免疫酶组织化学技术
免疫酶组织化学技术 1．酶标直接法和间接法 Nakane(1966)将辣根过氧化物酶(HRP) 标记在抗体免疫球蛋白分子上，创建了酶标记免疫组化的直接法、间接法和桥法。 2．PAP法 Stemberger(1969)在酶桥法的基础上，建立了非标记抗体法，先将HRP免疫兔、羊或鼠，制成抗HRP抗体，再与HRP结合，制备成PAP复合物，其敏感性要比酶标直接法、间接法高出许多倍，其背景染色也要优于直接法和间接法。在此基础上又出现了许多PAP法变型方法，如双PAP法、AAPAP法、APAAP法等。 3．ABC法 20世纪60年代初，人们发现生物素(biotin)与亲和素(卵白素，avidin)之间具有高度的亲和性，是自然界中具有最强亲和力的物质之一。到了20世纪70年代，人们又发现生物素可以和抗体交联，且生物素或亲和素与过氧化物酶或荧光素结合后，并不影响它们的生物学活性。Guesdon等(......阅读全文
免疫酶组织化学技术
免疫酶组织化学技术 1．酶标直接法和间接法 Nakane(1966)将辣根过氧化物酶(HRP) 标记在抗体免疫球蛋白分子上，创建了酶标记免疫组化的直接法、间接法和桥法。 2．PAP法 Stemberger(1969)在酶桥法的基础上，建立了非标记抗体法，先将HRP免
小鼠组织因子(TF)酶联免疫分析
小鼠组织因子(TF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中组织因子(TF)的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠组织因子(TF)水平。用纯化的小鼠组织因子(TF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单
人组织因子(TF)酶联免疫分析
人组织因子(TF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中组织因子(TF)的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人组织因子(TF)水平。用纯化的人组织因子(TF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔
犬组织因子（TF）酶联免疫分析（ELISA）
犬组织因子（TF）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定犬血清，血浆及相关液体样本中组织因子（TF）的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬组织因子（TF）水平。用纯化的犬组织因子（TF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包
非标记抗体免疫酶组织化学实验——酶桥法
由于在酶标记抗体过程中，酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性，从而降低了抗体的效价。另外，血清中的非特异性抗体也可以被酶标记，这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合，放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点，Sternberger（1969）在酶标抗体法的基础上，创建了非标记抗体免疫
非标记抗体免疫酶组织化学实验
实验方法原理 首先用酶免疫动物制备成效价高、特异性强的抗酶抗体。在特异性抗体与抗酶抗体之间利用第二抗体作「桥梁」，将它们连接起来，再将酶结合在抗酶抗体上，经显色显示抗原的定位。其基本流程为：抗原+特异性抗体 → 第二抗体（桥抗）→ 抗 HRP 抗体 → HRP → DAB+H2O2（显色）。因为桥抗
常用免疫组织化学方法的原理免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，
酶免疫组织化学技术的组织处理有什么要求呢
主要用于标本中抗原（抗体）的定位和定性检测。常用的标本有组织切片、组织印片和细胞涂片等。该技术染色标本可长期保存，可用普通光镜观察结果，可观察组织细胞的细微结构等优点，尤其是非标记抗体酶免疫组化法的敏感性更优于荧光免疫技术
免疫碱性磷酸酶组织化学实验
实验方法原理 此方法的基本原理与 HRP-抗体间接法类似，所不同的是用 AKP 代替 HRP 标记第二抗体，将其制备成酶标记抗体。实验材料 石蜡切片动物血清试剂、试剂盒 蛋白酶特异性一抗核固红二甲苯乙醇树胶PBSAKP 标记的二抗TBS（含左旋咪唑、MgCl2）仪器、耗材 滴管玻片湿盒实验步骤 1.
免疫碱性磷酸酶组织化学实验——间接免疫碱性磷酸酶法
免疫碱性磷酸酶组织化学技术是以碱性磷酸酶（AKP 或 AP）取代 HRP 来显示结果的免疫酶组织化学技术。最早出现的是间接免疫碱性磷酸酶法（IAP），1983 年 Mason 及 Moir 等建立了碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）复合物法。随后，人们建立了更为敏感的生物素-亲和素-碱性磷酸酶复合
人组织转谷氨酰胺酶(tTG)酶联免疫分析
人组织转谷氨酰胺酶(tTG)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中组织转谷氨酰胺酶(tTG)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人组织转谷氨酰胺酶(tTG)水平。用纯化的人组织转谷氨酰胺酶(tTG) 抗体包被微孔
人结缔组织生长因子（CTGF）酶联免疫分析
人结缔组织生长因子（CTGF）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中结缔组织生长因子（CTGF）的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结缔组织生长因子（CTGF）水平。用纯化的人结缔组织生长
人组织因子途径抑制物(TFPI)酶联免疫分析(ELISA)
人组织因子途径抑制物(TFPI)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中组织因子途径抑制物(TFPI)的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人组织因子途径抑制物(TFPI)水平。用纯化的人组织因
非标记抗体免疫酶组织化学实验——ABPAP－法
