一种快速简便的进行线粒体膜电位检测的方法

背景简介: 线粒体是细胞新陈代谢的主要细胞器,起着“能量工厂”的作用。线粒体内部通过一系列的氧化反应去氧化丙酮酸和NADH,以产生储存能量的ATP分子。而这一系列反应的驱动力是线粒体膜上电化学质子的梯度差,也叫做膜电位。由于这种质子的梯度差为磷酸化和氧化反应提供了“驱动力”,因此它也被当作一个衡量细胞的整体健康状态的指标,同时也可作为研究环境毒性对细胞新陈代谢影响的一个定量监测的指标。 那么该如何来监测线粒体的膜电位呢? 今天介绍一个简单的方法,即Moxi GO II新一代流式细胞分析仪结合TMRE染料法。 TMRE(四甲基罗丹明高氯酸乙酯)是一种线粒体特异的具有红橙色荧光(540/595nm Ex/Em)的阳离子染料,具有膜通透性,会在带负电荷的线粒体膜中迅速积累。线粒体的膜电位越高,TMRE的积累量越多,荧光值越高,因此可以通过检测TMRE荧光值的强度来定量地评估线粒体膜电位,从而评估细胞的健康状态。 在该应用......阅读全文

抗线粒体2型抗体检测的标本采集

  1.患者准备检查前一天晚上8点后避免进食和剧烈运动。患者采血前最好休息15分钟以上。2.标本类型常规采集患者空腹静脉血液4ml置于无抗凝剂的一次性真空采血管中备用。3.标本运送标本采集后应明确标识并由专人及时送检,并注意运送过程中的生物危害性。4.标本处理(1)标本置于37℃孵箱孵育待血液完全凝

叶绿体和线粒体基因组变异检测获突破

  近日,《公共科学图书馆―综合》发表了中国农业科学院油料作物研究所博士后曾长立与合作导师伍晓明研究建立的能高通量检测叶绿体和线粒体基因组遗传变异的新方法。   据曾长立介绍,叶绿体和线粒体基因组作为植物细胞质基因组,对光合作用、呼吸作用等重要生命过程具有重要意义。   研究叶绿体和线粒体基因组

关于抗线粒体2型抗体检测的简介

  抗线粒体抗体(AMA)是一种无器官特异性也无种属特异性的自身抗体,其靶抗原是线粒体膜上的多种蛋白,成分复杂,现知有M1~M99种亚型。M2是原发性胆汁性肝硬化患者血清中抗线粒体抗体反应的主要成分,本质是线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶和α-酮酸脱氢酶的复合体。

关于细胞质的细胞器—线粒体的基本信息介绍

  线粒体(mitochondrium)线粒体是一些线状、小杆状或颗粒状的结构。在活细胞中可用占纳司绿(Janus green)染成蓝绿色。在电子显微镜下观察,线粒体表面是由双层膜构成的。内膜向内形成一些隔,称为线粒体嵴(cristae)。在线粒体内有丰富的酶系统。线粒体是细胞呼吸的中心,它是生物有

原代细胞培养后过氧化物酶检测

试剂和器材: 1. 过氧化物储存液:30mmol/L过氧化氢储存在T-牛血清白蛋白(Tris-牛血清白蛋白溶液)中;2. 样品缓冲液:2体积的T-牛血清白蛋白溶液+1体积的2%(体积分数)Triton X-100;3. 钛氧硫化物(2.25g/L)溶于1mol/L硫酸中;4. T-牛血清白蛋白:20

离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用实验

实验方法原理当供给植物组织充足的氧气时,植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖为呼吸底物完全氧化时,最后生成CO2,吸收的O2被还原成水,并且每克分子葡萄糖的氧化产生38克分子ATP:其中大部分ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的,这也是细胞内形成可利用能量的主要过程,现在可以肯定三羧酸循环及其与之相偶

离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用实验

实验方法原理 当供给植物组织充足的氧气时,植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖为呼吸底物完全氧化时,最后生成CO2,吸收的O2被还原成水,并且每克分子葡萄糖的氧化产生38克分子ATP:其中大部分ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的,这也是细胞内形成可利用能量的主要过程,现在可以肯定三羧酸循环及其与之相

北京基因组所揭示线粒体基因组氧化损伤修复分子机制

  线粒体是真核生物细胞主要的能量代谢场所,其中呼吸链氧化磷酸化过程伴随有高水平的氧自由基(ROS)的产生。线粒体基因组缺乏组蛋白结合保护,所以容易受到ROS攻击而发生损伤,其突变的累积已证实与多种人类疾病(如神经退行性病变、糖尿病、心血管疾病和癌症等)的发生密切相关。有关核基因组DNA损伤修复分子

