量的2-DE凝胶产生(低背景染色,高度的重复性)的前提下,图象分析包括斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建。首先,采集图象通常所用的系统是电荷耦合CCD(c......阅读全文
蛋白质组鉴定技术
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时
蛋白质组鉴定技术
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时、耗力,不
蛋白质组鉴定技术
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时、耗
蛋白质组的鉴定方法
如蛋白质鉴定结果、蛋白质的亚细胞定位、蛋白质在不同条件下的表达水平等信息。目前应用最普遍的数据库是NRDB和dbEST 数据库。NRDB由SWISS2PROT 和GENPETP 等几个数据库组成,dbEST是由美国国家生物技术信息中心(NCBI)和欧洲生物信息学研究所(EBI)共同编辑的核酸数据库;
蛋白质组鉴定技术简述
如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE,那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定。在这里,我们不考虑传统的蛋白鉴定方法,如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析,或者在一个有机体中有意义的基因的过表达。并不是因为这些方法无效,而是因为它们通常耗时、耗力,不
蛋白质组的鉴定方法
如蛋白质鉴定结果、蛋白质的亚细胞定位、蛋白质在不同条件下的表达水平等信息。目前应用最普遍的数据库是NRDB和dbEST 数据库。NRDB由SWISS2PROT 和GENPETP 等几个数据库组成,dbEST是由美国国家生物技术信息中心(NCBI)和欧洲生物信息学研究所(EBI)共同编辑的核酸数据库;
简述蛋白质组的鉴定方法
如蛋白质鉴定结果、蛋白质的亚细胞定位、蛋白质在不同条件下的表达水平等信息。目前应用最普遍的数据库是NRDB和dbEST 数据库。NRDB由SWISS2PROT 和GENPETP 等几个数据库组成,dbEST是由美国国家生物技术信息中心(NCBI)和欧洲生物信息学研究所(EBI)共同编辑的核酸数据
蛋白质组学鉴定技术流程
蛋白质组(Proteome)的概念,蕞早由澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams于1994年首先提出的,是指一个基因组(Genome),或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。蛋白质组学(Proteomics)以细胞、组织或生物体全体蛋白质为研究对象,通过高通量的色谱质谱联用技术
蛋白质组的分析鉴定方法主要有哪些
为探究生物进程的分子机制,需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用.研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下:一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法.其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道 基因在酵母细胞内的表
逐次修正基因组法:有效提高非模式生物蛋白质组鉴定...
逐次修正基因组法:有效提高非模式生物蛋白质组鉴定的新策略随着高通量测序技术的不断崛起,全基因组测序也逐步普及。越来越多的物种基因组予以公布。目前,主要有两种获得研究物种参考基因组的策略:de novo 基因组拼接和基于mapping算法的基因组序列修正,mapping是指将所有测序读段通过序列比对定
磷酸化蛋白质组鉴定技术路线及经典案例
蛋白质翻译后修饰(PTMs)几乎参与了细胞所有正常生命活动的过程,并发挥十分重要的调控作用。蛋白修饰已经成为国际上蛋白质研究的一个极其重要的领域,目前研究比较成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。蛋白质磷酸化是生物体中最常见、最重要的一种蛋白质翻译后修饰方式,它可以通过激发、调节诸多信号通路进而
暨大研发另类质谱鉴定算法,大幅提高蛋白质组鉴定能力
暨南大学的研究人员利用翻译组测序(RNC-seq)数据作为稳态细胞内蛋白质的“标准答案”,并另辟蹊径,提出了蛋白水平上的一种简单有效的多算法结果整合策略,不用做额外的实验,零成本轻松提高蛋白质组鉴定数量,同时有效降低假阳性率。 鸟枪法质谱(shotgun mass spectrometry)是
修正基因组法有效提高非模式生物蛋白质组鉴定的新策略
随着高通量测序技术的不断崛起,全基因组测序也逐步普及。越来越多的物种基因组予以公布。目前,主要有两种获得研究物种参考基因组的策略:de novo 基因组拼接和基于mapping算法的基因组序列修正,mapping是指将所有测序读段通过序列比对定位到参考基因组上。De novo 基因组拼接是利用短
暨大另类质谱鉴定算法策略大幅提高蛋白质组鉴定能力
鸟枪法质谱(shotgun mass spectrometry)是蛋白质组研究的标准研究方法。从质谱谱图中鉴定蛋白质需要依赖搜库算法,现有许多算法被开发出来,常见的如Andromeda(Maxquant), Mascot, COMPASS, X!Tandem, pFind, InsPecT, P
上海生科院:预处理提高定量蛋白质组数据鉴定效率
11月30日,国际学术期刊《分子与细胞蛋白质组学》(Molecular & Cellular Proteomics)在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所系统生物学重点实验室曾嵘研究组与美国范德堡大学定量科学中心石瑜研究组的最新合作研究成果,揭示了稳定同位素化学标记高精
