靶细胞杀伤实验：CFSE／PI法
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM，37度30分钟。2、拿出后，1000rpm，5min，可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次3、与效应细胞混培，作用4-6小时。4、将细胞混合液消化取出，洗二次，PI工作液5ul，避光30分钟后上流式。5、CFSE，PI双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞，除以靶细胞总数，即为杀伤率。注意事项1、CFSE及PI的浓度必须注意，宁低勿高，个人感觉，如果标高的话，在4度放一晚好像会好一些。2、必须设全阴，CFSE单标，PI单标，CFSE＋PI双标并同步化的靶细胞的参照。3、作用时间不能太长，不要超过8个小时。......阅读全文
靶细胞杀伤实验：CFSE/PI法
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM，37度30分钟
靶细胞杀伤实验：CFSE/PI法
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。 1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2u
靶细胞杀伤实验：LDH法
一、效应细胞的制备 激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。 二、靶细胞的制备 P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×1
靶细胞杀伤实验：Cr51法
一、原理 用Na2 51 CrO 4 标记靶细胞，若待检效应细胞能杀伤靶细胞，则51 Cr( 铬) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的51 Cr 放射活性，靶细胞溶解破坏越多，51 Cr 释放就越多，上清液的放射活性也就越高，应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。 二、步骤 （以CTL杀伤肿
靶细胞杀伤实验总论－1
细胞介导的免疫反应（cell mediated immune， CMI）在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定，将其作为
靶细胞杀伤实验总论－2
2、流式细胞标记法 （1）PE-mAb/FITC-annexin V 荧光标记法 正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料
法测效靶细胞杀伤——用流式细胞术
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，国外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。 具体参照如下：1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM,
流式细胞术测效靶细胞杀伤实验
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。1 计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度
靶细胞杀伤实验：AnnexiV标记法
正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD
杀伤靶细胞的过程
CTL杀伤靶细胞是一个连续过程，可分为三个阶段，主要研究内容如下：1、效应靶细胞结合：CTL是通过其膜上的受体TCR，即Ti-CD3分子与靶细胞结合，此时膜上的淋巴细胞功能相关抗原Ⅰ与靶细胞膜上的配基Ⅰ，又称细胞内粘附分子相互作用，即靶细胞与效应细胞初步接触。此时亲和力低，为非特异性的，但可促使TC
靶细胞杀伤实验：MTT和CCK8比较
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒
CD8+T细胞杀伤靶细胞的过程
CTL杀伤靶细胞是一个连续过程，可分为三个阶段，主要研究内容如下： 1、效应靶细胞结合：CTL是通过其膜上的受体TCR，即Ti-CD3分子与靶细胞结合，此时膜上的淋巴细胞功能相关抗原Ⅰ与靶细胞膜上的配基Ⅰ，又称细胞内粘附分子相互作用，即靶细胞与效应细胞初步接触。此时亲和力低，为非特异性的，但可
细胞毒性T细胞杀伤靶细胞的过程
CTL杀伤靶细胞是一个连续过程，可分为三个阶段，主要研究内容如下： 1、效应靶细胞结合：CTL是通过其膜上的受体TCR，即Ti-CD3分子与靶细胞结合，此时膜上的淋巴细胞功能相关抗原Ⅰ与靶细胞膜上的配基Ⅰ，又称细胞内粘附分子相互作用，即靶细胞与效应细胞初步接触。此时亲和力低，为非特异性的，但可
简述细胞毒性T淋巴细胞杀伤靶细胞的过程
CTL杀伤靶细胞是一个连续过程，可分为三个阶段，主要研究内容如下： 1、效应靶细胞结合：CTL是通过其膜上的受体TCR，即Ti-CD3分子与靶细胞结合，此时膜上的淋巴细胞功能相关抗原Ⅰ与靶细胞膜上的配基Ⅰ，又称细胞内粘附分子相互作用，即靶细胞与效应细胞初步接触。此时亲和力低，为非特异性的，但可
细胞增殖检测：CFSE原理和CFSE配制
一、原理 荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester） 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧
自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验
