细胞培养（cellculture）的一些常见问题与解答2
6、血清的有关问题：新生牛血清：新出生牛5天内取血制成小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋白含量≤10mg/dl。（2）优等胎牛血清：经过3次100纳米过滤，内毒素含量≤25EU/ml，血红蛋白含量≤25mg/ml。（3）标准胎牛血清：3次100纳米过滤，低内毒素，低血红蛋白含量。（4）活性碳/葡聚糖处理血清：激素含量大大降低。（5）透析型胎牛血清：次黄嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。7、培养基在使用过程中应注意的问题：（1）培养基在使用前需37℃预热或在室温平衡后再使用。（2）细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。（3）尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。（4......阅读全文
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答2
6、血清的有关问题：新生牛血清：新出生牛5天内取血制成小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答2
6、血清的有关问题：新生牛血清：新出生牛5天内取血制成小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答1
1、细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++， Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0， 温度37 ℃其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答1
1、细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++， Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0， 温度37 ℃其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一
细胞培养常见问题与解答2
8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。9.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白
293细胞培养(cell－culture)技术
1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，
细胞培养常见问题与解答4
22.在High Five无血清培养基中去污剂的浓度是多少？ High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。 23.High Five细胞用多大的密度冻存？ 3.0x10E6 ce
细胞培养常见问题与解答1
1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。2.如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0
细胞培养常见问题与解答3
15.如何检测内毒素(热源)水平？ LAL（Limulus Amebocyte Lysate）试验是可用的最敏感和特异的检测细菌内毒素的方法。Levin和Bang 发现细菌可引起鲎（Limulus polyphemus）血管内的凝集作用。内毒素启动一个细胞内酶原系统（丝氨酸蛋白酶级
ES－Cell－Culture－and－Manipulation2
Picking ES cell clonesOne or two days before picking colonies prepare 24-well plates of feeders. You can also use alternate protocols that utilize 96-
植物细胞培养（plant－cell－culture）技术概述
植物细胞培养技术就是为了某种目的而在细胞水平上对离体植物细胞或原生质体进行的一系列生物工艺学操作。它包括分离、培养、再生以及一系列相关的操作。就有用化合物的生产来说，它主要是指在无菌条件下通过悬浮培养植物细胞生产有用化合物的过程。理论与技术基础：植物细胞全能性、微生物液体深层发酵系统、遗传工程
原代神经细胞培养方法－Neuron－Cell－Culture
1. Preparation of coverslips1.1- Mass cultureOur standard mass cultures are plated on astrocytes. Those, in turn, are plated on glass coverslips pre-
细胞培养的八个常见问题与解答(FAQ)
1 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DM
Maintenance－of－Cell－Culture
Maintenance of Cell CultureAuthor: Nanci DonackiSource: Contributed by Nanci DonackiDate Added: Tue May 14 2002Date Modified: Tue Apr 27 2004Abstract:
Bacterial－cell－culture
MaterialsGlass culture tubes with metal caps and labelsGrowth medium, from media room or customizedGlass pipette tubesParafilmEquipmentVortexerFireboy
细胞培养常见问题解答
1.如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2.何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更
细胞培养板的选择与常见问题解答（一）
细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型）；培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。（1）平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择：贴壁细胞一
细胞培养板的选择与常见问题解答（二）
(4)细胞分布不均及解决办法问：我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊？我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题啊？答：请问你的细胞是如何混匀的？是滴管吹打还是振荡培养板？如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少
细胞冻存常见问题与解答FAQ2
14、DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO 等级， 必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即为无菌状况， 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4°C， 避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质，
细胞培养常见问题解答（三）
21 侦测出细胞株有支原体污染时， 该如何处理?直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。22 CO2 培养箱之水盘如何保持清洁?定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。23 为何培养基保存于4 °C 冰箱中，颜色会偏暗红色， 且pH值会越来越偏碱性?培养基保存于4 °C 冰箱中，
细胞培养常见问题解答（一）
1 冷冻管应如何解冻?取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO?除少数特别注明对D
细胞培养常见问题解答（二）
11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞， 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞死亡。12 细胞之接种密度为何?依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生
细胞培养常见问题解答（二）
16 细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。17 应如何避免细胞污染?细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室
细胞培养常见问题解答（四）
另：这里补充一下培养用品的消毒，供参考：细胞培养的最大危险是发生培养物的细菌，真菌和病毒等微生物的污染，污染主要是由于操作者的疏忽而引起，常见的原因有操作间或周围空间的不洁，培养器皿和培养液消毒不合格或不彻底，由于有关培养的每个环节的失误均能导致培养失败，故细胞培养的每个环节都应严格遵守操作常规，防
细胞培养常见问题解答（一）
1 冷冻管应如何解冻?取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO?除少数特别注明对D
Cell－Culture－Media－and－Solutions
Antimycotic/antibiotic media:To 1 liter of sterile RPMI 1640 with 2mM L-glutamine, add:165.0 ml fetal bovine serum, heat inactivated12.0 ml 200mM (100
Cell－Culture－Media－and－Solutions
Cell Culture Media and SolutionsDec. 18, 1990R. VeileAntimycotic/antibiotic media:To 1 liter of sterile RPMI 1640 with 2mM L-glutamine, add:165.0 ml f
ES－Cell－Culture－and－Manipulation
MediaHigh glucose DMEM (-pyruvate, -glutamine)20% Heat-inactivated Fetal calf serum (can vary by cell type, be sure!!)1X l-glutamine1X Penicillin/stre
Cell－Suspension－Culture－of－Arabidopsis
实验概要Cell Suspension Culture of Arabidopsis 主要试剂10% (v/v) Household BleachCallus Induction Medium Gamborg's B5 Basal Medium 0.5 g/liter M
stem－cell－culture－protocol
实验概要stem cell culture protocol主要试剂cell culture supplies and reagentssEnvironment: cell culture requires a sterile environment, so it needs a separat