靶细胞杀伤实验:Cr51法
一、原理 用Na2 51 CrO 4 标记靶细胞,若待检效应细胞能杀伤靶细胞,则51 Cr( 铬) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的51 Cr 放射活性,靶细胞溶解破坏越多,51 Cr 释放就越多,上清液的放射活性也就越高,应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。 二、步骤 (以CTL杀伤肿瘤细胞为例): 1、效应细胞 将分离的外周血T细胞, 培养7d后按照DC:T = 1:10的比例分别加入自身细胞致敏DC,细胞系致敏DC及未致敏DC, 继续培养3-4d后收集T细胞, 此即为效应细胞CTL. 2、靶细胞 分别收集1×106 Panc1以及从6例肿瘤组织中分离获得的胰腺癌细胞(编号S1-S6), 重悬于0.5mL不含碳酸氢钠的完全培养液. 加入3.7 MBq 51Cr铬酸钠, 37℃水浴中标记1 h, 洗涤细胞三次, 调整细胞浓度为5×104/mL.&......阅读全文
靶细胞杀伤实验:Cr51法
一、原理 用Na2 51 CrO 4 标记靶细胞,若待检效应细胞能杀伤靶细胞,则51 Cr( 铬) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的51 Cr 放射活性,靶细胞溶解破坏越多,51 Cr 释放就越多,上清液的放射活性也就越高,应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。 二、步骤 (以CTL杀伤肿
靶细胞杀伤实验:CFSE/PI法
做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。 1、计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2u
法测效靶细胞杀伤——用流式细胞术
做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,国外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。 具体参照如下:1、计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM,
靶细胞杀伤实验:CFSE/PI法
做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。1、计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM,37度30分钟
流式细胞术测效靶细胞杀伤实验
做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确,这也是偶参照老外的方法吧。1 计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度
免疫学细胞因子的定量检测,Elispot酶联斑点分析技术-四
ELISPOT 分析使单细胞分泌产物可视化。这些分析异常敏感,因为它是在直接在分泌细胞的周围进行捕捉,而且是在表面被冲淡,或者被临近的细胞上的受体捕获,或降解之前。最低至1:100万细胞精度的活体外频率测量。这种分辨率已经远远超过使用细胞内细胞因子的四聚物染色和ELISA法测量的精度。这种高敏感度是
从鼠弓形虫抗原致敏的树突状细胞中分离的...
实验概要通过注射在体外用TAg致敏过的来自于DC细胞的外质体,在体内诱导了弓形虫属特异性Th1分子免疫应答并获得了抗弓形虫感染的保护效应。研究证实致敏的DC衍生外质体能够对鼠弓形虫感染和其它某些病原感染产生免疫保护。这种无细胞疫苗对于人类疫苗策略是一种很有吸引力的保护工具。实验材料动物:8-10周龄
从鼠弓形虫抗原致敏诱导抗弓形虫感染的保护免疫应答
实验概要通过注射在体外用TAg致敏过的来自于DC细胞的外质体,在体内诱导了弓形虫属特异性Th1分子免疫应答并获得了抗弓形虫感染的保护效应。研究证实致敏的DC衍生外质体能够对鼠弓形虫感染和其它某些病原感染产生免疫保护。这种无细胞疫苗对于人类疫苗策略是一种很有吸引力的保护工具。实验材料动物:8-10周龄
bradford法和lowry法是什么法
bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂。 bradford法,也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在
bradford法和lowry法是什么法
bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂。 bradford法,也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在
四聚体——抗原特异性T细胞检测金标准
实验概要 抗原特异性T细胞在细胞免疫应答中发挥着核心作用,因此定量测定抗原特异性T细胞数量在判定机体细胞免疫功能方面提供重要的信息。传统的抗原特异性T细胞功能检测方法有经典的Cr51释放试验、有限稀释法(LDA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)等,但是这些方法或多或少都存在操作繁琐、检测结果误差
沉淀法、过滤法、蒸馏法的区别
一沉淀法:固液分离。有时为了加速沉淀,可以加入一些凝聚剂,如明矾、活性炭等。二过滤法:固液分离。但是固体必须是不溶于水的才行。三蒸馏法:液液分离。利用沸点不同,沸点低的先蒸馏出来,沸点高的后蒸馏出来。
四聚体——抗原特异性T细胞检测金标准
实验概要 抗原特异性T细胞在细胞免疫应答中发挥着核心作用,因此定量测定抗原特异性T细胞数量在判定机体细胞免疫功能方面提供重要的信息。传统的抗原特异性T细胞功能检测方法有经典的Cr51释放试验、有限稀释法(LDA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)等,但是这些方法或多或少都存在操作繁琐、
内标法与外标法
一、内标法 什么叫内标法?怎样选择内标物? 内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度。 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质,它可被
外标法与内标法