磷酸化蛋白质组鉴定技术路线及经典案例介绍
今天,小编跟您聊聊磷酸化蛋白质组鉴定! 蛋白质翻译后修饰(PTMs)几乎参与了细胞所有正常生命活动的过程,并发挥十分重要的调控作用。蛋白修饰已经成为国际上蛋白质研究的一个极其重要的领域,目前研究比较成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。 蛋白质磷酸化是生物体中最常见、最重要的
如何鉴定蛋白质
双缩脲反应产物双缩脲结构双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成. 双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液; 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。 双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。 具体方法是: 先将双缩脲试剂A加入组织样液,摇荡均
蛋白质鉴定方法
最简单的方法,也是人们最耳熟能详的方法,就是对物体进行灼烧,看是否能问到烧焦的羽毛味,如果可以问到烧焦的羽毛味,那么证明有蛋白质的存在。2中学的化学课上也教过我们不少的方法,比如说吧蛋白质和浓HNO3进行反应,如果能够变性产生黄色不溶性物质,那么该物体是蛋白质。3还有一种方法就是把含有蛋白质的屋子磨
蛋白质组和蛋白质组学分析
随着人类基因 组计划研究成果的公布,人们对基因的认识逐渐清晰,但基因数量的有限性和基因结构的相对稳定性,与生命现象的复杂性和多样性之间存在巨大反差。如何了解众多的基因与危害人类身心健康的疾病之间的关系,对生命科学研究者来说仍是一项长期而艰巨的任务。因此,作为生命活动的直接承担者――蛋白质,成为后基
SELDI蛋白质纯化鉴定
实验目标针对血清、血浆、体液、组织、真菌、细菌、细胞培养物以及植物等样本的差异蛋白质组研究,以蛋白质芯片为载体,通过对目标疾病样本组及对照组之间进行鉴定,以期找到能够区分不同组别的差异峰,并通过对差异峰进行蛋白质鉴定找到与目标疾病密切关联的基因/蛋白。 实施方案 一、目标蛋白1.利用SELD
蛋白质鉴定更加准确
图1. 蛋白混合酶解产物的LC-MS/MS 离子色谱图,反相分离时间为90min。 质谱技术在蛋白质组学研究中扮演着非常重要的角色。高分辨率、高质量精度的质谱仪能够降低实验中误差,增加实验数据的准确性。 蛋白质鉴定是蛋白质组学研究的核心所在,而质谱技术在蛋白质组学中扮演着非常重
蛋白质组与蛋白质组学简介2
3 甲基化干扰实验用来检测蛋白质的结合位点。甲基化修饰的DNA探针可以干扰蛋白质的结合。结合位点上未被修饰的DNA片段才能与蛋白结合,然后将DNA从被修饰的碱基处切割,电泳分离,结合蛋白的DNA在结合位点上不能被修饰,不能切断,可确定结合位点的位置。 4 Dnase I 足纹分析 蛋白
蛋白质组与蛋白质组学简介1
一、蛋白质组概念:一个细胞、一个组织或一个机体全部基因所表达的全部蛋白质。 二、蛋白质组学研究范畴 1.蛋白质和蛋白质间 2.蛋白质和核酸之间 3.蛋白质及其组成质点的分离、分析、鉴定 4.蛋白质结构分析 5.生理、病理或不同发育状态下蛋白质组表
人类血浆蛋白质组遗传图谱公开-有助鉴定新的治疗靶点
英国《自然》杂志6月6日发表了一项遗传学最新成果:剑桥大学研究团队量化了人体血浆中的3000多种蛋白质,成功绘制出人类血浆蛋白质组遗传图谱,其中89%前所未知。该研究发现的遗传变异与个体蛋白水平之间的联系,或意味着可以借此鉴定出新的治疗靶点,并将现有药物用于治疗新的疾病。 血浆蛋白是指血浆中的
蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线
基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类
蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线
基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类
基于QOTqIT质谱系统的蛋白质组学快速鉴定(三)
表3 不同的最大注入时间与AGC下HeLa样本的鉴定结果 图3 HeLa样本ATAGDTHLGGEDFDNR肽段二级谱图和匹配信息 A: 1 μg样本量, CID碎裂; B: 1 μg样本量, HCD碎裂; C: 50 ng样本量, HCD碎裂 图4 HeLa样本肽段鉴定结果比较 A: HCD和CI
基于QOTqIT质谱系统的蛋白质组学快速鉴定(四)
A: 1 μg HeLa结果比较; B: 50 ng HeLa结果比较. 以每项最高值为100% 3 讨论 随着“一小时酵母蛋白质组”全覆盖的实现, 蛋白质组深度覆盖研究迎来新的时代[6]. 在复杂样本蛋白质组研究中, 传统方法需要进行二维分离、分级的方式简化样本、充分分离, 这样不仅操作费力,
基于QOTqIT质谱系统的蛋白质组学快速鉴定(一)
摘要 随着“一小时酵母蛋白质组”的实现, 短梯度下实现蛋白质组深度覆盖成为可能。本文利用全新Q-OT-qIT三合一质谱系统进行“一小时蛋白质组”分析与优化。50 min有效梯度, 单次实验分别从1 μg和50 ng HeLa全蛋白中鉴定到20860和14100条肽段, 对应到3865和287
Orbitrap-Exploris™-480的鉴定性能、软件特性和蛋白质组学应用1
在这期中我们一起来领略一下Exploris 480的强悍性能,以及新的软件特性如何将蛋白质组学推向一个新的高度。1.Orbitrap Exploris™ 480的鉴定性能 Exploris 480是在Q Exactive HF-X的基础上改进而来,因此其绝对性能指标也是达到了新的高度。其最高扫