克隆化酵母DNA的操作实验
实验材料 酵母实验步骤 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在所期望的位点，并且测定是否发生了多重整合。注意事项 如果没有单限制性酶切位点，可以在此区域用一个或多个酶消化产生一个缺口，但缺口两边须具有足够的同源序列。......阅读全文
克隆化酵母DNA的操作实验
实验材料 酵母实验步骤 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在所期
克隆化酵母DNA的操作实验——穿梭质粒
实验材料酵母实验步骤1. 构建其必需基因的染色体拷贝已被破坏的单倍体菌株，及带有完整的必需基因和URA3选择标志的YEp质粒。2. 将必需基因亚克隆到YCp载体（带有URA3以外的选择标志），取约10~20 μg 用羟胺或其他技术进行诱变。3. 转化至步骤1的菌株中，在添加了尿嘧啶的省却成分平
克隆化酵母DNA的操作实验——质粒缺口修复
实验材料酵母实验步骤1. 将目的基因亚克隆到YRp质粒，通过基因内的两个限制性位点在基因中创造一个缺口区，在缺口两侧留下≥100~250 bp 的同源区，凝胶电泳纯化质粒骨架大片段。 2. 用1~10 μg 缺口质粒DNA转化待拯救的含突变等位基因的酵母菌株，通过YRp质粒上的选择基因进行选择，
克隆化酵母DNA的操作实验——基因置换技术
实验材料酵母实验步骤一、整合性破坏1. 将基因的内部片段亚克隆到YIP载体。2. 在此内部片段中将质粒线性化。3. 继续整合性转化步骤3（见基本方案1）。二、基因破坏一步法1. 将合适的选择性基因亚克隆到目的基因上，必要时，可在亚克隆的同时引入一个缺失。2. 采用合适的限制性位点，从步骤1
克隆化酵母DNA的操作实验——整合性转化
实验材料酵母实验步骤1. 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。 2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。 3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在
酵母实验操作方案（2)
附录一 培养基 LB： Tryptone 10g 1% Yeast Extract 5g 0.5% NaCl 5g 0.5% 【Agar】 15g 1.5%（固体培养基另加） dH2O稀释至1L，高压灭菌 YPD： Yeast Extract 10g 1%
酵母实验操作方案（1)
一．质粒酶切及线性化1）用维特洁日常型小量DNA纯化试剂盒抽提9KSF2，可得到较纯的质粒10μg/3ml菌液，终体积80ul。2）线性化质粒使用80μl酶切体系9KSF2质粒 70μl内切酶（SacI， SalI， BglⅡ） 2μl10 x buffer 8μl3）酶切3－16小时，一般3小时即
酵母菌DNA制备实验1
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。 2. 将1.5 ml 的过夜培养物转移
酵母菌DNA制备实验2
实验材料酵母试剂、试剂盒TERNA酶乙酸铵无水乙醇仪器、耗材离心机培养箱玻璃培养管实验步骤1. 在18 mm×150 mm 无菌玻璃培养管或17 mm×100 mm 无菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培养基过夜培养酵母菌至静止期。2. 培养物室温下在台式离心机上1 200 g 离心5 min
将DNA导入酵母细胞实验
乙酸锂转化 电穿孔转化 单链高分子质量载体DNA的制备 实验方法原理 实验材料
将DNA导入酵母细胞实验
实验方法原理 实验材料 待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DN
分子克隆化载体DNA的选择介绍
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以
分子克隆化DNA片段的制备介绍
常用以下方法获得DNA片段： ①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段； ②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段； ③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段； ④从mRNA反转录产生cDNA。
酵母菌基因组DNA的提取实验
基本方案 实验材料 酵母菌 试剂、试剂盒
酵母菌基因组DNA的提取实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液 Tris仪器、耗材 高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤 1. 1.5 ml 对数生长期细菌细胞。2. 离心，12 000 rpm，1-2 min。3.
酵母DNA的快速分离
根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理根据该方案制备的酵母 DNA 可
酵母DNA的小量制备
实验方法原理通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。实验材料酶解酶 100T酵母细胞试剂、试剂盒异丙醇醋酸钾SDS醋酸钠山梨糖醇缓冲液TE酵母
酵母DNA的小量制备
实验方法原理 通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。实验材料 酶解酶 100T酵母细胞试剂、试剂盒 异丙醇醋酸钾SDS醋酸钠山梨糖醇缓冲液T
酵母DNA的快速分离
实验方法原理 根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。
酵母DNA的小量制备
实验方法原理 通过消化细胞壁，然后用 SDS 裂解随之产生的原生质体就可以制备酵母 DNA。用这种方法可重复性地制备若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性内切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
酵母DNA的快速分离
实验方法原理 根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中提取，并且可以用于转化 E. coli。实验材料 酵母细胞试剂、试剂盒 乙醇酚氯仿醋酸钠STES 缓冲液TE仪器、耗材
酵母DNA微量制备
实验概要本实验介绍了分别从40ml和5ml酵母培养液中制备酵母DNA的操作流程。实验步骤1. 酵母DNA微量制备(40ml) 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。 2) 将上述培养物移入螺盖离心管，用医用离心机或Sorvall SS-
分子克隆化DNA片段与载体连接介绍
DNA分子与载体分子连接是克隆过程中的重要环节之一，方法有： ①粘性末端连接，DNA片段两端的互补碱基顺序称之为粘性末端，用同一种限制性内切酶消化DNA可产生相同的粘性末端。在连接酶的作用下可恢复原样，有些限制性内切酶虽然识别不同顺序，却能产生相同末端。 ②平头末端连接，用物理方法制备的DN
将DNA导入酵母细胞实验_乙酸锂转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒YPD培养基YPAD培养基：添加30 mg L腺嘌呤半硫酸的YPD培养基高纯无菌水l0×TE缓冲液pH 7.5无菌10×乙酸锂储液：1 mol L乙酸锂pH 7.5 (用稀乙酸调pH)过滤除菌DNA ：高分子质量单链载体DNA和待转化DNA50% (m V) PE
将DNA导入酵母细胞实验_电穿孔转化
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 1 mol L 二硫苏糖醇（DTT过滤除菌并储存在-20℃)1 mol L山梨醇山梨醇选择平板仪器、耗材电穿孔仪：如Bio-Rad公司的带脉冲控制器的Gene Pulser或GIBCO BRL公司的 Cell-Porator 0. 2 cm间隙的一次性电穿孔槽（
快速制备酵母DNA法
实验概要本实验制备了酵母转化质粒，快速从转化酵母菌中分离了用于Southern分析的基因组DNA。主要试剂2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
酵母菌DNA制备
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材 玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤 1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。2. 将1.5 ml 的过夜培养
酵母RNA的提制实验原理、仪器试剂和操作步骤
一、目的：学习和掌握从酵母中提制RNA 的原理和方法，从而加深对核酸性质的认识。二、原理：提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是RNA（2.67～10.0%），DNA 很少（0.03～0.51
苯酚法提取酵母RNA实验原理和操作步骤
（一）原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于
将DNA导入酵母细胞实验_单链高分子质量载体DNA的制备
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 DNA (从鲑鱼精巢制备的DNA III型钠盐 Sigma #D1626)l×TE缓冲液 pH 8.0 缓冲液平衡酚1: 1 (W)酚 氯仿氯仿3 mol L 乙酸钠 pH 5.2100%乙醇 冰冷仪器、耗材超声波发生器实验步骤1) 将DNA溶于pH 8.0的1