细胞RNA的提取方法

(一)细胞总RNA的提取1、6孔板细胞汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5 min。2、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5 ml EP管中,加新开的氯仿0.2 ml,轻摇15 s。3、室温静置2-3 min后,12000 rpm,15 min,4 ℃,离心。然后取上清无色水相(约0.6 ml)到 EP管(DEPC处理过),加0.5 ml新开的异丙醇,室温下静置10 min。4、12000 rpm,10 min,4 ℃,离心。观察总RNA在管底的白色沉淀,弃去上清,75%乙醇1.0 ml洗涤(用DEPC水新配制)后,7500 rpm,5 min,4 ℃离心。5、去上清,点离,用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10 min, DEPC处理水20-30 μl加入,中枪打匀,55-60 ℃水浴10 min溶解总RNA,测OD值。6、......阅读全文

细胞化学词汇分支RNA

中文名称:分支RNA英文名称:branched RNA定  义:通过直链RNA中特定部位的2′-羟基与另一直链RNA(或同一RNA分子)的末端5′-磷酸基形成磷酸酯键而得到的RNA,见于Ⅱ型内含子自剪接和真核信使核糖核酸(mRNA)内含子剪接的中间体。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸

细胞化学词汇RNA假结

中文名称:RNA假结外文名称:RNA pseudoknot定       义:RNA中的一种常见的三级结构元件。RNA的茎环结构中的环上序列与其他部位(通常是邻近部位)的序列碱基配对,形成类似“打结”形状。

细胞化学词汇RNA转运

中文名称:RNA转运英文名称:RNA transport定  义:RNA分子从一个细胞区室或区域移动到另一个细胞区室或区域的过程。各类不同RNA(如信使RNA、核小RNA、核糖体RNA和转移RNA)的转运遵循不同的机制。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

细胞化学基础转移RNA

转移RNA(tRNA)在蛋白质合成过程中负责转运氨基酸、解读mRNA遗传密码。tRNA占细胞总RNA的10%~15%,绝大多数位于细胞质中。tRNA由Crick于1955年提出其存在,Zamecnik和 Hoagland于1957年鉴定。1.tRNA一级结构具有以下特点:①是一类单链小分子RNA,长

组织/细胞RNA快速提取

 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)提示: 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇! 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 组织培养细胞a. 收

真核细胞总RNA的制备(Total-RNA-Isolation)1

从细胞中分离RNA的纯度于完整性对于许多分子生物学实验至关重要。如Northern印迹与杂交分析、寡聚(dT)纤维素选择分离 mRNA,cDNA合成及体外翻译等实验的成败,在很大程度上决定于RNA的质量。RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染。快速一步法提取总RNA组织及有核细胞在匀浆过程中

真核细胞总RNA的制备(Total-RNA-Isolation)2

Total RNA Isolation Guanidine-based isolation Objective:  To obtain total RNA from zebrafish embryos. Required Materials  Denaturing Solution

纯化RNA实验——从培养的细胞中纯化总RNA

实验材料细胞试剂、试剂盒RNA 提取缓冲液变性液水饱和酚仪器、耗材培养皿Falcon 2063 管实验步骤1. 取 1 个细胞已长满的 100 ml 培养皿,吸出培养液,加 2 ml RNA 提取缓冲液,用橡胶刮棒刮下细胞。RNA 提取缓冲液:变性液,20 mlβ-巯基乙醇,0.144 ml2 mo

细胞化学词汇反式作用RNA

中文名称:反式作用RNA英文名称:trans-acting RNA定  义:通过分子间反应机制起作用的RNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

组织和细胞RNA的制备

一、 组织和细胞总RNA提取:异硫氰酸胍法(一)试剂准备1.CSB缓冲液:42mM柠檬酸钠;0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基,N甲基甘氨酸钠);0.2 mM β-巯基乙醇。2.变性液:异硫氰酸胍(终浓度 4 M)25g、CSB缓冲液 33ml,混合直至完全溶解,可在65℃助

细胞化学词汇​RNA衣壳化

中文名称:RNA衣壳化英文名称:RNA encapsidation定  义:RNA被蛋白质衣壳包裹生成RNA病毒的过程。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

细胞化学词汇时序小RNA

中文名称:时序小RNA英文名称:small temporal RNA;stRNA定  义:一类长度约为22核苷酸的非编码RNA,是微RNA大家族的成员。与生物发育时间顺序调控有关,如早期报道的线虫lin-4和let-7时序小RNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

细胞化学词汇单链RNA

中文名称:单链RNA英文名称:single-stranded RNA;ssRNA定  义:只含有一条链的RNA分子。生物体中绝大部分RNA是单链RNA,形成二级结构时,是既有单链、又有双链结构域的RNA分子;只有某些RNA病毒是由两条链互补而成的双链RNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科)

细胞质RNA提取实验

基本方案             实验材料 RNA 试剂、试剂盒

细胞质RNA提取实验

由于RNA的种类来源很多,因而提取制备方法各异,一般有苯酚法,去污剂法和盐酸胍法,其中苯酚法实验室最常用。组织匀浆后用苯酚处理离心,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,向水相加冷乙醇后, RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质,且获得生物活性的RNA。实验材料RNA试剂、试剂盒PBS细

