miRNA和siRNA简介及区别
1998年，Andrew Fire和Craig Mello提出了一项新技术：通过dsRNA诱导特异基因的沉默，即所谓RNAi。2000年，Amy Pasquinelli等将lin-4和let-7作小时序RNAs(stRNAs，mall temporal RNAs)。RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。SiRNA 在RNA沉寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素。siRNA是RNAi途径中的中间产物，是RNAi发挥效应所必需的因子。SiRNA的形成主要由Dicer和Rde-1调控完成。由于RNA 病毒入侵、转座子转录、基因组中反向重复序列转录等原因,细胞中出现了dsRNA，Rde-1(RNAi缺陷基因-1)编码的蛋白质识别外源dsRNA，当dsRNA达到一定量的时候，Rde-1引导......阅读全文
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至
siRNA－转染程序
A．siRNA转染的方法 哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法（例如,显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面：1. 转染试剂的用
SiRNA用户指南
Selection of siRNA duplexes from the target mRNA sequenceUsing Drosophila melanogaster lysates (Tuschl et al. 1999), we have systematically analyzed t
siRNA对照解析
A．普通阴性对照 1.siRNA实验应该有阴性对照；2.通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照；3．Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性；4．阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因同源性很低。 B．荧光标记阴性对照 1. R
siRNA表达载体
多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人
siRNA的转染
将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA )和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA 且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA 复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转
siRNA制备方法
体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si
siRNA表达框架
siRNA表达框架(siRNA expression cassettes，SECs)是一种由PCR得到的siRNA表达模版，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。这个方法最早是由Castanotto和其同事采用，包括一个RNA polⅢ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA pol I
siRNA－Design－Guidelines
Using siRNA for gene silencing is a rapidly evolving tool in molecular biology. There are several methods for preparing siRNA, such as chemical synthe
戚益军教授Cell子刊发布小RNA研究新发现
来自中国医学科学院、清华大学的研究人员在新研究中证实，在拟南芥中cma33 / XCT通过调节Dicer-Like（DCL）基因的转录调控了小RNA(sRNA)的生成。这一研究发现发表在8月刊的《分子植物》（Molecular Plant）杂志上。 现任职于中国医学科学院及清华大学的戚益军（Y
戚益军教授Cell子刊发布小RNA研究新发现
来自中国医学科学院、清华大学的研究人员在新研究中证实，在拟南芥中cma33 / XCT通过调节Dicer-Like（DCL）基因的转录调控了小RNA(sRNA)的生成。这一研究发现发表在8月刊的《分子植物》（Molecular Plant）杂志上。 现任职于中国医学科学院及
大分子物质的简介和分子区别的简介
大分子物质是分子量较大的物质。从生物和化学两个方面来解释，有不同的物质。生物方面主要有多糖，蛋白质，核酸等。化学方面主要是高聚物等高分子化合物。 分子区别 所谓粒径，就是颗粒的直径、大小或尺寸。现实的粉体颗粒，如滑石粉、碳酸钙、水泥等颗粒，其形状是不规则的，粒 径如何描述？实际上，迄今为止
上海生科院发明一种高效安全的新型RNAi载体
10月12日，国际学术期刊Nature Communications 在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所国家蛋白质科学中心（上海）吴立刚研究组的最新研究成果：Ribozyme-enhanced single-stranded Ago2-processed inter
miRNA的特征、功能及识别方法等详解（一）
什么是miRNAMicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。据推测，这些非编码小分子RNA（miRNAs）参与调控基因表达
吴立刚课题组Nature子刊发布RNAi新工具
