GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹2

GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹2

第二部分：免疫印迹染色[仪器、材料与试剂](一)仪器与器具1．电泳仪(要求为大电流低电压)2．电泳转移槽及转移夹3．水平摇床4．小塑料盒5．镊子6．搪瓷盘(二)材料1．醋酸纤维膜2．滤纸3．一次性塑料手套(三)试剂1．转移电泳缓冲液25mmo1／L Tris，192mmo1／L 甘氨酸，20％甲醇，

GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹1

[实验原理]免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上，用得最多的材料

T克隆绿色荧光蛋白（GFP）基因实验

【原理】经TaqDNA聚合酶扩增后的PCR产物末端都带有单个A。正是基于这一原理，pGEM-T质粒经EcoRV切成平端后，在开口端加上一个T制成T载体，一方面避免了自身环化，另一方面由于T-A互补，从而提高了T载体与PCR产物之间的连接效率。由于T-A克隆只需纯化PCR产物，因而操作较为简便。pGE

绿色荧光蛋白GFP性质

　　GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比荧光素（fluorescein）强，特别在450～490nm蓝光波长下更稳定。　　GFP需要在氧化状态下产生荧光，强还原剂能使GFP转变为非荧光形式，但一旦重新暴露在空气或氧气中，GFP荧光便立即得到恢复。而

绿色荧光蛋白（GFP）的应用

　　骨架和细胞分裂　　Kevin Sullivan's 实验室　　酵母菌内SPB 和微管动力学　　酵母菌中肌动蛋白的动力　　果蝇中MEI-S332蛋白　　果蝇有丝分裂和mRNA运输　　网丙菌属细胞骨架　　RNA剪切因子的核内运输　　网丙菌属的趋化作用　　网丙菌属中细胞骨架动力和细胞运动　　核

绿色荧光蛋白(GFP)标记亚细胞定位

一、原理利用绿色荧光蛋白(GFP)来示踪胞内蛋白的技术。利用GFP融合蛋白技术来进行活细胞定位研究是目前较为通行的一种方法，在光镜水平进行研究，不需要制样，没有非特异性标记的影响。并且GFP的分子量为27kD，经激光扫描共聚集显微镜激光照射后，可产生一种绿色荧光，从而对蛋白质进行精确定位。激光扫描共

GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些

检测方法：1、实验准备 Modulus单管型多功能检测仪 Blue荧光模块(P/N 9200-040) 微量适配器(P/N 9200-928) 纯化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502） 200ul加样器与20ul加样器 TE Buffer (10 mM Tris-

GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些

检测方法：1、实验准备 Modulus单管型多功能检测仪 Blue荧光模块(P/N 9200-040) 微量适配器(P/N 9200-928) 纯化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502） 200ul加样器与20ul加样器 TE Buffer (10 mM Tris-

GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些？

检测方法：1、实验准备 Modulus单管型多功能检测仪 Blue荧光模块(P/N 9200-040) 微量适配器(P/N 9200-928) 纯化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502） 200ul加样器与20ul加样器 TE Buffer (10 mM Tris-

荧光素酶报告基因与绿色荧光蛋白（GFP）有什么区别

只能先就标题的问题谈谈我的认识。后面的追问我了解得也不全面。1。两者的结果检测方法不同。gfp绿色荧光蛋白，很直观，能够直接检到荧光，在普通的细胞培养条件下都能够观察到，对细胞的生命活动和其他并行的实验安排影响很小。荧光素酶报告基因使用起来比gfp多一个步骤，因为荧光素酶是个酶，不发荧光，发荧光的是

荧光素酶报告基因与绿色荧光蛋白（GFP）有什么区别

1。两者的结果检测方法不同。gfp绿色荧光蛋白，很直观，能够直接检到荧光，在普通的细胞培养条件下都能够观察到，对细胞的生命活动和其他并行的实验安排影响很小。荧光素酶报告基因使用起来比gfp多一个步骤，因为荧光素酶是个酶，不发荧光，发荧光的是它的底物，荧光素。荧光素在细胞里（要说萤火虫细胞我就不知道了

活体GFP绿色荧光成像系统

  系统提供动物活体绿色荧光蛋白的实时观察与成像等一系列的荧光检测。能够应用在像深度肿瘤，大动物等活体肿瘤追踪观察成像研究。    该设备是一个高灵敏度的图像成像工作系统，主要利用特定波长的激光进行激发后，通过高灵敏度的致冷CCD进行实时检测后，获得所需的各类 特性的图像，有利于进一步的分析作用 。

绿色荧光蛋白（GFP）在科学研究上的应用

绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，简称GFP)bs-2194P是一种能在蓝色波长光线激发下发出荧光的特殊蛋白质，正是这种神奇的性质，让它成为当今生物化学领域最有力的工具之一，被称为“生物北斗”。GFP在科学研究上有着惊人的用途，因为它能够使我们直接看到细胞内部的运动、分布

高校实验室如何去观察绿色荧光蛋白GFP？

绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白，当受到紫外或蓝光激发时，发射绿色荧光。其特点在于：它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋白质一级序列固有的来源于水母的氨基酸残基组成。水母的绿色荧光蛋白很稳定，无种属限制，已在多种动植物细胞中表达成功并产生荧光。GFP 的荧

