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离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用实验

实验方法原理 当供给植物组织充足的氧气时,植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖为呼吸底物完全氧化时,最后生成CO2,吸收的O2被还原成水,并且每克分子葡萄糖的氧化产生38克分子ATP:其中大部分ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的,这也是细胞内形成可利用能量的主要过程,现在可以肯定三羧酸循环及其与之相偶联的氧化磷酸化作用是在线粒体中进行的。在线粒体中进行这些反应的速度可用耗氧量来表示,也可用形成ATP的量来表示。本实验用黑暗中萌发的绿豆子叶或黑暗催芽的马铃薯块茎制备离体的线粒体,以琥珀酸为底物定性测定O2的消耗和产生的ATP,并应用丙二酸抑制呼吸作用观察耗氧量的变化。仪器、耗材 测氧仪紫外分析仪 冷冻高速离心机血色素吸管玻璃管层析用玻璃缸移液管 反应瓶研钵DEAE实验步骤 一、仪器药品1.提取液:0.1 M 磷酸缓冲液pH7.0 含0.4M 蔗糖,0.005M EDTA2.反应液:(1)0.1M磷酸缓冲液pH7......阅读全文

消化系统药理实验中的选择与应用

消化系统药理实验中的选择与应用  (一)消化系统分泌实验  1.胃液分泌实验 胃液收集常选用狗和大白鼠。由狗右侧嘴角插入胃管收集胃液,大白鼠则需剖腹,从幽门端向胃内插入一直径约3mm的塑料管,在紧靠幽门处结扎固定,以收集胃液,可进行胃酸的测定和胃蛋白酶的测定。  2.胰液分泌实验 胰液收集可选用狗、

用蛋白质组学方法对海洋环境中过氧 化物酶体增殖污...

用蛋白质组学方法对海洋环境中过氧 化物酶体增殖污染物进行风险评估实验实验步骤 一、材料1.动物一 年 中 的 问 一 时 间 在 不 同 米 样 点 潮 落 时 采 集 贻 贝 Lmk,35〜45 mm 长)或者是贝壳长度为 5 cm 的 紫 贻 贝 edwfe)。其中一个采样点是有记录的清洁区域,

ATP的生成、储存和利用(一)

  ATP几乎是生物组织细胞能够直接利用的唯一能源,在糖、脂类及蛋白质等物质氧化分解中释放出的能量,相当大的一部分能使ADP磷酸化成为ATP,从而把能量保存在ATP分子内。  ATP为一游离核苷酸,由腺嘌呤、核糖与三分子磷酸构成,磷酸与磷酸间借磷酸酐键相连,当这种高能磷酸化合物水解时(磷酸

细胞组分的分析方法——线粒体的分离与观察

一.实验目的用差速离心法分离动、植物细胞线粒体。二.实验原理  线粒体(mitochondria)是真核细胞特有的,司能量转换的重要细胞器。细胞中的能源物质——脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过藕联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行

呼吸链介绍(四)

  (五)细胞色素体系  1926年Keilin首次使用分光镜观察昆虫飞翔肌振动时,发现有特殊的吸收光谱,因此把细胞内的吸光物质定名为细胞色素。细胞色素是一类含有铁卟啉辅基的色蛋白,属于递电子体。线粒体内膜中有细胞色素b、c1、c、aa3,肝、肾等组织的微粒体中有细胞色素P450。细胞色素

用蛋白质组学方法对海洋环境中过氧 化物酶体增

用蛋白质组学方法对海洋环境中过氧 化物酶体增殖污染物进行风险评估实验             实验步骤

用蛋白质组学方法对海洋环境中过氧化物进行风险评估

实验步骤一、材料1.动物一 年 中 的 问 一 时 间 在 不 同 米 样 点 潮 落 时 采 集 贻 贝 Lmk,35〜45 mm 长)或者是贝壳长度为 5 cm 的 紫 贻 贝 edwfe)。其中一个采样点是有记录的清洁区域,在这里采集到的动物作为对照。2. 富含过氧化物酶体组分的分离在分离过程

组织标本的处理

 取 材 取材是制作切片程序中的首要步骤,取材不当,将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要,不能随意的切取组织来制作组织切片,否则病理检验的结果是不会令人满意的。一、取材工具:取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦,不应使用有钩镊子或血管钳等手术

离体神经突触的代谢性标记实验

试剂、试剂盒 固定剂温育液氯霉素放射自显影乳剂显影剂SDS样本缓冲液实验步骤 一、放射自显影神经元在条件培养基中培养 2d,如第十章所述。1.用一个锋利的微电极从胞体分离神经突起,并用牵引电极将胞体移出培养皿 (见第十章)。2.在培养液中加入终浓度 0.lmmol/L 氯霉素,阻断线粒体蛋白的合成。

离体神经突触的代谢性标记实验

mRNA 和 rRNA 存在于树突和轴突内(VanMinnen1994;Steward1997)。令人疑惑不解的是,位于胞体外区域的 mRNA 是否真的被翻译。下面的方法可以证明神经突起确实可以不依赖胞体而合成蛋白。现代神经科学研究技术作者:U.Windhorst & H

离体神经突触的代谢性标记实验

            试剂、试剂盒 固定剂 温育液 氯霉素 放射自显影乳剂 显影剂 SDS样本缓冲液

右美托咪定的心肌保护作用机制研究进展

  右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)具有镇静、镇痛、抗焦虑和抑制交感神经活性等药理作用,相较于同类型药物可乐定,DEX有更高的选择性和内在活性;由于其对呼吸抑制轻微,并能维持非快速动眼睡眠,且便于唤醒,因此常被用于围术期镇静。  同时,DEX还具有抗快速心律失常、抗缺血再灌注损伤

