台盼蓝(TrypanBlue)染色法技术要点(一)

台盼蓝 (Trypan Blue) 染色法是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,细胞不被染色;而死细胞的胞膜不完整,通透性增加,可使台盼蓝渗入将细胞染成蓝色。因此,借助台盼蓝染色可以简单、快速地区分活细胞和死细胞。想当年小编还是初入实验室的小白时,以为台盼蓝染色的效果应该是这样的(左),然而现实却是那样的(右) 不是说好的“金标准”吗?染成这样哪里还能准?如果你是Nexcelom的粉丝,从往期文章中应该了解过台盼蓝染色法的局限性,以及当前最受认可的AO/PI荧光染核法的原理和优越性(参考小知识)。 细胞的死亡状态在细胞实验中,我们一般会遇到两种类型的细胞死亡:一种是自然状态下的死亡,即细胞自身的老化或营养耗尽造成的死亡,通常会经历比较长的过程;另一种是诱导的瞬间死亡,比如药物处理、热水浴等,通常会在短时间内发生作用。两种不同状态的细胞死亡......阅读全文

台盼蓝(Trypan-Blue)染色法技术要点(一)

台盼蓝 (Trypan Blue) 染色法是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,细胞不被染色;而死细胞的胞膜不完整,通透性增加,可使台盼蓝渗入将细胞染成蓝色。因此,借助台盼蓝染色可以简单、快速地区分活细胞和死细胞。想当年小编还是初入实验室的

台盼蓝(Trypan-Blue)染色法技术要点(二)

在下面的小视频中,台盼蓝染料被缓缓加入在室温培养了168小时的Jurkat细胞。大家可以清楚地看到部分细胞被染成蓝色后迅速膨胀和破裂,染色随即变浅,细胞失去形态变成“气球“。整个过程仅几秒钟。 有视频为证,这些“气球“状物体就是死细胞的残骸。但当我们在显微镜下计数时,这些“气球”由于颜色太浅通常不会

台盼蓝(Trypan-Blue)染色法技术要点(三)

台盼蓝浓度不同的台盼蓝浓度对细胞染色会有不同影响吗?Nexcelom的科学家们将同一Jurkat细胞样本与0.4%,0.2%,0.1%,0.05%和0.025%的台盼蓝以1:1比例混合,以下是部分浓度染色后的细胞图片: 下面的直方图统计了不同浓度台盼蓝检测到的死细胞(较深着色)和“气球”状细胞的浓度

台盼蓝(trypan-blue)排斥实验

 实验方法原理 台盼蓝染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。实验材料 细胞试剂、试剂盒 台盼蓝生理盐水仪器、耗材 显微镜玻片盖玻片滴管实验步骤 1.  将待染色细胞稀释至所需浓

台盼蓝(trypan-blue)排斥实验

实验方法原理台盼蓝染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。是最常用的检测细胞活率的方法。实验材料细胞试剂、试剂盒台盼蓝生理盐水仪器、耗材显微镜玻片盖玻片滴管实验步骤1.  将待染色细胞稀释至所需浓度。(方法及

台盼蓝染色法

材料:      1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管; 2. 试剂:0.4%台盼蓝染液; 3. 台盼蓝(Trypan blue):0.4g; 4. 生理盐水:100ml; 操作步骤: 1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液; 2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴

台盼蓝染色法

材料:1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管;2. 试剂:0.4%台盼蓝染液;3. 台盼蓝(Trypan blue):0.4g;4. 生理盐水:100ml;操作步骤:1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;3. 再加入适量H

【实验技巧】台盼蓝染色

台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。机理 正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,

中检院CART细胞治疗产品质控文件《考虑要点》深度解析

2018年6月5日,中国食品药品检定研究院发布了《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》(以下简称《考虑要点》)。相信这一文件对所有CAR-T细胞治疗的从业者都具有重要的指导意义。 《考虑要点》对CAR-T细胞研发和制备的以下几个方面进行了深入的探讨:    -原材料和辅料及其

细胞活性检测台盼蓝细胞计数

台盼蓝(Trypan Blue)计数法台盼蓝(BI,货号:03-102-1B)是一种蓝色细胞活性染料,无法通过结构完整的细胞膜进入细胞内部;但细胞死后,丧失细胞膜稳定性,台盼蓝会进入细胞将细胞染成蓝色,因此在细胞实验中,常规地搭配自动细胞计数仪或血球计数板,应用于分辨活细胞和死细胞、及检测细胞膜的完

锥虫蓝的基本性质

中英文名称:台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝、曲利苯蓝分子式:C34H24N6O14S4Na4分子量: 960.82可溶于水(10mg/ml)是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬,故

锥虫蓝染色剂的基本性质

中英文名称:台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝、曲利苯蓝分子式:C34H24N6O14S4Na4分子量: 960.82可溶于水(10mg/ml)是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬,故

六种染色后光镜观察法检测肝癌细胞凋亡

作者:杨连君,司晓辉,王文亮,王文勇,赵一岭,方正清[摘  要] 目的:探讨简便易行的在光镜下通过形态学观察检测细胞凋亡的方法,并对其进行比较。方法:首先用6%的乙醇作用6 h诱导人肝细胞癌细胞系HCC9204细胞凋亡,然后进行未固定细胞的台盼蓝染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色,细胞固定后

