G418筛选稳定表达细胞系
1.G418的配制：取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。2.细胞培养：取待测培养细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入多孔培养板中，培养6小时左右开始加药。3.制备筛选培养基：在100ug/ml~1000ug/ml范围内确定几个梯度，比如先做个100ug/ml、400ug/ml、800ug /ml、1000ug/ml，按梯度浓度用培养基稀释G418制成筛选培养基。4.加G418筛选：吸除培养孔中培养基，PBS洗涤一次，每孔中加入不同浓度的筛选培养基。5.换液：根据培养基的颜色和细胞生长情况，每3~5天更换一次筛选培养基。方法同4.6.确定最佳筛选浓度：在筛选10~14天内能够杀死所有细胞的最小G418浓度即为最佳筛选浓度。在第一轮就筛选出最佳G418浓度的可能性不大，最有可能的是出现这种情况：用某一浓度G418的量在筛选14天后还不能杀死细胞，而用下一个梯度的 G418的......阅读全文
T7RNA聚合酶系统基因表达实验（二）
单病毒感染OST7-1细胞实验方法原理OST7-1 细胞来源于鼠 L929 细胞，能在细胞质中持续表达噬菌体 T7 RNA 聚合酶，因此，应用此细胞系无需用 vTF7-3 感染细胞。实验材料贴壁培养的单层 OST7-1 细胞含有 pT7 控制的外源基因的重组病毒储液试剂、试剂盒完全 MEM-2.5
人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立实验
人非小细胞肺癌裸鼠原位种植转移模型的建立：（1）探讨肺癌远处转移和阻断其远处转移的研究；（2）模拟晚期非小细胞肺癌转移的自然发生过程；（3）在活体动物的完整器官内评估瘤细胞播散和肿瘤的生长。实验方法原理将表达GFP的质粒pRNAT-U6/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP
常见的人肝癌细胞HEPG2细胞株都有哪几种？
通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。稳定细胞株筛选一般是将外源DNA克隆到具有某种抗性或选择基因的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中，用载体中所含的选择标志进行筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白的细胞株。那么常见的人肝癌细胞HEPG2细胞株都有哪
稳定细胞株构建
稳转细胞系（稳定表达细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。稳转细胞株包括多克隆稳转细胞株和单克隆稳转细胞株。慢病毒感染目的细胞后，通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细
微生物克隆系统使重组基因表达的筛选更加容易
传统的手工挑取微生物克隆是一个费时烦人且易出错的过程。微生物克隆筛选系统一小时可以完成3000 个克隆的挑取，而一个熟练的人工只能挑取约600 个克隆。自动化系统的速度相比人工提高了至少5 倍，最关键的是更加准确，有效性>98%。微生物克隆筛选系统的荧光成像模块可以显著减少下游的工作量，因为通过
液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白实验
实验方法原理 将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。实验材料 TY试剂、试剂盒 储存液溶菌酶干粉细菌裂解缓冲液甘油水溶液实验步骤 一、材料与设备1. 2X TY：16 g 蛋白胨，10 g 酵母提
液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白实验
实验方法原理 将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。 实验材料
微生物克隆系统使重组基因表达的筛选更加容易
传统的手工挑取微生物克隆是一个费时烦人且易出错的过程。微生物克隆筛选系统一小时可以完成3000 个克隆的挑取，而一个熟练的人工只能挑取约600 个克隆。自动化系统的速度相比人工提高了至少5 倍，最关键的是更加准确，有效性>98%。微生物克隆筛选系统的荧光成像模块可以显著减少下游的工作量，因为通过
液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白实验
将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法
调控基因表达的“染色质环”新因子筛选获进展
中国科学院广州生物医药与健康研究院、生物岛实验室研究员姚红杰课题组通过系统性筛选在基因组上与CTCF共定位的转录因子，鉴定出大量与CTCF存在高共定位率的新转录因子，并选取了转录因子BHLHE40进行后续的功能验证，发现BHLHE40可以调控CTCF在基因组上的结合，进而影响其介导的远距离染色质
微生物克隆系统使重组基因表达的筛选更加容易
传统的手工挑取微生物克隆是一个费时烦人且易出错的过程。微生物克隆筛选系统一小时可以完成3000 个克隆的挑取，而一个熟练的人工只能挑取约600 个克隆。自动化系统的速度相比人工提高了至少5 倍，最关键的是更加准确，有效性>98%。微生物克隆筛选系统的荧光成像模块可以显著减少下游的
基因转染和实验设计原则
磷酸钙-DNA共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项
质粒转染大肠杆菌
质粒转染大肠杆菌可应用于：（1）细菌株的构建；（2）细胞工程；实验方法原理感受态细胞易于接受外来基因成为重组细胞，实验将质粒加入有感受态细胞的培养皿中，热击处理进行质粒转染。实验材料细胞株质粒试剂、试剂盒链霉素青霉素FCSPBS胰酶EDTA转染试剂(Lipofectamine TM2000)胰化蛋白
质粒转染大肠杆菌
实验方法原理 感受态细胞易于接受外来基因成为重组细胞，实验将质粒加入有感受态细胞的培养皿中，热击处理进行质粒转染。 实验材料 细胞株 质