GFP：荧光蛋白的起源

作者： 罗辑科学        绿色荧光蛋白(简称GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。GFP的荧光非常稳定，在激发光照射下，其抗光漂白能力比荧光素强很多。因此GFP及其变种被广泛地用作分子标记；此外，GFP还被用作砷和一些重金属的传感器。   

GFP：荧光蛋白的起源

     绿色荧光蛋白(简称GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。GFP的荧光非常稳定，在激发光照射下，其抗光漂白能力比荧光素强很多。因此GFP及其变种被广泛地用作分子标记；此外，GFP还被用作砷和一些重金属的传感器。       1962年，下村

GFP：荧光蛋白的起源

　　绿色荧光蛋白(简称GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。GFP的荧光非常稳定，在激发光照射下，其抗光漂白能力比荧光素强很多。因此GFP及其变种被广泛地用作分子标记；此外，GFP还被用作砷和一些重金属的传感器。　　 1962年，下村脩和约翰逊在一

GFP抗体—绿色荧光蛋白的单克隆和多克隆标签抗体

GFP（Green Fluorescent Protein，绿色萤光蛋白）是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。GFP标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛 应用于各种细胞

绿色荧光蛋白融合技术在激素类兴奋剂检测中的应用

实验方法原理重组人生长激素（rhGH）与胰岛素生长因子-1（ICF-Ⅰ）是目前运动员滥用严而又难以检测的内源性激素类兴奋剂。以IGF-Ⅰ作为目标分析物，利用分子生物学方法构建绿色荧光蛋白（GFP）与IGF-Ⅰ的融合蛋白GFP-IGF。GFP是目前应用广泛的一种生物报告分子，具有稳定、无毒害、无需底物

绿色荧光蛋白基因与红色荧光蛋白基因是同源的吗

绿色荧光蛋白基因与红色荧光蛋白基因是同源的（1）在该实验中，绿色荧光蛋白基因是目的基因．（2）③是将目的基因导入受体细胞的过程，当受体细胞是动物细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术．（3）GFP基因可以作为标记基因，标记基因的作用是鉴定受体细胞中是否含有目的基因．（4）动物细胞培养时，其培养

绿色荧光蛋白的应用

由于荧光蛋白能稳定在后代遗传，并且能根据启动子特异性地表达，在需要定量或其他实验中慢慢取代了传统的化学染料。更多地，荧光蛋白被改造成了不同的新工具，既提供了解决问题的新思路，也可能带来更多有价值的新问题。

绿色荧光蛋白简介

绿色萤光蛋白（Green fluorescent protein；简称GFP），由下村脩等人于1962年在维多利亚多管发光水母中发现，其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光，整个发光的过程中还需要冷光蛋白质水母素的帮助，冷光蛋白质与钙离子（Ca2+）可产生交互作用。2008

Westernblotting－蛋白质印迹（免疫印迹）

蛋白质免疫印迹实验

蛋白质免疫印迹实验             实验步骤 操作流程 (1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张

蛋白质免疫印迹实验

这是一个建立在 B urnette 实验方案基础上的实验流程，小于 80k D a 的蛋白质的转移效果很好并且结果稳定, 重复性好。应用这种膜转移方法，我们利用多克隆抗体在下面的样本中检测目的蛋白：哺乳动物细胞和细菌溶解产物、细胞培养上清、组织提取物以及组织液。虽然下列实验条件是根据我们自己的实验需

蛋白质免疫印迹实验

实验步骤 操作流程(1)制备与凝胶大小一致的硝酸纤维素膜一张，吸水滤纸 2 张 (Whatman 3 MM)。(2) 将凝胶在转印缓冲液中浸泡 30m in，将转移膜、滤纸和海绵垫也在同样的缓冲液浸湿。(3) 安装转印「夹心三明治」。将凝胶放置在玻璃平板上，然后将一张浸湿的滤纸放在凝胶上，如

蛋白质免疫印迹技术

实验概要免疫印迹是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测样品或提取物中某种特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝胶紧贴着膜放置，在电流的作用下蛋白质从凝胶迁移到膜上并且被固定，常用的膜是硝酸纤维素或 PVDF（聚偏乙烯氟化物）。膜是凝胶蛋白质的复制品，然后可以与抗体结合后进行染色。实验步骤1.   样品准备1)   抽

GFP－和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验－2

16. 标记反应以后，采用下述公式计算标记率：                                           Aλ X M / [ ( A280-ƒ X Aλ ) X ελ ]式中 Aλ是染料在其最大吸收波长λ处的吸收度，A280 是蛋白质在 280nm 的吸收度，M 是以

绿色荧光蛋白的发现过程

1994年，华裔美国科学家钱永健（Roger Yonchien Tsien）开始改造GFP，有多项发现。世界上用的大多数是钱永健实验室改造后的变种，有的荧光更强，有的黄色、蓝色，有的可激活、可变色。到一些不常用做研究模式的生物体内找有颜色的蛋白成为一些人的爱好，现象正如当年在嗜热生物中找到以后应用广

绿色荧光蛋白的基本结构

野生型绿色荧光蛋白，最开始是 238 个氨基酸的肽链，约 25KDa。然后按一定规则，11 条β-折叠在外周围成圆柱状的栅栏；圆柱中，α-螺旋把发色团固定在几乎正中心处。发色图被围在中心，能避免偶极化的水分子、顺磁化的氧分子或者顺反异构作用与发色团，致使荧光猝灭。荧光是荧光蛋白最特别的特点，而其中的