离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用实验

实验方法原理当供给植物组织充足的氧气时,植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖为呼吸底物完全氧化时,最后生成CO2,吸收的O2被还原成水,并且每克分子葡萄糖的氧化产生38克分子ATP: 其中大部分ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的,这也是细胞内形成可利用能量的主要过程,现在可以肯定三羧酸循环及其与之相

α7nAChR介导线粒体氧化应激来拮抗Aβ诱导的心房重构

  阿尔茨海默病(AD)和房颤(AF)都是与年龄相关的疾病,经常共存。AD与房颤之间的关系已被流行病学研究证实,一些研究也认为房颤可以显著增加AD的风险,这主要是由于房颤引起的脑低灌流、氧化损伤和炎症失衡所致。  阿尔茨海默病(AD)和心房颤动(AF)的潜在并存作为衰老相关疾病越来越常见。然而,在A

线粒体融合蛋白2决定细胞生死-将作为治疗标靶

  有机体的每个细胞中都有一种传感器,能检测自身“内部”环境是否健康。这种“报警器”存在于内质网(ER)中,能感知细胞所受的压力,引发修复反应或让细胞走向死亡。据物理学家组织网近日报道,西班牙巴塞罗那生物医学研究所(IRB)科学家最近发现,线粒体融合蛋白2(Mfn2)对于正确检测细胞压力水平起着关键

细胞质雄性不育与线粒体基因组

根据研究,线粒体基因组的变异重组与 CMS 的关系最为密切。通过对不同材料的 CMS 系和保持系线粒体 DNA 的 RFLP、RAPD、AFLP 等多态性分析表明,CMS 系和保持系在线粒体基因组结构上具有显著差异。这可能与植物线粒体基因组自身的特点有关。与动物和真菌的线粒体基因组比起来,植物线粒体

Mol-Cell:癌细胞“奴役”线粒体开启罪恶行径

  一篇刊登于国际杂志Molecular Cell上的研究报告中,来自弗吉尼亚大学的科学家通过研究表明,许多癌症,包括几乎所有的胰腺癌都会奴役并且使得细胞的能量工厂—线粒体畸变,从而产生利于肿瘤生长的环境。  研究者表示,在癌细胞存在的情况下,线粒体会被驱动进行不自然地分裂从而失去其正常的形状,并且

简述细胞凋亡与线粒体的结构与功能的关系

  如果线粒体有大量PT孔道形成,细胞ATP浓度很快下降,则在致凋亡的蛋白酶被活化前细胞就坏死了。而如果PT孔道的诱导生成是一种比较缓和与持续的状态,在细胞ATP浓度下降前专一的蛋白酶被激活;而另一方面ΔΨm的耗散产生的超氧阴离子则导致细胞死亡。细胞凋亡是一把双刃剑。一方面是机体发育的正常过程,另一

细胞凋亡过程中线粒体的通透性转变

  在细胞凋亡过程中线粒体跨膜电位的耗散主要是由于线粒体内膜的通透性转变,这是由于生成了动态的由多个蛋白质组成的位于线粒体内膜与外膜接触位点的通透性转变孔道(PT孔道)。PT孔道由线粒体各部分的蛋白质与细胞质中蛋白质联合构成。这包括细胞液蛋白:己糖激酶,线粒体外膜蛋白:外周苯并二嗪(benzodia

Nature:线粒体代谢在T细胞中发挥重要作用

  是什么让健康的细胞发生变化,变得功能失调到引发疾病的程度?在一项新的研究中,来自美国耶鲁大学的研究人员发现除了调节细胞的基因受到破坏之外,细胞不良行为中还有一个涉及代谢的因素。相关研究结果于2019年6月19日在线发表在Nature期刊上,论文标题为“Distinct modes of mito

EMBO-Reports丨线粒体活性与细胞营养状态的关联

  线粒体是细胞的能量工厂。细胞主动感受所处环境中葡萄糖的水平,进而调控线粒体的活性,维持能量代谢的稳态。然而,线粒体活性与细胞营养状态的关联机制并不清楚。  代谢物感受是复旦大学附属肿瘤医院/生物医学研究院雷群英教授领衔的肿瘤代谢研究团队的主攻方向之一。近日,该团队在EMBO Reports杂志在

