DNA双链断裂检测——变压场凝胶电泳(GFGE)

DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中,通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白,纯化细胞DNA,再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳,结合DNA解旋荧光测定(FADU)法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法: (1)蛋白酶K,SDS,低熔点琼脂糖。 (2)配制方法: 细胞缓冲液(A液)。0.25mol/L NaCl + 10mmol Na2HPO4 + 1mmol/L MgCl2,pH7.2. 细胞裂解液(B液)。9mol/L脲 + 10mmol/L NaOH + 2.5mmol/L环烷二胺四乙酸 + 0.1%SDS。 碱性变性液I(C液)。B液 + 0.2mol/NaOH,体积比为45:55. 碱性变性液I(D液)。B液 + 0.2mol/NaOH,体积比为40:60. 抗变性液(F液)。1ug/L溴化乙锭 + 13.3mmol/......阅读全文

揭示APOBEC3介导的DNA修复在CRISPR/Cas9基因编辑中突变新机制

  中国科学院上海生命科学研究院(人口健康领域)中科院-马普学会计算生物学伙伴研究所杨力研究组与上海科技大学陈佳研究组、南京医科大学沈彬研究组合作研究揭示了胞嘧啶脱氨酶(APOBEC)在CRISPR/Cas9引发的DNA断裂修复过程中产生突变的新机制,为进一步提高基因组编辑保真度提供了新思路。  C

研究发现N6甲基腺苷调节人体细胞RNA:DNA杂交的稳定性

  近日,英国诺丁汉大学等科研机构的研究人员在Nature Genetics上发表了题为“N6-methyladenosine regulates the stability of RNA:DNA hybrids in human cells”的文章,发现N6-甲基腺苷可以调节人体细胞RNA:DNA

关于第一类内含子的可能机制介绍

  第一类内含了DNA的内部ORF表达,产生一个双链内切核酸酶,该酶识别无内含子的同一基因上的顺序并结合上去,酶切产生具有4bp伸出析3'-OH末端的双链断裂,然后以I+基因的未切割的同源顺序作为模板来修复双链断裂,该修复机制延伸到侧翼区域,导致共转变,而内含子一旦插入后,它本身既可产生内切

阿司匹林能预防癌症?蒋晖揭示阿司匹林促DNA修复新机制

阿司匹林(Aspirin,乙酰水杨酸),1898年上市以来,至今已有超过百年的临床应用,成为医药史上三大经典药物之一。至今仍是世界上应用最广泛的解热、镇痛和抗炎药,也是作为比较和评价其他药物的标准制剂。近年来,阿司匹林被发现在多种疾病中有效,甚至对神经退行性疾病、心血管疾病、癌症等重大疾病也有着一定

Nature子刊:组蛋白与DNA损伤修复

  我们的机体是由亿万个细胞组成的,这些细胞就像是一个个繁忙的工厂,不断有分子在其中生成、去除和修饰,这些过程不可避免的会出现错误。举例来说,UV照射和许多其他因素都可能导致DNA链断裂。  为了确保自己的生存和增殖,细胞采取了一些修复损伤的措施。虽然DNA修复一直是研究的热点,但人们对这一基础机制

Nature子刊:组蛋白与DNA损伤修复

我们的机体是由亿万个细胞组成的,这些细胞就像是一个个繁忙的工厂,不断有分子在其中生成、去除和修饰,这些过程不可避免的会出现错误。举例来说,UV照射和许多其他因素都可能导致DNA链断裂。 为了确保自己的生存和增殖,细胞采取了一些修复损伤的措施。虽然DNA修复一直是研究的热点,但人们对这一基础机制仍然知

伊立替康的药理毒理

  药理作用  伊立替康是喜树碱的半合成衍生物。喜树碱可特异性地与拓扑异构酶I结合,后者诱导可逆性单链断裂,从而使DNA双链结构解旋;伊立替康及其活性代谢物SN-38可与拓扑异构酶I-DNA复合物结合,从而阻止断裂单链的再连接。现有研究提示,伊立替康的细胞毒作用归因于DNA合成过程中,复制酶与拓扑异

