DNA双链断裂检测——变压场凝胶电泳(GFGE)

DNA双链断裂与细胞死亡的关系更为密切。变压场凝胶电泳是采用将细胞包埋在低熔点琼脂糖凝胶中,通过蛋白酶、去污剂等渗入凝胶中融解细胞、去蛋白,纯化细胞DNA,再通过梯增电压进行琼脂糖凝胶电泳,结合DNA解旋荧光测定(FADU)法和检测DNA双链断裂。 1、主要试剂及配制方法: (1)蛋白酶K,SDS,低熔点琼脂糖。 (2)配制方法: 细胞缓冲液(A液)。0.25mol/L NaCl + 10mmol Na2HPO4 + 1mmol/L MgCl2,pH7.2. 细胞裂解液(B液)。9mol/L脲 + 10mmol/L NaOH + 2.5mmol/L环烷二胺四乙酸 + 0.1%SDS。 碱性变性液I(C液)。B液 + 0.2mol/NaOH,体积比为45:55. 碱性变性液I(D液)。B液 + 0.2mol/NaOH,体积比为40:60. 抗变性液(F液)。1ug/L溴化乙锭 + 13.3mmol/......阅读全文

Cell:揭示蛋白PARP1形成的超级胶水对DNA损伤的修复至关重要

  我们的 DNA 会不断受到损伤和修复。最严重的损伤发生在 DNA 断裂成两段时,即 DNA 双链断裂。它会产生两个松散的DNA末端,如果不加以修复,就会导致细胞死亡。  在一项新的研究中,来自德国德累斯顿工业大学生物技术中心的研究人员如今回答了一个长期存在的问题:是什么让断裂的DNA末端不被分开

自然子刊:揭示基因组编辑新机制

  中国科学院上海生命科学研究院(人口健康领域)中科院-马普学会计算生物学伙伴研究所杨力研究组与上海科技大学陈佳研究组、南京医科大学沈彬研究组合作研究揭示了胞嘧啶脱氨酶(APOBEC)在CRISPR/Cas9引发的DNA断裂修复过程中产生突变的新机制,为进一步提高基因组编辑保真度提供了新思路。  C

PRKDC基因编码的功能和结构描述

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。This gene encodes the catalytic subunit of the DNA-dependent prot

RAD54L基因编码的功能和结构描述

该基因编码的蛋白质属于类死亡螺旋酶超家族,与酿酒酵母rad54相似,后者参与dna的同源重组和修复。该蛋白在dna双链断裂的同源重组修复中起着重要作用。这种蛋白质与双链dna的结合引起dna拓扑结构的改变,这被认为有助于同源dna的切割,并刺激dna重组。选择性剪接导致编码相同蛋白质的多个转录变体。

实体肿瘤检测RAD54L基因介绍

该基因编码的蛋白质属于类死亡螺旋酶超家族,与酿酒酵母rad54相似,后者参与dna的同源重组和修复。该蛋白在dna双链断裂的同源重组修复中起着重要作用。这种蛋白质与双链dna的结合引起dna拓扑结构的改变,这被认为有助于同源dna的切割,并刺激dna重组。选择性剪接导致编码相同蛋白质的多个转录变体。

竟能追溯到30亿年前!科学家发现高度保守的DNA修复因子

  如果骨头断裂或肌腱折断,我们会立即寻求治疗。但是,对于我们体内最脆弱,最珍贵的细胞染色体DNA的破裂频率十分惊人,有人估计每个细胞每天破裂多达10,000次,但这通常不会造成任何后果,这是因为有大量的DNA修复蛋白可以修复被化学或物理诱变剂,或正常细胞磨损损坏的DNA,预防基因组灾难。如果没有这

Nature子刊:提高CRISPRCas9保真度

  上海科技大学,中科院-马普计算生物学研究所,南京医科大学三处的研究人员合作发表了题为“APOBEC3 induces mutations during repair of CRISPR-Cas9-generated DNA breaks”的文章,证实了APOBEC在CRISPR/Cas9引发的同

