基底动脉平滑肌细胞原代培养方法
原代细胞培养：取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头，于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中，用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。传代：（1）吸除培养瓶内旧培养液。（2）D-Hanks液冲洗2遍。（3）加入消化液少许，以能覆盖瓶底为限。（4）倒置显微镜观察发现细胞胞质回缩、细胞间隙增大时，立即终止消化。（5）吸除消化液，向瓶底注入D-Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉。（6）用吸管吸取培养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液；首次传代将原代细胞按1：1传代，此后按1：3进行传代。（7）传代后细胞放置在37℃，5%CO2孵育箱内培养。我在做细胞培养时的一些小经验：（1）在超净台操作（废液杠放入）前要用紫外灯照30MIN以上，75%酒精擦手（2）贴块法要细胞贴壁好一定剪的够碎（先把血管剪成小段再狂剪一顿），铺开时要平均的展开，聚在一起翻面时容易冲......阅读全文
小鼠肝细胞原代培养实验
胰酶消化法 实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
神经细胞原代培养实验
实验方法原理神经细胞的原代培养是尽 量 创造最适合于各类神经细胞生长的体外环境，获得状态良好，纯度较高细胞的方法 。 脑部组织来源的各种神经细胞的培养具有相似的取材过程和部分通用的培养条件。实验材料动物组织试剂、试剂盒消化液(0.25%胰蛋白酶+O.04%的EDTA)完全培养基(DMEM+10%胎牛
肿瘤细胞的原代培养方法
肿瘤细胞对培养基的要求不如正常细胞严格，一般常用RPMI、DMEM、McCoy-5A等培养基，血清浓度不高，10%即可，建议最好在原代培养时能加入生长因子或原患者血清（1%-2%）以利细胞生长。培养方法很多，主要有组织块法、酶消化法、钽网法、脱落细胞法等。1.组织块法将取得的瘤组织去除脂肪、结缔组织
成骨细胞原代培养实验
实验方法原理 采用植块培养方法时，用少量培养液孵育，使骨组织块贴附于培养瓶。骨组织块浮起后观察细胞长出情况。采用分离细胞的单层培养方法时，将松质骨切成 2~5 mm 大小，用胶原蛋白酶和胰蛋白酶消化。将混悬的细胞接种于培养瓶，用 F12 培养
少突胶质细胞原代培养
少突胶质细胞来源于1-2 天的大鼠。断头后大鼠大脑收集到Ham’s F-12培养液中，移除脑膜和血管。皮质用机械匀浆进行匀浆然后将细胞悬液依次通过230μm和104μm尼龙网进行过滤。细胞通过1000rpm 7分钟离心进行收集，用添加12.5%胎牛血清的DMEM进行重悬细胞。最后以2.0×1
正常滑膜细胞原代培养
正常滑膜细胞原代培养实验材料：1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；实验方法：1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒；2.
神经细胞原代培养实验
实验方法原理 神经细胞的原代培养是尽 量 创造最适合于各类神经细胞生长的体外环境，获得状态良好，纯度较高细胞的方法 。 脑部组织来源的各种神经细胞的培养具有相似的取材过程和部分通用的培养条件。
肝细胞原代培养操作步骤
材料：小鼠器具：饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管（15/50ml）、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器 试剂： DMEM（含血清）、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS 准备： 酒精擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线
小鼠肝细胞原代培养实验
胰酶消化法 实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
神经元原代培养方法
从孕17-18天的雌鼠的胎儿分离神经元细胞。孕雌鼠麻醉然后解剖，胎儿收集到HBSS-1中然后快速断头。剥离脑膜和白质后，大脑皮质收集入 HBSS-2 液中机械磨碎。皮质碎片移到有0.025%胰酶的HBSS-2液中37°C消化15分钟。胰酶消化后，细胞用含有10%胎牛血清的HBSS-2液冲洗两
如何进行细胞原代培养
如何进行细胞原代培养细胞原代培养和传代培养的区别原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。
神经细胞原代培养实验
实验方法原理 神经细胞的原代培养是尽 量 创造最适合于各类神经细胞生长的体外环境，获得状态良好，纯度较高细胞的方法 。 脑部组织来源的各种神经细胞的培养具有相似的取材过程和部分通用的培养条件。
成骨细胞原代培养实验
实验方法原理采用植块培养方法时，用少量培养液孵育，使骨组织块贴附于培养瓶。骨组织块浮起后观察细胞长出情况。采用分离细胞的单层培养方法时，将松质骨切成 2~5 mm 大小，用胶原蛋白酶和胰蛋白酶消化。将混悬的细胞接种于培养瓶，用 F12 培养液培养。 实验材料骨标本试剂、试剂盒Hams F12 培养液
原代培养的基本分类
最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。分散细胞培养则是将组织块用机械法或化学法使细胞分散。如欲从胎儿或新生儿的组织分离到活性最好的游离细胞，经典的方法是用蛋白水解酶（如胰蛋白酶和胶原酶）消化细胞间的结合物，或用金属离子螯合剂
成骨细胞原代培养实验
成骨细胞原代培养实验 实验方法原理 采用植块培养方法时，用少量培养液孵育，使骨组织块贴附于培养瓶。骨组织块浮起后观察细胞长出情况。采用分离细胞的单层培养方法时