Ⅰ相代谢稳定性研究原理及实验方法

Ⅰ相代谢稳定性研究原理及实验方法1 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容,它不仅决定了创新药物制剂研发的成败,而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而,药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药

亚细胞构造的离心分离典型实验

一)简介:用简易的差分离心结合各种型式的密度梯度离心可以分离和纯化各种亚细胞器。研究者也可以根据自己的设备情况对实验参数做一定的改动,也可以更多地利用速率-区带密度梯度离心或等密度离心来简化实验过程和提高分离纯度。二)实验:ⅰ)匀浆制备: 鼠肝12克加入0.25M蔗糖与5mM Tris-H

离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用实验

实验方法原理当供给植物组织充足的氧气时,植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖为呼吸底物完全氧化时,最后生成CO2,吸收的O2被还原成水,并且每克分子葡萄糖的氧化产生38克分子ATP: 其中大部分ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的,这也是细胞内形成可利用能量的主要过程,现在可以肯定三羧酸循环及其与之相

离体线粒体的氧化作用和磷酸化作用实验

实验方法原理当供给植物组织充足的氧气时,植物细胞可使底物完全氧化。以葡萄糖为呼吸底物完全氧化时,最后生成CO2,吸收的O2被还原成水,并且每克分子葡萄糖的氧化产生38克分子ATP:其中大部分ATP是通过称为氧化磷酸化作用形成的,这也是细胞内形成可利用能量的主要过程,现在可以肯定三羧酸循环及其与之相偶

ATP的生成、储存和利用

一、ATP的生成方式  体内ATP生成有两种方式  (一)底物水平磷酸化(substrate level phosphorylation) 底物分子中的能量直接以高能键形式转移给ADP生成ATP,这个过程称为底物水平磷酸化,这一磷酸化过程在胞浆和线粒体中进行,包括有:   (二)氧化磷酸化(oxid

植物组织膜性囊泡(RSOV和IOV)制备试剂盒使用说明

主要用途植物组织膜性囊泡(RSOV和IOV)制备试剂是一种旨在通过差速离心技术从植物组织中分离出各种正常外向膜性囊泡(Right-side out;RSOV)和内侧外翻膜性囊泡(In-side out;IOV)组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组

细胞生物学名词解释(一)

1. 细胞(cell)细胞是由膜包围着含有细胞核(或拟核)的原生质所组成, 是生物体的结构和功能的基本单位, 也是生命活动的基本单位。细胞能够通过分裂而增殖,是生物体个体发育和系统发育的基础。细胞或是独立的作为生命单位, 或是多个细胞组成细胞群体或组织、或器官和机体;细胞还能够进行分裂和繁殖

过氧化物酶体的分离和分析实验

从大鼠肝脏中分离过氧化物酶体 从豚鼠小肠黏膜中分离微过氧化物酶体 蛋白质及标志酶的分析             实验

过氧化物酶体的分离和分析实验

从大鼠肝脏中分离过氧化物酶体从豚鼠小肠黏膜中分离微过氧化物酶体蛋白质及标志酶的分析实验材料肝脏                             &nbs

抗原制备

不管是制备单抗还是多抗,抗原的设计与制备都是一个非常重要的问题,设计或者制备得不好的抗原有可能完全不能免疫出抗体来。一个良好的抗原必须具体的条件:(1)分子足够大。对于多肽或蛋白质类的抗原来说,一个抗原决定簇(又叫表位,epitope),通常由6-8个氨基酸残基组成。而平均每5-10kD才有一个表位

低速离心机在分离细胞的应用

离心机是一种结构复杂的高速旋转机械,它是利用离心力,不同物质在离心场中沉淀速度的差异,对混合溶液进行快速分离的专门设备,是一种将装有样品溶液的离心管、瓶或袋通过离心机转子置于离心轴上,利用转头绕轴高速旋转所产生的强大离心力,使样品中不同性质颗粒相互分离的特殊装置。可以实现样品的分析、分离。从转速看,

膜蛋白的纯化实验

实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法,因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近,人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同

膜蛋白的纯化实验(一)

一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法,因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近,人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同

膜蛋白的纯化实验

实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法,因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能

与瑞典科研教育国际合作基金会项目初审结果发布

   2015年度国家自然科学基金委员会与瑞典科研与教育国际合作基金会合作交流项目初审结果的通知  根据国家自然科学基金委员会(NSFC)与瑞典科研与教育国际合作基金会(STINT)的双边合作协议,双方在2015年共同资助中国与瑞典科研人员之间在科学研究的基础上开展的合作交流项目。2015年7月,我

六种染色后光镜观察法检测肝癌细胞凋亡

作者:杨连君,司晓辉,王文亮,王文勇,赵一岭,方正清[摘  要] 目的:探讨简便易行的在光镜下通过形态学观察检测细胞凋亡的方法,并对其进行比较。方法:首先用6%的乙醇作用6 h诱导人肝细胞癌细胞系HCC9204细胞凋亡,然后进行未固定细胞的台盼蓝染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色,

细胞色素c活力测定方法概况

  细胞色素c氧化晦 (Cytochrome e oxidase,COX)亦称细胞色素氧化酶,存在于真核生物细胞的线粒体上,主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量,是线粒体电子传递链末端氧化。COX单体为2-亚铁血红素,23)铜蛋白,相对分子质量为150~200kuKD)COX的每个单体由至少13条不同的

医学实验室常规离心技术功能需求

1.RNA离心制备:培养细胞在低速离心(水平转头,300xg)完成细胞分离、裂解后,加RNA沉淀提取液,于4℃ ,10000~12O00xg(角转头,微量1.5/2.0ml Eppendorf管,或≥15ml、50ml管)分步提取;组织样本需先经匀浆预处理。2 DNA离心制备:水平转头,2 000x