过氧化物酶标记测定法检测细胞凋亡

原理:脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确的定位出正在凋亡的细胞,因而可在普通光学显微镜下进行观察。毛地黄植物是地高辛的唯一来源。在所有动物组织中几乎不存在能与抗地高辛杭体结合的配体,因而非特异性反应很低。抗地高辛的特异性抗体与脊椎动物甾体激素的交叉反应不到1%,若此抗体的Fc部分通过蛋白酶水解的方法除去后,则可完全排除细胞Fc受体非特异性的吸附作用。本方法可以用于福尔马林固定的石蜡包埋的组织切片、冰冻切片和培养的或从组织中分离的细胞凋亡测定。(一)试剂配制1、磷酸缓冲液PBS(pH7.4):磷酸钠盐 50mM,NaCl 200mM。2、蛋白酶K(200μg/ml,pH7.4):蛋......阅读全文

双脱氧法DNA测序实验——测序酶进行标记测序反应

在基本的双晩氧测序反应中,寡核苷酸引物退火于单链DNA摸板,在4种脱氧核糖核酸三磷酸存在时,引物为DNA聚合酶所延伸。反应混合物中也含有4种双脱氧核糖核苷三磷酸的其中一种,当它掺入到DNA的生长链时,可终止链的延伸。实验材料DNA试剂、试剂盒寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器

原装进口酶标各种荧光标记抗地高辛抗体

地高辛(Digoxin)是一种从洋地黄提取出的beta抑制剂性的药物,被广泛用于治疗高血压、瓣膜性心脏病、先天性心脏病等急性和慢性心功能不全的一种药物。由于地高辛的治疗指数狭窄,用药过量与用药不足时的症状相似,加之其个体差异大,故中毒的发生率高,是临床上最难掌握药物之一。目前解除地高辛毒性的最有效的

非标记抗体免疫酶组织化学实验——ABPAP-法

实验方法原理ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的联合应用,使更多的酶分子结合到抗原-抗体复合物上,目的就是增加方法的敏感性。其原理见图 4-11。作者应用了 30 余种特异性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 复合物以及 ABC 检测系统,结果 ABPAP 法比单一的 PAP 法要敏感 7~8 倍

非标记抗体免疫酶组织化学实验——PAP-法

实验方法原理与酶桥法相似,不同的是酶桥法分四步,而 PAP 法分三步。PAP 法将酶桥法的步骤(3)、步骤(4)合二并为一,用 PAP 复合物替代,故称 PAP 法(图 4-9)。PAP 复合物中的抗 HRP 抗体和第一抗体必须为同一种属动物的 IgG,这样桥抗体才能作为「桥」将 PAP 复合物连接

PCR扩增标记法探针标记

PCR扩增标记法探针标记     PCR扩增标记法的原理与普通的核酸PCR相同。即Taq DNA多聚酶以DNA为模板,在特异引物引导下,在PCR仪中合成cDNA探针。由于在反应体系中加入一定量的标记dNTP,因此扩增的同时又是一个标记过程。cDNA探针PCR扩增法标记原理

人谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)酶联免疫分析

人谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)的含量。实验原理:   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)水平。用纯化的谷胱甘

蛋白质(抗体)和酶(过氧化物酶)的交联实验

基本方案             实验方法原理 实验材料 半胱胺

蛋白质(抗体)和酶(过氧化物酶)的交联实验

实验材料半胱胺试剂、试剂盒过氧化物酶SMCC-溶液仪器、耗材交联葡聚糖 G-25 色谱柱分光光度计实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」将 10 mg 过氧化物酶溶解到 1 ml 0.1 mol/L pH 7.0 放入磷酸二氢钾中,加热至 30℃,并加入 60 ul SMCC 溶液(终浓度 15 m

蛋白质(抗体)和酶(过氧化物酶)的交联实验

实验方法原理 实验材料 半胱胺试剂、试剂盒 过氧化物酶SMCC-溶液仪器、耗材 交联葡聚糖 G-25 色谱柱分光光度计实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」将 10 mg 过氧化物酶溶解到 1 ml 0.1 mol/L pH 7.0 放入磷酸二氢钾中,加热至 30℃,并加入 60 ul SMC

髓过氧化物酶的中酶相关内容介绍

  动物  在动物中过氧化物酶体参与脂肪酸的β氧化(另一细胞器是线粒体),大鼠肝细胞过氧化物酶体在服用降脂灵后,酶浓度升高10倍。此外过氧化物酶体还具有解毒作用,因为过氧化氢酶能利用H2O2将酚、甲醛、甲酸和醇等有害物质氧化,饮入的酒精1/4是在过氧化物酶体中氧化为乙醛。  植物  在植物中过氧化物

过氧化物酶和碱性磷酸酶的相关介绍

  用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。  过氧化物酶  过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量最高,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(H

双酶双底物的双重免疫染色—淋巴瘤轻链κ、λ的双重酶标记

实验步骤1. 石蜡切片常规脱蜡至水(若用含汞固定液固定的组织,则需用内含 0.5% 碘的乙醇溶液脱汞 5 min,乙醇浓度为 70%,经自来水洗后以 2.5% 硫代硫酸钠浸洗 1 min,水洗)。2. 0.3%H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min,自来水洗,蒸馏水洗,入 PBS(0.01mol/L