施万细胞的原代培养
实验方法原理 施万细胞是周围神经系统的成髓鞘胶质细胞，能有效地促进外周神经的再生。近年的研究表明，施万细胞也能改善中枢神经再生的微环境，因此体外培养施万细胞势在必行。目前最简便、快捷分离纯化施万细胞的方法是差速贴壁法，即根据不同细胞在培养器皿上贴壁速度的差异，去除成纤维等污染细胞，以获得高纯度施万细
正常滑膜细胞原代培养
实验材料：实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1&time，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；实验方法：将大鼠处死后，用75%酒精消毒；2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉
原代细胞分离与培养方法介绍
前言 凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞的培养也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步，是一项基本技术。 原代细胞最接近和最能反映体内生长特性，适宜用于药物敏感性试验、细胞分化等实验研究。
巨噬细胞原代培养方法步骤
1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 1ml（勿注入肠内）。 2．引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒精中3～5秒。 3．置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。 4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Ea
小鼠腹腔巨噬细胞原代培养
实验方法原理 巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。 巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如P331、S774A.1、RAW309
原代培养的实验操作要领
混匀操作要领（1）火焰消毒吸管，用Hanks液冷却和湿润管内壁（这是因为刚分离的组织细胞易粘在管壁上）（2）吸管头插入管底（3）用吸管反复轻轻吹打组织块器械的使用（1）用工作台消毒镊子取浸泡在酒精中消毒的器械。（2）器械置无菌干纱布内嚓一下。迅速通过火焰，冷却后使用。（3）用过的器械置另一加盖的器皿
原代培养技术的实验步骤
以胚胎小鼠为例1．取材：将孕鼠拉颈椎处死，投入75%酒精浸泡数秒消毒，提出孕鼠控掉酒精，放置于蜡盘中用大头针固定。用手术器械逐层分离皮肤和肌肉组织，打开腹腔。注意不同的解剖层次使用不同的消毒器械。最后取出双角子宫置于无菌平皿内。2．用Hanks液洗涤3次，剪开子宫取出胚胎。除去子宫、血液和筋膜等组织
巨噬细胞原代培养方法步骤
1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 1ml（勿注入肠内）。 2．引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒精中3～5秒。 3．置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。 4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Ea
小胶质细胞原代培养实验
基本方案 实验方法原理 利用混合胶质细胞培养物分层生长，以及小胶质细胞半悬浮生长的原理，通过摇床震荡法，将皮层来源的混合胶质细胞培养物最上层的小胶质细胞震摇下
原代细胞的培养与建系
凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。细胞的纯化或细胞克隆技术是细胞培养工作的基础。 原代细胞的取材 人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。 一、取材的基本要求 1．取材要注意新鲜和保鲜 2．应严格无菌
星形胶质细胞（astrocyte）原代培养
星形胶质细胞来源于2天的大鼠。断头后的大鼠大脑收集在含有11mM 碳酸氢钠，71mM葡萄糖和1%抗菌素的DMEM溶液中。移除脑膜，血管和白质。大脑皮层用机械分裂法进行匀浆，然后将细胞悬液经230μm，104μm 和73.3μm孔的铁丝网依次过滤。然后用700g 速度10分钟离心收集细胞，
小胶质细胞原代培养实验
实验方法原理利用混合胶质细胞培养物分层生长，以及小胶质细胞半悬浮生长的原理，通过摇床震荡法，将皮层来源的混合胶质细胞培养物最上层的小胶质细胞震摇下来继续培养，达到分离和纯化小胶质细胞的目的。实验材料新生1-3d的仔鼠试剂、试剂盒含10%胎牛血清的DMEM培养基D-PBS液消化液(0.25%胰蛋白酶+
原代细胞培养优点与用途？
一、优点 (1) 细胞刚离开机体，生物学性状与原体内细胞比较接近，相比之下，细胞系的一个缺点是它们往往与原始的组织有不一样的遗传和表型，而原代细胞保持了细胞在体内的许多重要标志和功能。 (2) 细胞的初代培养也是建立各种细胞株（系）的必经阶段。 二、原代细胞培养的临床应用： (1) 细胞
小鼠肝细胞原代培养实验
小鼠肝细胞原代培养可以：（1）用于细胞保种；（2）用于分子生物学研究；（3）用于基因治疗研究。实验方法胰酶消化法实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料小鼠试剂、试剂盒DMEM 无血清DMEM
原代细胞培养之——取材技术
细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至10~20代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增