关于注射用盐酸博莱霉素的药理毒理介绍

  1、抗肿瘤作用  (1)体外:对HELAS3细胞、腹水肝癌、吉田肉瘤细胞等DNA及蛋白合成、发育障碍具有明显的作用。  (2)体内:可使狗淋巴肉瘤(自发肿瘤)肿瘤消失。  2、作用机制:引起DNA单链和双链断裂,阻碍DNA合成。

PNAS惊人发现-肺炎会损害DNA

  肺炎是全球死亡的主要原因,最近的一项研究显示,肺炎的一种最常见致病菌,可能会损害肺细胞的DNA。相关研究结果发表在六月十五日的《PNAS》杂志。  在这项研究中,来自新加坡-麻省理工学院(MIT)研究与科技联盟(Singapore-MIT Alliance for Research and Te

PNAS惊人发现:肺炎会损害DNA

  肺炎是全球死亡的主要原因,最近的一项研究显示,肺炎的一种最常见致病菌,可能会损害肺细胞的DNA。相关研究结果发表在六月十五日的《PNAS》杂志。  在这项研究中,来自新加坡-麻省理工学院(MIT)研究与科技联盟(Singapore-MIT Alliance for Research and Te

细胞周期信号通路PRKDC基因的临床解释

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。

​DNA损伤修复信号通路PRKDC基因的临床解释

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。

PRKDC基因的结构特点及生理功能

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。

用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端

实验材料限制性内切核酸酶T4 噬菌体 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液醋酸氨(10 mol/L)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和缓冲液适当的

用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端

            实验材料 限制性内切核酸酶 T4 噬菌体 DNA 聚合酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 醋酸氨

用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端

实验材料 限制性内切核酸酶T4 噬菌体 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒 醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材 Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液醋酸氨(10 mol/L)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和缓冲

MRE11在同源重组修复起始过程中受核内GRB2精准时空调控

  DNA双链断裂比一般的碱基损伤或单链断裂更难以修复,极易引起机体突变,因此在癌症的发生和发展过程中具重要作用。在损伤发生早期,断裂DNA链两端的H2AX发生S139位点的磷酸化形成γH2AX,后者作为发起DNA损伤修复的信号和招募修复蛋白的平台,通过MDC1,Rad17等蛋白将以MRE11为中心

变性梯度凝胶电泳不同的双链DNA-片段

  不同的双链DNA 片段因为其序列组成不一样,所以其解链区域及各解链区域的解链浓度也是不一样的。当它们进行DGGE时,一开始变性剂浓度比较小,不能使双链DNA 片段最低的解链区域解链,此时DNA 片段的迁移行为和在一般的聚丙烯酰胺凝胶中一样。然而,一旦变性剂浓度达到DNA 片段最高的解链区域温度时

复制n次后,双链等长的DNA有几个?

复制n次后,双链等长的DNA有2n-2n个。

自身抗体检测项目介绍抗双链DNA抗体

抗双链DNA抗体介绍: 抗双链DNA抗体(抗ds DNA)是抗DNA抗体中的一种。其反应位点位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。抗ds DNA主要出现于SLE患者的血清中,对SLE患者的组织器官损伤有致病作用。在SLE患者血循环中,大分子的DNA浓度显著高于正常人,DNA还可与多种器官的微血管结构包括肾小

临床化学检查方法介绍抗双链DNA抗体介绍

抗双链DNA抗体介绍:  抗双链DNA抗体(抗ds DNA)是抗DNA抗体中的一种。其反应位点位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。抗ds DNA主要出现于SLE患者的血清中,对SLE患者的组织器官损伤有致病作用。在SLE患者血循环中,大分子的DNA浓度显著高于正常人,DNA还可与多种器官的微血管结构包括肾