单细胞凝胶电泳分析(single-cell-gel-eletrophoresis,SCGE)

单细胞凝胶电泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)是由Ostling等(1984)首创,后经Singh等(1988)进一步完善并逐渐发展起来的一种快速检测单细胞 DNA损伤的实验方法,适用于多种细胞,能够灵敏地检测DNA断裂,在检测诱变剂、射线等

RAD54L基因突变因子与药物介绍

该基因编码的蛋白质属于类死亡螺旋酶超家族,与酿酒酵母rad54相似,后者参与dna的同源重组和修复。该蛋白在dna双链断裂的同源重组修复中起着重要作用。这种蛋白质与双链dna的结合引起dna拓扑结构的改变,这被认为有助于同源dna的切割,并刺激dna重组。选择性剪接导致编码相同蛋白质的多个转录变体。

XRCC2基因的结构特点和作用

该基因编码reca/rad51相关蛋白家族的一个成员,参与同源重组以维持染色体稳定性和修复dna损伤。该基因通过同源重组参与dna双链断裂的修复,并在功能上与中国仓鼠irs1互补,irs1是一种修复缺陷突变体,对多种不同的dna损伤剂表现出超敏反应。

抗双链DNA抗体(aniDNA)的正常值及临床意义是什么

  Farr法结合活性小于或等于20%。  间接免疫荧光法阴性。  斑点免疫结合试验小于1:40(阴性)。  (注具体参考值请根据各实验室而定。)

用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端

            实验材料 限制性内切核酸酶 大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段 模板 DNA 试剂、试剂盒

用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端

实验材料 限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA试剂、试剂盒 乙酸铵乙醇dNTP 溶液仪器、耗材 Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵(10 mol/L )乙醇2. 酶和缓冲液适宜的限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚

用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段标记双链DNA的3’端

实验材料限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段模板 DNA试剂、试剂盒乙酸铵乙醇dNTP 溶液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液乙酸铵(10 mol/L )乙醇2. 酶和缓冲液适宜的限制性内切核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 I

抗双链DNA抗体(aniDNA)的临床意义及注意事项有哪些

  临床意义  阳性或增高:  可能为系统性红斑狼疮,还可见于其他结缔组织病、慢性活动性肝炎等。  结果阳性可能疾病:  系统性红斑狼疮 、 系统性红斑狼疮性关节炎 、 系统性红斑狼疮所致脊髓病。  注意事项  检查时要求:一般认为抗双链DNA的效价与病情相平行,即病情活动时,抗DNA抗体效价升高,

抗双链DNA抗体(aniDNA)的正常值及临床意义是什么

  正常值  Farr法结合活性小于或等于20%。  间接免疫荧光法阴性。  斑点免疫结合试验小于1:40(阴性)。  (注具体参考值请根据各实验室而定。)  临床意义  阳性或增高:  可能为系统性红斑狼疮,还可见于其他结缔组织病、慢性活动性肝炎等。  结果阳性可能疾病:  系统性红斑狼疮 、 系

游中胜《自然》子刊颠覆原有理论

当细胞核中的遗传物质开始分离的时候,一种称为ATM蛋白开始行使功能,这种蛋白由共济失调-毛细血管扩张突变基因(ataxia-telangiectasia mutated gene,ATM基因)编码。近期来自萨克生物研究学院(the Salk Institute for Biological Stud

PRKDC基因突变因子与药物介绍

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。[由RefSeq提供,2010年7月]This gene encodes the catalytic subunit of the

细胞周期信号通路相关PRKDC

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。[由RefSeq提供,2010年7月]This gene encodes the catalytic subunit of the

DNA损伤修复信号通路相关因子PRKDc

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。[由RefSeq提供,2010年7月]This gene encodes the catalytic subunit of the

