核酸电泳(RNA电泳与DNA电泳)

(一)DNA的凝胶电泳:凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。琼脂糖凝胶用于分离大于200~1000bp的片段;操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高。2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5-500bp的片段; 效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的DNA ,用于核苷酸多态性的分析。琼脂糖凝胶电泳的基本过程材料:电泳缓冲液(常用TAE或TBE)、电泳级琼脂糖、溴化乙锭溶液(核酸显示剂)、加样缓冲液(保证核酸不在加样孔中扩散和用于电泳时间的指示系统)、水平凝胶电泳装置及制胶系统、直流电源系统。基本过程:制胶→放入电泳槽中并加入电泳缓冲液→取出梳子→将适量的核酸样品和上样缓冲液混合并上样于加样孔中→一定电压条件下电泳→合适的时间后停止电泳→取出凝胶进行溴化乙锭染色→凝胶成像系统紫外灯下观察并照相保存结果注意:溴化乙锭具有致癌性,操作时要带手套;不同浓度琼脂糖的凝胶分离范围;影响DNA在凝胶中迁移速率的因素:1、DNA......阅读全文

DNA电泳条带都代表什么

dna电泳的条带在紫外灯下才能看,dna电泳的原理是不同长度的dna片段在同样电场力作用下,在琼脂糖胶中迁移的距离不同,长度越小迁移距离越快,也就是说片段越小越在胶的下部。一般跑dna电泳除了样品还要点上marker,他是由已知片段大小的若干条dna片段组成,由DNA电泳条带作为参照物,就能大致判断

DNA的凝胶电泳(gel-electrophoresis)

一、原理琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶是分离和纯化DNA片段的标准方法。聚丙烯酰胺凝胶电泳适用于分离小分子的核酸;琼脂糖凝胶孔径较大,被应用于大分子核酸的分离和纯化。在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中,DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(EB)染色,在紫外光下至少可

DNA电泳条带都代表什么

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DNA电泳(agarose胶)操作方法

一、 试剂与材料:1、 琼脂糖2、 电泳缓冲液(1×TAE)3、 10mg/ml溴化乙锭4、 上样缓冲液5、 电泳仪和水平电泳漕6、 透射紫外灯7、 胶带纸 二、 操作方法 按1~2%的琼脂糖浓度(据DNA样品分子量不同而定)配胶100ml ↓ 置于微波炉内加热搅拌,至琼脂糖完全溶解

DNA-Marker电泳常见问题分析

Q:为什么marker条带非常模糊,无法辨别具体条带? A:出现上述情况,可能有以下几个原因:1. marker条带出现了降解。请确保在使用过程中避免核酸酶污染;2.电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后,离子浓度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果,建议经常更换电泳缓冲液;3.电泳条件

DNA电泳条带都代表什么

dna电泳的条带在紫外灯下才能看,dna电泳的原理是不同长度的dna片段在同样电场力作用下,在琼脂糖胶中迁移的距离不同,长度越小迁移距离越快,也就是说片段越小越在胶的下部。一般跑dna电泳除了样品还要点上marker,他是由已知片段大小的若干条dna片段组成,由DNA电泳条带作为参照物,就能大致判断

DNA电泳条带都代表什么

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细胞DNA电泳图像如何分析

首先你不能把细胞作为样品上核酸电泳的。如果是提取的总DNA,那么电泳图像可以检测DNA提取质量。(可以由marker的亮度来估计提取DNA的浓度,可以通过拖尾的严重与否估计提取的质量)如果提取的是质粒,主要是看质粒的质量,一般是两条带,有时候是三条带。分别代表 开环 超螺旋 和线性状态。

DNA酶切及凝胶电泳

一. DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶

DNA电泳条带都代表什么

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细胞DNA电泳图像如何分析

首先你不能把细胞作为样品上核酸电泳的。如果是提取的总DNA,那么电泳图像可以检测DNA提取质量。(可以由marker的亮度来估计提取DNA的浓度,可以通过拖尾的严重与否估计提取的质量)如果提取的是质粒,主要是看质粒的质量,一般是两条带,有时候是三条带。分别代表 开环 超螺旋 和线性状态。

2D电泳-电泳流程之-第一向电泳

第一向分离等电聚焦蛋白质是两性分子,在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH,此时蛋白质的静电荷为零,此pH值即该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时,它会向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中,蛋白分子可能获得或失去

RNA的琼脂糖凝胶电泳

一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变

甲醛变性电泳检测RNA完整性

一、材料、试剂和仪器1、材料:植物总RNA 5-10μg2、试剂:1)加样运载缓冲液(Loading buffer)50% 甘油1mmol/L EDTA (pH 8.0)0.25%溴酚蓝25%二甲苯氰FF2)10×TAE Buffer3)5×甲醛凝胶电泳缓冲液:0.1mol/L MOPs (pH7.