线粒体分离实验—从组织中分离线粒体

实验材料肝脏试剂、试剂盒MS仪器、耗材匀浆器实验步骤1. 取出肝脏,注意不要弄破胆囊。放进一置于冰上的烧杯中,剪去任何结缔组织。称其质量后放回烧杯中。用锋利的剪刀、手术刀或剃须刀片将之切成 1~2 mmol/L 的薄片,用匀浆缓冲液(1x MS) 冲洗两次以去除大部分的血。转移至匀浆器中。加入足够的

抗线粒体2型抗体检测的注意事项

  1.严重溶血、脂血标本,细菌污染标本可对检测结果造成干扰;不采用装有抗凝剂的采血管。2.标本应及时检测。如有特殊情况,分离血清,并于4℃或-20℃保存,以免影响检测结果。标本中不能混入血细胞、纤维蛋白丝、尘埃和气泡,否则会影响其检测结果。

抗线粒体2型抗体检测的临床意义

  排除病毒性肝炎、酒精、药物和化学物质的肝毒性作用及遗传性肝脏疾病;不明原因的转氨酶升高,胆红素、碱性磷酸酶增高,高度怀疑自身免疫性肝病等。抗线粒体2型抗体是诊断PBC的高度特异和敏感的指标,阳性率可达90%以上。此外,慢性肝脏疾病和进行性系统性硬化症中也可检出抗M2抗体,但以低滴度为主。抗M2抗

石蜡切片如何检测线粒体功能需要多少石蜡切片

线粒体有关的脑组织染色问题(线粒体,脑组织,石蜡切片,认知功能,心理)] 本人心理专业,研究认知功能方面,无奈需要生理的指标,因此对动物认知相关的脑区进行取材,主要想测线粒体功能和形态方面的指标。可是本人对这方面一窍不通,急需大家伙帮忙。我现在把组织分为两组进行处理,一部分-80冷藏了,好像是做分子

一条神经细胞到肠道细胞的线粒体应激反应信号通路

  大脑是身体的指挥中心,支配着人类的生命活动。但其实,人体里还存在着一个“第二大脑”,那就是肠道。图片源自网络  肠道可不仅仅是一个精巧的消化系统,已有的科学研究表明,神经细胞与肠道之间可以相互作用,但它们之间具体如何相互作用,信号如何从一个组织传递到另一个组织,并系统调控机体整体的代谢水平和衰老

细胞凋亡的早期检测

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都

细胞凋亡的早期检测方法介绍

1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测:PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生,可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV,一个钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在膜外侧的PS,再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测(悬浮细胞和贴壁细胞都

分子细胞卓越中心揭示人线粒体tRNA-t6A修饰对线粒体基因表达调控的多重作用

1月16日,中国科学院分子细胞科学卓越创新中心研究员周小龙、王恩多团队在《核酸研究》(Nucleic Acids Research)上,发表了题为Multifaceted roles of t6A biogenesis in efficiency and fidelity of mitochondr

过氧化物酶标记测定法检测细胞凋亡

原理:脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确的定位

线粒体的结构

  线粒体由外至内可划分为线粒体外膜(OMM)、线粒体膜间隙、线粒体内膜(IMM)和线粒体基质四个功能区。处于线粒体外侧的膜彼此平行,都是典型的单位膜。其中,线粒体外膜较光滑,起细胞器界膜的作用;线粒体内膜则向内皱褶形成线粒体嵴,负担更多的生化反应。这两层膜将线粒体分出两个区室,位于两层线粒体膜之间

线粒体分离实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 RSBMS 缓冲液仪器、耗材 Dounce 匀浆器实验步骤 1. 用 11 ml 冰上预冷过的 RSB 重新悬浮细胞,转移到一个 15 ml 的 Dounce 匀浆器中RSB(使组织培养细胞膨胀的低渗缓冲液)10 mmol/L NaCl2.5 mol/L MgCl210

线粒体的分布

  线粒体分布方向与微管一致,通常分布在细胞功能旺盛的区域:如在肾脏细胞中靠近微血管,呈平行或栅状排列;在肠表皮细胞中呈两极分布,集中在顶端和基部;在精子中分布在鞭毛中区。在卵母细胞体外培养中,随着细胞逐渐成熟,线粒体会由在细胞周边分布发展成均匀分布。线粒体在细胞质中能以微管为导轨、由马达蛋白提供动

线粒体的形状

  线粒体一般呈短棒状或圆球状,但因生物种类和生理状态而异,还可呈环状、线状、哑铃状、分杈状、扁盘状或其它形状。成型蛋白(shape-forming protein)介导线粒体以不同方式与周围的细胞骨架接触或在线粒体的两层膜间形成不同的连接可能是线粒体在不同细胞中呈现出不同形态的原因。