与细胞周期信号通路相关因子介绍PRKDC

该基因编码dna依赖性蛋白激酶(dna-pk)的催化亚单位。与ku70/ku80异二聚体蛋白共同参与dna双链断裂修复和重组。编码的蛋白质是PI3/PI4激酶家族的成员。[由RefSeq提供,2010年7月]This gene encodes the catalytic subunit of the

AEM:有益菌帮助女性免受乳腺癌侵袭

  刊登在Applied and Environmental Microbiology杂志上的一项研究报告中,研究人员发现,有潜力诱发乳腺癌的细菌通常存在于癌症患者的乳腺中;而如果个体健康乳腺中含有大量的有益细菌,这些细菌则会保护女性免于癌症的发生;相关研究或可帮助科学家们利用益生菌来保护女性免于乳

RPA4基因编码的功能和结构描述

这个基因编码一个单链dna结合蛋白,它是复制蛋白a复合物的30kda亚单位。复制蛋白a是dna双链断裂修复和细胞周期检测点激活的重要因子。编码蛋白定位于DNA修复灶,可能参与细胞DNA损伤反应这种蛋白质也可能在抑制病毒复制方面发挥作用。This gene encodes a single-stran

新基因编辑法可成功逆转单个碱基变异

  最近一期英国《自然》杂志刊登一则基因编辑改进方法,可定位和修改DNA单个碱基,并且不在基因组中引入随机插入或缺失的基因。这种新的“碱基编辑”法使用一种修饰过的CRISPR/Cas9蛋白质,使它和另外两种蛋白一同工作,比现有改正单碱基变异的方法更高效。   大多数遗传疾病源于单核苷酸的突变(点突变

抗肿瘤药物开发有了新靶点

  同济大学戈宝学教授、毛志勇教授研究团队经多年研究首次发现,人体内一种名叫cGAS的合成酶,一旦从胞浆内逃逸进入细胞核内,就会“作恶”,抑制细胞的DNA修复,从而促进肿瘤发生。专家指出,该研究对开发新型抗肿瘤药物有重大意义,相关论文近日已在线发表在国际顶尖学术杂志《自然》上,并被国际著名学术刊物

研究揭示DNA某些区域可免受辐射伤害

  印度最近一项研究发现,人体DNA中的某些区域可免受辐射伤害,这一发现对维持人类基因组稳定性至关重要。相关研究成果日前在线发表在美国细胞出版社旗下的《iScience》杂志上。  人类基因组不断受到内源性和外源性损伤的挑战,维持基因组稳定性对任何生物体生存都至关重要。在外源性因素中,电离辐射是造成

什么是CRISPR/Cas9技术

CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列,并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割,从而造成靶位点DNA双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平的基因敲除、敲入或点突变。

什么是CRISPR/Cas9技术

CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列,并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割,从而造成靶位点DNA双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平的基因敲除、敲入或点突变。

多种CT后处理技术诊断听骨链断裂并砧骨移位病例报告

 患者,女,16岁,因骑电动车与货车相撞致头部及左耳外伤就诊,患者呈昏迷状态,外伤初期左外耳道有鲜血流出。于外伤后第19天因欲明确耳部损伤情况行颞骨CT检查。应用GE64层螺旋CT扫描机行颞骨CT扫描,骨重建算法,窗宽窗位分别设置为4000Hu;700Hu,层厚0.625mm,重叠0.3mm,分别以

天差地别!CRISPR导致的DNA断裂后修复与理论差距巨大

  尽管世人对CRISPR-Cas9基因编辑抱有很高期望,科学家们仍对其人体临床应用持怀疑态度。为什么呢?  “基因编辑非常强大,但是到目前为止还有许多问题和错误需要探索。它们的工作方式就像一个黑匣子,有许多猜想和假设,”加州大学伯克利分校分子生物学教授Jacob Corn说。“现在,我们终于有能力