临床化验单详解抗双链DNA抗体介绍

抗双链DNA抗体介绍: 抗双链DNA抗体(抗ds DNA)是抗DNA抗体中的一种。其反应位点位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。抗ds DNA主要出现于SLE患者的血清中,对SLE患者的组织器官损伤有致病作用。在SLE患者血循环中,大分子的DNA浓度显著高于正常人,DNA还可与多种器官的微血管结构包括肾小

呼和浩特一供热企业资金链断裂欲停供暖气

12月6日,内蒙古自治区呼和浩特市旭泰热力有限公司(下称旭泰热力)发布一则文件称,2022年采暖季到来之际,疫情肆虐,现虽疫情得到控制,但居民缴纳采暖费积极性不高,加上此前商榷的贷款推迟,公司无力购买煤炭,储煤只能维持第二天的供暖用煤。如果筹集不到资金,公司将于8日停止供暖。  旭泰热力向呼和浩特市

“手术刀”VS“钢锯”,耶鲁创造更精准高效基因编辑技术

  你可以将现有将技术认为是钢锯而此方法是手术刀,能够使我们在真核细胞基因组内多个位点、高效地做精确的遗传修饰。”通讯作者,耶鲁的分子生物学副教授Farren Isaacs形象的说。  现有例如CRISPR/Cas9这样的基因编辑技术,引入遗传修饰通常会打断两股DNA链。有时这些断裂并不是固定的,修

刘如谦报告更高效率的大片段基因整合技术——PASSIGE

  2024年4月29日,刘如谦创立的基于先导编辑的 Prime Medicine 公司宣布,其治疗慢性肉芽肿病(CGD)的先导编辑疗法的试验性新药(IND)申请已获得美国食品药品监督管理局(FDA)的批准,将启动全球1/2期临床试验。  作为碱基编辑和先导编辑的发明人,刘如谦在最近举行的美国基因与

德国院士Cell获蛋白修饰新发现

  来自德国马普生物化学研究院的研究人员以DNA双链断裂修复作为例,解析了类泛素蛋白SUMO的作用新机制――SUMO化修饰过程靶向的是一组蛋白,而负责特异性修饰的则是局部修饰酶和高特异性启动过程。这一相关成果公布在Cell杂志上。   领导这一研究的是德国马普生物化学研究所分子细胞生物学系主任St

RPA4基因的结构特点和主要作用

这个基因编码一个单链dna结合蛋白,它是复制蛋白a复合物的30kda亚单位。复制蛋白a是dna双链断裂修复和细胞周期检测点激活的重要因子。编码蛋白定位于DNA修复灶,可能参与细胞DNA损伤反应这种蛋白质也可能在抑制病毒复制方面发挥作用。

什么是realtimePCR溶解曲线

如图所示,这就是一个标准的real time-qPCR溶解曲线。下面从几个方面来解读:1、随着温度的升高,DNA双链断裂;接着温度降低,到达退火温度的时候,DNA双链复性,荧光分子绑定在DNA双链上,所以荧光信号值到达最高点。上面的是反映在扩增曲线上面的。2、接着DNA双链分子由退火温度约60度,继

什么是realtimePCR溶解曲线

如图所示,这就是一个标准的real time-qPCR溶解曲线。下面从几个方面来解读:1、随着温度的升高,DNA双链断裂;接着温度降低,到达退火温度的时候,DNA双链复性,荧光分子绑定在DNA双链上,所以荧光信号值到达最高点。上面的是反映在扩增曲线上面的。2、接着DNA双链分子由退火温度约60度,继

什么是realtimePCR溶解曲线

如图所示,这就是一个标准的real time-qPCR溶解曲线。下面从几个方面来解读:1、随着温度的升高,DNA双链断裂;接着温度降低,到达退火温度的时候,DNA双链复性,荧光分子绑定在DNA双链上,所以荧光信号值到达最高点。上面的是反映在扩增曲线上面的。2、接着DNA双链分子由退火温度约60度,继