实验方法原理 NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，亦不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。 LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL
自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验
实验方法原理 NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，亦不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。 LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL
自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验
实验方法原理NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，亦不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。 LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL-2诱导下，获得能杀伤NK抵抗的肿瘤细胞的功能，在过继免疫治疗肿
杀伤细胞功能的检测实验
实验方法原理NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中，能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞，无需抗原或有丝分裂原刺激，也不依赖抗体或补体，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL-2诱导下，获得能杀伤NK抵抗的肿瘤细胞的功能，在过继免疫治疗肿瘤中
Annexin－VPI双染法
Annexin V-PI 双染法在细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前，因而检测PS的表达，能反映早期凋亡。AnnexinV是相对分子质量为35 000大小的Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高
细胞周期检测方法（PI法）
可用于细胞周期检测的荧光染料有碘化丙啶（Propidium，简称PI）、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole，简称DAPI)、Hochest、7氨基放线菌素（7-Amino-ActinomycinD，简称7AAD）等。细胞周期PI
CellTrace™－CFSE－Cell－Proliferation－Kit
实验概要The CellTrace™ CFSE Cell Proliferation Kit provides a versatile and well-retained cell-tracing reagent in a convenient and easy-to-use form. The
临床化学检查方法介绍淋巴细胞毒试验介绍
淋巴细胞毒试验介绍： 当特异的效应T淋巴细胞在体外与靶细胞接触时，可表现出破坏和溶解靶细胞的特性，称为淋巴细胞毒作用(cytotoxicity)。靶细胞可以是肿瘤细胞或其它组织细胞。淋巴细胞杀伤靶细胞的方式可通过直接杀伤或产生淋巴因子破坏靶细胞。本试验方法有形态检查法和同位素释放法两种。前者不需特
免疫学实验二淋巴细胞毒试验介绍
淋巴细胞毒试验介绍： 当特异的效应T淋巴细胞在体外与靶细胞接触时，可表现出破坏和溶解靶细胞的特性，称为淋巴细胞毒作用(cytotoxicity)。靶细胞可以是肿瘤细胞或其它组织细胞。淋巴细胞杀伤靶细胞的方式可通过直接杀伤或产生淋巴因子破坏靶细胞。本试验方法有形态检查法和同位素释放法两种。前者不需特
H33342释放法检测单核巨噬细胞的胞毒作用
实验概要本实验利用H33342释放法检测了单核-巨噬细胞的胞毒作用。H33342(Hoechst33342)为DNA的特异性荧光染料，可用其标记肿瘤细胞以检测单核细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。被损伤的靶细胞DNA断裂后，H33342释放到上清液中，采用微量荧光仪可定量测定上清液中的荧光强度。效应细胞的杀
效应细胞功能鉴定和抗体药物研发之ADCC分析（一）
1.ADCC作用ADCC作用即抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)：指表达IgGFc受体的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等，通过与已结合在病毒感染细胞和肿瘤细胞等靶细胞表面的IgG抗体的Fc段结合，而达到杀伤这些
对提升阴性分离法的靶细胞纯度的建议
·良好的回收和纯度基于高质量的MNC制备，其中颗粒细胞和血小板的数量要低。·在混匀步骤使用HulaMixer™样品混合器（目录编号15920D）以确保有足够的抗体与靶细胞相结合。·在抗体结合步骤之后对细胞进行良好的洗涤，以去除未结合的抗体。·2X rosetting方案能够提升细胞纯度，而不增加分离
什么是靶细胞？
靶细胞是指能识别某种特定激素或神经递质并与之特异性结合而产生某种生物效应的细胞。
人自然杀伤细胞的功能分析实验
1975年，Herberman 等首次报道自然杀伤（nature
免疫学实验自然杀伤细胞活性介绍
自然杀伤细胞活性介绍： 自然杀伤细胞又称NK细胞，其主要的功能特征是对肿瘤细胞及病毒感染细胞具有非特异性的杀伤力，这种杀伤效应不依赖抗体与补体，体外检测NK细胞活性是诊断NK细胞功能及其与某些疾病关系的一个重要手段。 自然杀伤细胞活性正常值： 自然释放率要求100∶1，自然杀伤率不呈对数增