来自中科院上海生命科学研究院的研究人员报告称，他们设计出了一种替代性的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）前体，将之命名为saiRNA (single-stranded, Argonaute 2 (Ago2)-processed interfering RNA)
分子细胞中心等研发出系统性鉴定siRNA脱靶位点新方法
12月4日，Molecular Therapy–Nucleic Acids在线发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心（生物化学与细胞生物学研究所）吴立刚研究组，上海市计划生育科学研究所李卫华研究组与扬州大学赵雅研究组合作的研究成果Identifying Cleaved and Noncleav
如何预测和鉴定miRNA的靶基因
免疫沉淀当然，确定miRNA与mRNA之间的互作，我们还有更直接的方法，那就是从实验上寻找物理相互作用。我们可以利用RNA诱导沉默复合物（RISC）中的Argonaut（AGO）蛋白的抗体进行免疫共沉淀（co-IP）。目前更先进的方法是通过紫外线照射以交联复合物，然后开展深度测序以鉴定发现的RNA，
siRNA体外转染——GenMuteTM－siRNA体外转染的优化
GenMuteTM siRNA转染试剂（Cat#SL100568）是市场上最有力的siRNA传递工具之一。最佳的siRNA浓度范围是1.0nM到10nM，过多的siRNA可能导致沉默效果差的“洪水效应”。我们实验室已经使用GenMuteTM转染试剂成功敲除了内源表达的生长因子。以24孔板为例，如下步
慢病毒包装的原理
病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增，也只能在293A里扩增，其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的，野生型的慢病毒载体是可以复制的，但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。简单来说，就是把相应的涉及相应功能的元件进行替换或者删除。慢病毒
小分子RNA——microRNA综述(1)
RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA 干扰（RNA interference）的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有
植物miRNA及piRNA的逆转录
miRNA在植物的发育、抗病、和应激反应中发挥着重要作用。一般认为，这些小的非编码RNA通过靶向mRNA剪切，在后转录水平调节植物的基因表达。这些基因表达中的靶向变化由数百个成熟miRNA的差异表达所调控，每个成熟miRNA结合在靶mRNA的特定序列上。因此，对植物的成熟miRNA调控和表达进行分析
RNAi的作用机制及siRNA的合成方法
RNAi的作用机制及siRNA的合成方法RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double strandedRNA， dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可以抑制不同类型细胞的靶向基因表达，用特异性的抗体几乎检测不到靶向
关于小分子RNA的作用方式介绍
microRNA-RISC对靶基因mRNA的作用主要取决于它与靶基因转录体序列互补的程度，有三种方式。 第一种是切断靶基因的mRNA分子——miRNA与靶基因完全互补结合，作用方式和功能与siRNA非常相似，最后切割靶mRNA。在植物中，大部分miRNA都以这种方式，靶基因mRNA断裂后，无p
关于siRNA机制的基本介绍
1.长dsRNA（可来自发夹，互补RNA和RNA依赖性RNA聚合酶）被称为Dicer的内切核糖核酸酶切割。Dicer切割长dsRNA以形成短干扰RNA或siRNA；这使得分子能够形成RNA诱导的沉默复合物（RISC）。 2.一旦siRNA进入细胞，它就会被整合到其他蛋白质中以形成RISC。
培养箱和干燥箱的区别简介
培养箱具有制冷和加热双向调温系统，温度可控的功能，是植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保等科研，教研`教育部门不可缺少的实验室设备，广泛应用于低温恒温试验、培养试验、环境试验等等。的范围就要广泛一些,主要是培养一些细菌、微生物、种子等。干燥箱,顾名思义就是起到一个高温干燥、灭菌、恒温的作用,干
简介血脂仪的区别和检测注意事项
区别 医院的生化仪测试静脉血有较严格的程序和质量控制标准，相对准确。指血是末梢血，取材比较方便，创伤也小，但是血细胞有时会被挤压变形，血液成份的浓度会被组织液稀释等等。对化验结果的准确性有些微影响。静脉血与上面比较正好相反，所以医院里化验多用静脉血。血脂仪用指血就能方便测定血脂状况，还可以作为
石墨烯电池和锂电池的区别简介
石墨烯电池和锂电池在价格、使用寿命、适用对象和性能上有着很大的区别，如果想要性价比中等的电池，就选石墨烯电池，如果想要选择轻便且续航久的电池就选锂电池。但是从安全指数来看，石墨烯电池比锂电池要好。 1、价格不同。目前市面上流行的石墨烯电池并不是以石墨烯为原料生产的电池，而是铅酸电池的“升级版”
miRNA研究
一、miRNA研究的基本问题和研究方法二、miRNA研究的综合解决方案1. miRNA微阵列芯片服务Agilent miRNA 芯片（21.0） Affymetrix miRNA 4.0 芯片2. miRNA测序服务 miRNA-seq文库构建流程 miRNA测序数据分析流程3. miRNA R
siRNA制备方法介绍
体外制备1.化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3―4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的si
siRNA的制备方法
化学合成许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。最适用于：已经找到最有效的siRNA的情况