DNA的克隆过程概述
DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组DNA技术。DNA克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的DNA片段的获得、载体的选择、各种工具酶的选用、体外重组、导入宿主细胞技术和重组子筛选技术等等。一 目的DNA片段的获得DNA克隆的第一步是获得包含目的基因在内的一群DNA分子，这些DNA分子或来自于目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA逆转录合成的双链 cDNA分子。由于基因组DNA较大，不利于克隆，因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段，常用的方法有机械切割和核酸限制性内切酶消化。若是基因序列已知而且比较小就可用人工化学直接合成。如果基因的两端部分序列已知，根据已知序列设计引物，从基因组DNA 或cDNA中通过PCR技术可以获得目的基因。二 载体的选择基因......阅读全文
DNA的克隆过程概述
DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组DNA技术。DNA克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的DNA片段的获得、载体的选择、各种工具酶的
DNA克隆
DNA克隆（主要内容如下）· General Procedure· PCR Cloning· Subcloning· ET Cloning· Vector Preparation· Ligation Re
克隆的基本过程
先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞核者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相同
细胞克隆和DNA克隆之间是什么关系
细胞克隆包括了dna的克隆，这么说吧，你要克隆一个细胞，你就要百克隆度这个细胞的所有，而dna是一个细胞最重要的东东。但是这并不是说细胞克隆的时候你要自己去克隆dna。细胞内克隆时相当于你在容体外复制细胞，自然dna也会被克隆。而dna克隆，你可以用pcr去完成。
亚克隆的基本过程
亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。
DNA片段的亚克隆实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 在20 μl 反应体积内用合适的酶完全消化DNA。75℃加热15 min，灭活酶。如若无需进一步的酶促处理，接歩骤6。2. 如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
DNA分子克隆的几个概念
在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而
DNA片段的亚克隆实验
基本方案 凝胶块中DNA连接 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
简述细胞克隆的培养过程
将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养
关于克隆实验的过程介绍
先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相
克隆化酵母DNA的操作实验
实验材料 酵母实验步骤 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在所期
DNA基因探针的克隆方法介绍
对于基因探针的克隆尚有更快捷的途径。这也是许多重要蛋白质的编码基因的克隆方法。该方法的第一步是分离纯化蛋白质，然后测定该蛋白的氨基或羟基末端的部分氨基酸序列，然后根据这一序列合成一套寡核苷酸探针。用此探针在DNA文库中筛选，阳性克隆即是目标蛋白的编码基因。值得一提的是真核细胞和原核细胞DNA组织有所
T载体克隆的DNA序列分析
实验目的： 了解常规DNA序列分析技术（Sanger双脱氧法）的原理及操作步骤。 实验原理： 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和Gilbert（1977）发明的化学
分子克隆实验载体DNA的选择
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的
DNA片段的亚克隆实验——凝胶块中DNA连接
实验材料DNA试剂、试剂盒TAE琼脂糖仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 重复基本方案中的步骤1~5。 2. 在高质量的低融点胶中分离久DNA（0.7%，TAE缓冲液），切下体积尽可能小的所需DNA条带（20~50 μl ）至小离心管中。3. 在70℃融化低融点胶10 min 以上，每个连接反
DNA－复制的过程
DNA 复制是一个复杂而精细的过程，主要包括以下几个阶段：起始在复制起点，一些特殊的蛋白质识别并结合到特定的 DNA 序列上，形成复制起始复合物。解旋酶解开双螺旋结构，将两条链分开，形成“复制叉”。单链结合蛋白（SSB）结合到单链 DNA 上，防止单链重新形成双螺旋，并保持其伸展状态，以利于复制。延
分子克隆化载体DNA的选择介绍
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以
分子克隆化DNA片段的制备介绍
常用以下方法获得DNA片段： ①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段； ②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段； ③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段； ④从mRNA反转录产生cDNA。
关于克隆实验的过程相关介绍
先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处死小
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大，它不仅被广泛应用于生化和免疫检测，而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。 动物免疫 取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原（20 μg/只），第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化，0.2 mL/只
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
关于细胞克隆的取材过程介绍
在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成
单克隆抗体的制备过程
1. 免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用
单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物选择免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。2.细胞融合采用二氧化碳气体处
单克隆抗体技术的方法克隆化操作过程
从原始孔中得到的阳性杂交瘤细胞,可能来源于二个或多个杂交瘤细胞,因此它们所分泌的抗体是不同质的。为了得到完全同质的单克隆抗体,必须对杂交瘤细胞进 行克隆化。另一方面,杂交瘤细胞培养的初期是不稳定的,有的细胞丢失部分染色体,可能丧失产生抗体的能力。为了除去这部分已不再分泌抗体的细胞,得到分泌 抗体稳定
“DNA探针”的制备过程
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别
克隆化酵母DNA的操作实验——穿梭质粒
实验材料酵母实验步骤1. 构建其必需基因的染色体拷贝已被破坏的单倍体菌株，及带有完整的必需基因和URA3选择标志的YEp质粒。2. 将必需基因亚克隆到YCp载体（带有URA3以外的选择标志），取约10~20 μg 用羟胺或其他技术进行诱变。3. 转化至步骤1的菌株中，在添加了尿嘧啶的省却成分平