一、内标法 什么叫内标法?怎样选择内标物? 内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度。 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质
Folin—酚试剂法(Lowry法)
实验概要本文介绍了Folin—酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质的实验原理、操作步骤及注意事项等。实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难,近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Fol
气相法液相法固相法优缺点
气相法液相法固相法优点:分离效率高,分析速度快,样品用量少和检测灵敏度高。选择性好,可分离、分析恒沸混合物,沸点相近的物质,某些同位素,顺式与反式异构体邻、间、对位异构体,旋光异构体等。气相法液相法固相法缺点:分析成本高,液相色谱仪价格及日常维护费用贵,分析时间一般比气相长。检测器气相色谱法中可以使
可见异物检查法第一法(灯检法)
取规定量供试品,除去容器标签,擦净容器外壁,必要时将药液转移至洁净透明的适宜容器内,将供试品置遮光板边缘处,在明视距离(指供试品至人眼的清晰观测距离,通常为25cm),手持容器颈部,轻轻旋转和翻转容器(但应避免产生气泡),使药液中可能存在的可见异物悬浮,分别在黑色和白色背景下目视检查,重复观察,总检
色谱定量方法:标准加入法内标法外标法
色谱分析的重要作用之一是对样品定量。而色谱法定量的依据是:组分的重量或在载气中的浓度与检测器的响应信号成正比。常见定量分析方法分为面积归一化法、内标法、外标法等。大家常常容易傻傻分不清楚的莫过于内标法、外标法了。 以内标法为例,选一与欲测组分相近但能完全分离的组分做内标物(当然是样品中没有的组
峰面积归一法、内标法、外标法区别
色谱定量分析方法可以分为外标法、内标法、归一化法三大类。当能够精确进样量的时候,通常采用外标法进行定量。这种方法标准物质单独进样分析,从而确定待测组分的校正因子;实际样品进样分析后依据此校正因子对待测组分色谱峰进行计算得出含量。其特点是标准物质和未知样品分开进样,虽然看上去是二次进样,但实际上未知样
各显神通!浅谈归一化法、内标法、外标法及标准加入法
面积归一法、内标法、外标法、标准加入法。这么多定量法,用哪一种呢?每一种的适用范围是什么呢?其优缺点又是什么?其标准物又有什么要求呢?看完你就都知道了。 1、归一化法 把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法,称为归一化法,各成分校正因子一致时可用该法。 归一化法的优点: 该法简便
浅谈归一化法、内标法、外标法及标准加入法区别很重要!
1.归一化法 把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法,称为归一化法。 各成分校正因子一致时可用该法,该法简便、准确,特别是进样量不容易准确控制时,进样浓度及进样量的变化的影响很小。 其他操作条件,如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。GC应用广于HPLC。
消化道接种法、鼻腔接种法及角膜接种法
实验材料实验动物试剂、试剂盒病毒试剂仪器、耗材注射器实验步骤消化道接种。在分离腹泻病毒或经由消化道病毒感染的研究中,可采用灌胃接种法将所接种的临床标本或病毒用灌胃器灌到动物胃内。抓取固定小鼠,用灌胃器吸取接种物,将灌胃针从鼠的口腔插入,使口腔与食道成一条直线,再将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道,可感到轻
动态色谱法和静态法
动态色谱法是将待测粉体样品装在U型的样品管内,使含有一定比例吸附质的混合气体流过样品,根据吸附前后气体浓度变化来确定被测样品对吸附质分子准确度差、对设备要求很高等缺陷已很少使用。另一种可行的方法是采用CO2作吸附质在室温进行吸附,可以无需分子涡轮泵级的真空度。可以很方便的得到比表面积、微孔孔径、微孔
气相色谱法—内标法
什么叫内标法?怎样选择内标物?内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度。内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质,它可被色谱拄所分离,又不
药物鉴别法呈色反应鉴别法
呈色反应鉴别法是指供试品溶液中加入适当的试剂溶液,在一定条件下进行反应,生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的呈色反应类型有以下几个。(1)三氯化铁呈色反应:应用于含有酚羟基或水解后产生酚羟基的药物,如水杨酸及其盐。(2)异羟肟酸铁反应:应用于含有芳酸、芳酸酯或酰胺的药物,如β-内酰胺类。(
气相色谱法—内标法
1)什么叫内标法?内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时,加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响,以提高分析结果的准确度。2)怎样选择内标物?内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时,在样品中加入一定量的标准物质,它可被色谱拄所分
药物鉴别法薄层色谱鉴别法
薄层色谱鉴别法薄层色谱法鉴别原理为同一种药物在同样条件下的薄层色行为相同。一般采用对照品(或标准品)比较法,将供试品和对照品(或标准品)按药典规定,用同种溶剂配成同样浓度的溶液。在同一层板上点样、展开、显色,要求供试品斑点应与对照品(或标准品)斑点的位置(Rf)和颜色一致。薄层色谱法简单易行,适用于
足迹法
High Resolution Genetic Footprinting (Stanford)Genetic footprinting is a technique for high-resolution mapping of the functional organization of a clo
电容法
涂层测厚仪的无损检测方法与原理:涂层测厚仪在现实测量中是一门理论上综合性较强,又非常重视实践环节的很有发展前途的学科。它涉及到材料的物理性质,产品设计,制造工艺,断裂力学以及有限元计算等诸多方面。 在化工,电子,电力,金属等行业中,为了实现对各类材料的保护或装饰作用,通常采用喷涂有色金属覆盖以及磷