RNA干涉实验——采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子
实验方法原理因为哺乳动物细胞不具备低等真核生物细胞所具有的扩增 RNAi 信号的机制，因此人工合成或体外转录的 siRNA 分子在细胞内的作用是瞬时性的，不适合用于进行靶基因的表达受到抑制后细胞表型的长期变化观察，也不适于进行文库的筛选。此外，体外制备 siRNA 分子的成本比较高，而且 siRNA
CHO工程细胞Horizon－HDBioP3的测试与应用
CHO工程细胞革命Horizon Discovery CHO工程细胞系来源于ECACC（欧洲细胞库） CHO-K1 细胞，应用Horizon Discovery的重组腺病毒（rAAV）技术，通过同源重组的方式将GS基因（谷氨酰胺合成酶）第六外显子（酶催化活力必须元件）敲除，得到无谷氨酰胺合成
潮霉素B性质及应用
潮霉素B(HygromycinB )是由吸水链霉菌（Streptomyceshygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因
关于杆状病毒表达系统的简介
杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。 体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统。原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞系统，它操作简便，周期短，收益大，表达产物稳定，但是表达基
FLIPRTETRA系统检测Gi和Gs偶联GPCR介导的第二信使cA...（一）
FLIPRTETRA系统检测Gi-和Gs偶联GPCR介导的第二信使cAMP信号变化简介在这篇应用文献中我们展示了基于Promega公司 GloSensor. cAMP 实验中的修改后的发光萤火虫荧光素酶的应用。在FLIPR.Tetra高通量筛选系统进行cAMP水平的检测以保证在动力学模式下精确检测G
Pichia酵母表达系统操作方法
我先说我有的质粒和菌株：PPIC9K，PPIC9，PPICZahphaA，B，C以及一个改造的PPIC9K载体，EcoRI和BamHI双酶切，C末端引入了一个6histag菌株：GS115，KM71，X33，以及十几个空载体对照菌株我的酵母表达Protocol：>10ug质粒用Sal线性化，加1/1
真核细胞表达系统的类型与常用真核细胞表达载体
原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今
hERG－K+通道电流和药理学特性Molecular－Devices－IonFlux（一）
简介HERG (human ether-a go-go-related gene) K+ 通道在心脏中高表达，是心肌动作电位三期快速复极化电流(IKr)的主要组成部分(Curran ‘95; Sanguinetti ‘95)。hERG 突变引起的功能缺失常伴随一些遗传性长QT 综合症(LQT
高通量药物筛选确定白藜芦醇为肝脏SELENOP表达的抑制物
必需的微量元素硒(Se)是支持和维持硒蛋白生物合成所必需的。微量元素以硒半胱氨酸(Sec)或硒蛋氨酸(SeMet)的形式整合到蛋白质中，后者在AUG密码子上随机发生，而前者是一个严格调控的过程。 氨基酸Sec赋予含Sec的硒蛋白家族独特的催化特性，这些蛋白质在人体生理中起关键作用，包括控制甲状
新品上市－|－Andromeda－X－全新蛋白质表达和功能快速筛选系统
当您从事抗原生产酶促蛋白优化小分子药物靶蛋白表达重组膜蛋白重组蛋白研发和生产是否有如下困扰常规技术手段太过繁杂，耗时耗力？蛋白表达水虽然高，但无法同时监测其构象稳定性信息？无法使用粗裂解液进行快速筛选？无论您是从事蛋白质研究或者生产工作，您都需要一个帮助快速优化重组蛋白表达的得力助手。Androme
农杆菌瞬时表达CRISPR编辑基因和快速筛选突变植株新方法
最近，美国康涅狄格大学和南京农业大学李义教授团队在Horticulture Research发表了题为“A method for the production and expedient screening of CRISPR/Cas9-mediated non-transgenic mutan
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最近，美国康涅狄格大学和南京农业大学李义教授团队在Horticulture Research发表了题为“A method for the production and expedient screening of CRISPR/Cas9-mediated non-transgenic mutan
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药物研发的好帮手蛋白质表达系统
近年来，随着生物药市场和基因工程技术的发展，重组治疗性抗体或者单抗的需求在生物药中的比例也逐年上升。重组mAbs被应用于包括癌症及免疫系统缺陷在内的许多疾病的治疗当中。 重组mAbs通过基因工程技术改造后可以在多种宿主细胞表达。重组mAbs在表达后进行翻译后修饰、蛋白质折叠、组装及适当的糖
概述多顺反子的应用前景
1、根据已发表的相关序列，分别设计引物，通过PCR技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件：质体核糖体（16S)RNA操纵元启动子（Prrn）、质体psbA基因3′端终止子（psbA3′）、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因（aadA）、水稻质体基因组高频同源重组片段（psb
多顺反子的应用前景
⒈根据已发表的相关序列,分别设计引物,通过PCR技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件:质体核糖体(16S)RNA操纵元启动子(Prrn)、质体psbA基因3′端终止子(psbA3′)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aadA)、水稻质体基因组高频同源重组片段(psbC/t