实验方法原理ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的联合应用，使更多的酶分子结合到抗原-抗体复合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理见图 4-11。作者应用了 30 余种特异性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 复合物以及 ABC 检测系统，结果 ABPAP 法比单一的 PAP 法要敏感 7～8 倍
非标记抗体免疫酶组织化学实验——PAP－法
实验方法原理与酶桥法相似，不同的是酶桥法分四步，而 PAP 法分三步。PAP 法将酶桥法的步骤（3）、步骤（4）合二并为一，用 PAP 复合物替代，故称 PAP 法（图 4-9）。PAP 复合物中的抗 HRP 抗体和第一抗体必须为同一种属动物的 IgG，这样桥抗体才能作为「桥」将 PAP 复合物连接
双酶双底物的双重免疫染色—多种组织抗原配对的双重酶
改良的 EnVision-HRP/AP 双酶双底物的双重免疫染色（间接法）——Ki-67-CK20 等多种组织抗原配对的双重酶实验步骤1. 恒冷切片或石蜡切片，厚 4～6 μm，常规处理。2. 0.1％NaN3+0.3％H2O2/TBS（50 mmol/L，pH 7.8）或 0.3％H2O2/甲醇，
兔结缔组织生长因子（CTGF）酶联免疫分析（ELISA）
兔结缔组织生长因子（CTGF）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定兔血清，血浆及相关液体样本中结缔组织生长因子（CTGF）的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔结缔组织生长因子（CTGF）水平。用纯化的兔结缔组织生长
酶免疫组织化学技术的应用有什么呢
1.提高病理诊断准确性 2.癌基因蛋白的临床应用 3.对肿瘤细胞增生程度的评价 4.发现微小转移灶 5.在肿瘤分期上的意义 6.指导肿瘤的治疗 7.辅助诊断免疫性疾病和感染性疾病
非标记抗体免疫酶组织化学实验——双－PAP－法
实验方法原理在 PAP 法的基础上重复第二抗体和 PAP 复合物，重复的连接抗体和 PAP 复合物可能有以下两种连接方式（图 4-10）。第一种（A）重复连接抗体可与一个 PAP 中的抗 HRP 抗体上未饱和的 Fc 段结合，再与后加的 PAP 复合物相结合；第二种（B）重复连接抗体与特异性一抗分子
免疫碱性磷酸酶组织化学实验——APAAP－法
实验方法原理APAAP 法的原理与 PAP 法类似，都属于未标记抗体桥联法，所不同的是用 AKP 取代了 HRP。该方法较 IAP 法敏感性髙，特别是用于标记固定过的组织。APAAP 法的主要优点是非特异性背景染色较浅，因为其不受内源性过氧化物酶的干扰，APAAP 复合物所用的 AKP 是从小牛肠组
人金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)酶联免疫分析
人金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIM
异相酶免疫试验和均相酶免疫试验
Ag为待测抗原，AgAb-E为结合标记物，Ab-E为游离标记物。若抗原-抗体反应影响标记物中酶的活性,如酶活性消失，即结合标记物(AgAb-E)无酶活性，游离标记物(Ab-E)有酶活性； (1) 检测时不需分离结合标记物(AgAb-E)和游离标记物(Ab-E),检测体系中标记物酶活性(Ab-E
免疫组织化染色
验材料新鲜组织试剂、试剂盒二甲苯酒精H2O2抗原修复液枸橼酸钠缓冲液石蜡福尔马林PBSDAB苏木素树胶丙酮打孔液柠檬酸钠APES仪器、耗材恒温摇床高压锅塑料切片架耐温玻璃容器-80℃冰箱恒冷冰冻切片机载玻片实验步骤一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤：1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置60℃ 1
免疫组织化染色
实验材料 新鲜组织试剂、试剂盒 二甲苯酒精H2O2抗原修复液枸橼酸钠缓冲液石蜡福尔马林PBSDAB苏木素树胶丙酮打孔液柠檬酸钠APES仪器、耗材 恒温摇床高压锅塑料切片架耐温玻璃容器-80℃冰箱恒冷冰冻切片机载玻片实验步骤 一．石蜡切片免疫组化染色实验步骤：1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置
组织免疫荧光染色
概述： 织免疫荧光染色多是使用组织的冰冻切片，因为在切片过程中基本上暴露了细胞和细胞核内结构，故不需要使用细胞通透剂(Triton-100,NP-40)。染色后的切片应放置冰箱内避光保存，防止荧光淬灭。常用的荧光素有：异硫氰酸(fluorescein isothiocyanate,FITC,发
胶原酶解离组织
实验方法原理切碎的组织放于含有胶原酶的完全培养基中孵育，组织分解后，通过离心去除胶原酶，高浓度接种、培养。实验材料胶原酶DBSS仪器、耗材培养基移液器皮氏平皿培养瓶离心管手术刀离心机实验步骤1. 将组织移人新鲜、无菌的 DBSS 中，淸洗。2. 转入另一培养皿（9 cm 皮氏平皿，非组织培养级別），
胶原酶解离组织
实验方法原理 切碎的组织放于含有胶原酶的完全培养基中孵育，组织分解后，通过离心去除胶原酶，高浓度接种、培养。 实验材料 胶原酶 DBSS
人金属蛋白酶组织抑制因子9(TIMP9)酶联免疫分析（ELISA）
人金属蛋白酶组织抑制因子-9(TIMP-9)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中金属蛋白酶组织抑制因子-9 (TIMP-9)的含量。实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人金属蛋白酶组织抑制因子-9
免疫酶染色试验_细胞免疫酶染色法
细胞免疫酶染色法（以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明）实验方法原理免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记已知抗体或抗原，与相应抗原或抗体结合，形成酶标记抗体－抗原复合物，复合物中的酶在遇到相
免疫酶染色试验_细胞免疫酶染色法
细胞免疫酶染色法（以检测血清中 EB 病毒 IgA 抗体为例说明）实验方法原理免疫酶染色试验 (immunoenzymatic staining test, IEST) 是用酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）标记已知抗体或抗原，与相应抗原或抗体结合，形成酶标记抗体－抗原复合物，复合物中的酶在遇到相