细胞化学词汇双义RNA

中文名称:双义RNA定       义:部分基因的表达需要先进行转录合成出亚基因组RNA,作为mRNA翻译出蛋白质

细胞化学词汇核小RNA

中文名称:核小RNA外文名称:small nuclearRNA定       义:核小RNA是真核生物转录后加工过程中RNA剪接体(spliceosome)的主要成分,参与mRNA前体的加工过程。

细胞化学词汇转移信使RNA

中文名称:转移-信使RNA英文名称:ransfer-messenger RNA;tmRNA定  义:一类兼有接受(携带)氨基酸和编码氨基酸的双功能RNA分子。其主要功能是在特定情况下可提前终止蛋白质的生物合成,以免产生不良产物。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

总细胞RNA的提取方法

实验概要总细胞RNA的提取在建库过程中,由于cDNA合成这一步将使用通用引物oligo dT,因此在总RNA提取这一步中,提取纯化mRNA不是非常必要的。提取高纯度的总细胞RNA足可以被用作cDNA合成的模板,目前提取RNA的方法很多,也有不少商业化的试剂盒。实验步骤1. TRIZOL法   1)

细胞化学词汇转移信使RNA

中文名称:信使RNA外文名称:Messenger RNA 定       义:信使RNA,中文译名“信使核糖核酸”,是由DNA的一条链作为模板转录而来的、携带遗传信息能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸。以细胞中基因为模板,依据碱基互补配对原则转录生成mRNA后,mRNA就含有与DNA分子中某些功能片

细胞质RNA提取实验

实验材料 RNA试剂、试剂盒 PBS细胞裂解液SDS蛋白酶K酚氯仿异戊醇无水乙醇仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 1.  对于单层培奍细胞(1)每10 cm 培养皿培养的细胞,用冰冷PBS洗涤3次。(2)每次1 ml 然后用小体积PBS刮下细胞,转移至冰浴的离心管中。(3)300 g 离心5 min

单细胞RNA测序发现新的免疫细胞

  最近在《Nature Immunology》发表的一项新研究,详细检测了一组新发现的免疫细胞(被称为ILC)。通过对单个扁桃体细胞的基因表达进行分析,瑞典卡罗林斯卡学院的科学家们,发现了三个以前未知的ILC子群,并揭示了关于“这些细胞在人体中如何发挥功能”的更多信息。  先天淋巴细胞(ILC)是

细胞化学词汇核仁小分子RNA

中文名称:核仁小分子RNA外文名称:small nucleolar RNA定       义:核仁小RNA(small nucleolar RNA),是近来生物学研究的热点,由内含子编码,分布于真核生物细胞核仁的小分子非编码RNA,具有保守的结构元件。已证明有多种功能,主要参与rRNA的加工;反义s

血液中的宝藏:细胞外RNA

血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。产前基因筛查是血液检测的一个重要应用,不过其他循环生物学指标正在受到越来越多地关注,比如甲基化、RNA、微囊泡和外泌体。为了帮助大

调节细胞衰老的RNA分子发现

  美国得克萨斯大学西南医学中心科学家发现了一种新的衰老调节因子SNORA13。当这种非编码RNA被抑制时,细胞衰老过程显著减缓,表明它可能是治疗与衰老相关疾病的潜在靶点。研究团队指出,这一发现有望为神经退行性疾病、心血管疾病和癌症等与衰老密切相关的疾病提供新的干预手段,也有望为治疗核糖体病开辟新途

活细胞RNA成像技术获突破

原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/9/509263.shtm

解读单细胞RNAseq技术

多年来,跟踪一个单细胞的转录组,超出了我们的能力。但是现在,时代已经变了,新的单细胞RNA-seq方法,可以分析大量的细胞及它们的命运  多年来,跟踪一个单细胞的转录组,超出了我们的能力。但是现在,时代已经变了,新的单细胞RNA-seq方法,可以分析大量的细胞及它们的命运。  我们都参加过大型生日派

细胞化学词汇RNA稳定性

中文名称:RNA稳定性英文名称:RNA stability定  义:在改变细胞环境情况下,或当分离、纯化、保存,以及进行物理和化学操作时,RNA分子保留其原结构状态和抗拒降解的程度。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)

调节细胞衰老的RNA分子发现

美国得克萨斯大学西南医学中心科学家发现了一种新的衰老调节因子SNORA13。当这种非编码RNA被抑制时,细胞衰老过程显著减缓,表明它可能是治疗与衰老相关疾病的潜在靶点。研究团队指出,这一发现有望为神经退行性疾病、心血管疾病和癌症等与衰老密切相关的疾病提供新的干预手段,也有望为治疗核糖体病开辟新途径。

培养细胞中RNA检测-Northern-Blot

培养细胞中RNA检测-Northern Blot1.制胶:(1%)琼脂糖                2.5g10×Mops缓冲液   25.0mlH2O               192.0ml2.在微波炉中加热煮沸使胶完全溶于水并灭菌。3.取出胶冷却到60℃,于通风柜中加45ml甲醛,混匀。