RNA凝胶电泳试验所需实验试剂

  1、0.1%DEPC水:200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀,室温放置过夜,高压灭菌。  2、10x电泳缓冲液:吗啉代丙烷磺酸(MOPS)0.4mol/L(pH 7.0);NaAc 0.1mol/L;乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L;  3、50mL变性琼脂糖凝

RNA电泳点样孔有条带为什么

1.总RNA可能有蛋白或者多糖等杂质污染,这些杂质阻碍核酸的出孔,使其滞留在加样孔附近,导致加样孔发亮2.梳子不干净,梳子长期使用后上面积攒了大量的EB或者其他杂质,用之前用水冲一冲3.点样量过大或者电压过大等原因,都会导致核酸出孔受阻,使得加样孔发亮

RNA甲醛变性电泳实验原理和操作

[原理] 用溴化乙锭等荧光染料示踪的核酸电泳结果可用于判定核酸的纯度。由于DNA分子较RNA分子大许多,电泳迁移率低;而RNA中以rRNA最多,占到80%~85%,tRNA及核内小分子RNA占15%~20%,mRNA占1%~5%。故总RNA电泳后可呈现特征性的三条带。在原核生物为明显可见的23S

毛细管电泳与经典电泳有哪些异同之处

毛细管电泳可以理解为在一个小管道里面电泳,而经典电泳就是在一个平板子上电泳。这基本原理是相同的。不同点就是,毛细管电泳很微量,可自动化。激光可以穿过去进行检测。并且有条件还可以反复使用。比如DNA测序,以前是用大板跑胶,人工观察结果。现在自动化了,毛细管里面电泳,机器直接给出结果。

电泳槽与电泳仪之间有什么区别

电泳槽是凝胶电泳系统的核心部分,其系统的迅猛发展主要也是体现在电泳槽上。根据电泳的原理,凝胶都是放在两个缓冲腔之间,电场通过凝胶连接两个缓冲腔。缓冲液和凝胶之问的接触可以是直接的液体接触,也可以间接通过凝胶条或滤纸条。管状凝胶电泳和垂直板状电泳大多采取直接液体接触方式。这种方式可以有效地使用电场,但

毛细管电泳与经典电泳有哪些异同之处

毛细管电泳可以理解为在一个小管道里面电泳,而经典电泳就是在一个平板子上电泳。这基本原理是相同的。不同点就是,毛细管电泳很微量,可自动化。激光可以穿过去进行检测。并且有条件还可以反复使用。比如DNA测序,以前是用大板跑胶,人工观察结果。现在自动化了,毛细管里面电泳,机器直接给出结果。

毛细管电泳与经典电泳有哪些异同之处

毛细管电泳可以理解为在一个小管道里面电泳,而经典电泳就是在一个平板子上电泳.这基本原理是相同的.不同点就是,毛细管电泳很微量,可自动化.激光可以穿过去进行检测.并且有条件还可以反复使用.比如DNA测序,以前是用大板跑胶,人工观察结果.现在自动化了,毛细管里面电泳,机器直接给出结果.

免疫电泳实验_免疫电泳

实验材料待检抗原试剂、试剂盒抗体琼脂巴比妥缓冲液仪器、耗材电泳仪载物玻片打孔器玻璃铸型微量进样器实验步骤1.  取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板。2.  按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔。3.

电泳仪常用的电泳方法

电泳仪常用的电泳方法  一、凝胶电泳  由区带电泳中派生出的一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式。  凝胶电泳中的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是普通电泳中应用zui多的两种形式。  目前,这种办法被广泛用来分析蛋白质和核酸。  二、醋酸纤维素薄膜电泳  电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、

琼脂糖凝胶电泳检测DNA-电泳所得各条带都是什么

溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖(agarose)和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid 底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。  观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色,溴化乙

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)一、两块胶电泳和四块胶电泳Mini P-4小型垂直电泳槽 

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

  电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)  一、两块胶电泳和四块胶电泳  Mini P-4小型垂直电泳槽

电泳原理

  基本原理   生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。   1、电解 当电流通过电解电

电泳概述

电泳是在溶剂中通过电场转移带电分子,任何带电的离子或者基团放置在电场中都将会迁移。除非在它们的等电点,大多数生物聚合物在任何pH值时都带有净电荷,它们将会以与电荷密度成比例的方式移动。分子在电场中的迁移取决于电场的强度、净电荷、分子的大小和形状、离子强度、粘度和分子移动介质的温度。作为一种分析工具,

介电泳

介电泳(Dielectrophoresis)是在外加电场作用下,由于悬浮颗粒与溶剂之间介电常数差异造成的作用力。介电泳作用力会将介电常数小于溶剂的颗粒拉往电场强度较低的地方。另外介电泳力的大小还与颗粒半径有关,所以介电泳常被用来分离大小不同的颗粒或细胞。设计介电泳器件,需要控制电场分布、流场,还要计