关于DNA标记的酶切扩增多态性序列介绍

  CAPS技术又称为PCR—RFLP,它实质上是PCR技术与RFLP技术结合的一种方法。CAPS的基本原理是利用己知位点的DNA序列资源设计出一套特异性的PCR引物(19—27bp),然后用这些引物扩增该位点上的某一DNA片段,接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得扩增产物,凝胶电泳分离酶切片段,

良性肝肿瘤的血液酶学及其他肿瘤标记物检查

  肝癌病人多种血清中Y-谷氨酰转肽酶及其同工酶异常凝血酶原αl—抗胰蛋白酶α-L-岩藻糖苷酶酸性同工铁蛋白碱性磷酸酶-核苷酸磷酸二酯酶同工酶V和乳酸脱氢酶同工酶等可高于正常但由于缺乏特异性多作为辅助之一诊断用于与AFPAFP异质体等联合检测应用结合AFP分析有助于提高肝癌的确诊率。

非标记抗体免疫酶组织化学实验——双-PAP-法

实验方法原理在 PAP 法的基础上重复第二抗体和 PAP 复合物,重复的连接抗体和 PAP 复合物可能有以下两种连接方式(图 4-10)。第一种(A)重复连接抗体可与一个 PAP 中的抗 HRP 抗体上未饱和的 Fc 段结合,再与后加的 PAP 复合物相结合;第二种(B)重复连接抗体与特异性一抗分子

免疫斑点试验的原理

  硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。因而,将抗原吸附于纤维素膜后,就可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合,犎;后再加入带有标记物的抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。加入标记

化学发光酶免疫分析的内容是什么?

  化学发光酶免疫分析(CLEIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗体(或抗原),与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物,经洗涤后,加入底物(发光剂),酶催化和分解底物发光。  (一)辣根过氧

化学发光酶免疫分析的内容

化学发光酶免疫分析(CLEIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗体(或抗原),与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后,形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物,经洗涤后,加入底物(发光剂),酶催化和分解底物发光。(一)辣根过氧化物酶标

RNA标记

RNA标记是将标记物(如放射性同位素、荧光素或酶)共价地连接到RNA,通过检测标记物,进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛,在疾病诊断方面也很有前景。 理想的RNA标记方法应符合以下要求: 1.  操作简单,灵敏度高 2.  不影响碱基配对的特异性 3.  不影响RN

RNA标记

RNA labeling (Amersham Pharmacia)For the generation of radiolabelled, single stranded RNA for use as hybridization probes  32P-pCp 3' End-labeling

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如产量等;或多基因控制的质量性状,如抗性等

DNA标记

DNA标记(主要内容如下)  DNA Labeling by Nick Translation  Random Primed Labeling  End-Labeling  Purification of Labeled DNA  Non-isotopic Labeling  OthersDNA L

非同位素标记探针的酶法检测实验——碱性磷酸酶检测法

实验材料探针试剂、试剂盒PBS链亲和素HRPODAB双氧水甘油二氨基联苯胺碱性磷酸酶缓冲液仪器、耗材盖玻片水浴锅实验步骤1.  生物素酰化探针与切片杂交、洗涤、封闭,然后与链亲和素溶液温育(“辣根过氧化物酶法检测”,步骤1~4)。 2.  由0.1% Tween 20/PBS中取出玻片,吸去残液,勿

小鼠卵巢癌标记物CA125酶联免疫分析(ELISA)

小鼠卵巢癌标记物CA125酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中卵巢癌标记物CA125的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠卵巢癌标记物CA125水平。用纯化的小鼠卵巢癌标记物CA125抗体包被

简述碱性磷酸酶标抗体制备技术的标记步骤

  (1)取抗体(2~5mg/mL)1mL,加入AP 5mg溶解。   (2)装入透析袋,用0.01mol/L、Ph7.2PBS4℃透析18h,换液3次。   (3)加入2.5%戊二醛20uL,室温(20℃±)放置2h。4℃0.01mol/L、pH7.2PBS透析过夜,换液3次。   (4)移

SPA-各种免疫检测试剂制备实验——酶标记-A-蛋白纯品

实验方法原理HRP 可以于共价键或非共价键方式黏附在其他的蛋白质分子上,常见的标记方法有戊二醛一步法和二步法,也可以用过碘酸钠氧化法,它们主要为共价键结合方式;另一种为非共价键结合方式,是用 4,4'-二氟-3,3'-二硝基苯基砜(4,4'-difluoro-3,3'

肿瘤标记物检验神经元特异性烯醇化酶(NSE)

神经元特异性烯醇化酶(NSE)介绍: 神经元特异性烯醇化酶(NSE)是神经元和神经内分泌细胞所特有的一种酸性蛋白酶,是小细胞肺癌(SCLC)最敏感最特异的肿瘤标志物。神经元特异性烯醇化酶(NSE)正常值: 放射免疫法:3.0±2.4μg/L。酶联免疫吸附试验:小于12.5μg/L。神经元特异性烯醇化

酶标抗体制备技术戊二醛交联法的标记步骤

  (1)取10mgHRP溶于0.2 mL1.25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PB将25%戊二醛稀释为1.25%),室温(20℃左右)反应结合18h。  (2)用0.15mol/LNaCl平衡过的Sephadex G-50凝胶柱洗脱,除去游离的戊二醛,或用0.01mol/L,pH7.2

关于酶联免疫吸附测定法标记用酶的介绍

  用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。  1、酶联免疫吸附测定法标记用酶—过氧化物酶  过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量最高,从

核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记RNA探针)

            实验方法原理 核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针(核糖探针)杂交,然后未杂交的序列被一种或几种单链特异性的核糖核酸酶裂解。