关于黄斑裂孔的-手术方法及进展介绍

  传统手术技术为标准三切口经睫状体平坦部玻璃体切割术, 行人工玻璃体后脱离,次全  切除玻璃体,剥离黄斑前膜或黄斑区视网膜内界膜,或辅以生物制剂封闭黄斑孔。用20%~25%的SF6气体行膨胀气体/空气交换。术毕, 患者俯卧位约14天后, 玻璃体腔内气体吸收, 恢复正常体位。  (1) 微切口玻璃体

细胞计数及活力测定实验——台盼兰染色法

实验方法原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损

活性染料-台盼蓝染色的原理和步骤

  在高中生物中,用血细胞计数板对酵母菌的计数不能专门计数活细胞,但也有染色试剂专门染色活细胞的,结合计数就可以知道活细胞的数目,如台盼蓝就是一种细胞活性染料。   台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,检测细胞是否存活。分子式:C34H24N6O14S4Na4。  一、台盼蓝染色的原理 

多种细胞快速检测的方法(二)

荧光染料增殖试验 CFSE检测法CFSE是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有细胞膜通透性,能够自由进入细胞;当CFSE扩散穿过细胞膜,会与细胞内源酯酶产生水解反应而被激发,发出绿色荧光,这些带荧光的CFSE会进一步与细胞骨架蛋白结合,形成稳定的胞内荧光蛋白。每当细胞进行分裂增殖,胞内荧光蛋白会被平均分

细胞凋亡的形态:生化性质实验——台盼蓝染色

实验方法原理实验材料细胞试剂、试剂盒染料混合物:0.01%台盼蓝l00μg ml吖啶橙或 100μg ml吖啶橙+100 μg ml溴化乙锭所有试剂都在PBS中制备约5×105〜5×106细胞 ml的细胞悬浮液在完全的RMPI 1640培养基仪器、耗材12 mm×75 mm的玻璃试管显微镜载玻片和2

细胞计数的多种方法

血细胞计数器(也被拼写血球计数仪)是一种蚀刻玻璃室提出双方将举行石英盖玻片完全室地板0.1毫米以上。为9毫米2的总表面积的计数室中进行蚀刻。 图1、 血细胞计数器的尺寸。 浓度的计算是根据上下方的盖玻片的体积。一个大广场(参见图2中的W)拥有量为0.0001毫升(长x宽x高,也就是说,0.1厘米×0

细胞生长检测1:[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数

[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数1.用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期(培养3天)的CTLL-2细胞两次,每次250×g离心10分钟,洗去培养液中残存的IL-2。2.用台盼蓝(1% Trypan blue)染色法计数细胞并决定细胞的活力,用10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×

[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数

[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数:1、用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期(培养3天)的CTLL-2细胞两次,每次250×g离心10分钟,洗去培养液中残存的IL-2。2、用台盼蓝(1% Trypan blue)染色法计数细胞并决定细胞的活力,用10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1

细胞染色方法归纳

Hoechst染色hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合 (主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种  hoechsts33258,hoechs

细胞培养细胞计数时为什么要用台盼蓝染色?

参加台盼蓝后,活细胞不上色,台盼蓝上色的细胞呈深蓝色,是不健康或已逝世的细胞,不能计数。

如何解决台盼蓝染色PBMCs进行细胞计数的问题?

“为什么很难用台盼蓝染色剂来计数PBMC!有大的,小的,成团的……;你能告诉我怎么在未染色的细胞中挑出有核细胞?”小编经常被问到各种各样关于如何计数PBMC的问题,今天就借此机会跟大家分享一下。 首先,了解下人类PBMCs的组成      外周血单核细胞(Peripheral blood monoc

细胞计数及活力测定

一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。计算细胞数目可用血球计数盘或是 Coulter counter 粒子计数器自动计数。 血球计数盘一般有二个 chambers,每个 chamber 中细刻

细胞计数及活力测定方法1

一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。 血球计数盘一般有二个chambers,每个chamber 中细刻9 个

关于脂肪干细胞油红-O-和台盼蓝复合染色介绍

  用 0.5%油红O,对成脂诱导后的各组样本进行染色。具体操作方法是:先用D-hanks将样本细胞冲洗充分,然后加入油红稀释染色10~15 min,(油红O 稀释液配制方法:0.5%饱和油红O 原液按3:2(油红O:蒸馏水)加入蒸馏水,然后过滤,待用),接下来用75%的乙醇溶液将样本分化至间质清晰

结缔组织观察实验(一)

实验材料 大白鼠小白鼠试剂、试剂盒 台盼蓝生理盐水溶液甘油瑞特染液仪器、耗材 解剖器一套注射器及针头滴管载玻片盖玻片显微镜实验步骤 一、材料和用具大白鼠或小白鼠。皮下结缔组织经活体染色及弹性纤维染色和H-E染色的平铺片、气管切片(H-E染色)、小肠切片(H-E染色)、小白鼠肠系膜平铺片(苏丹Ⅲ染色)

细胞复苏注意事项

1、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例,配置相应的完全培养基,确保细胞培养条件与说明书一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。每株细胞2支冻存管复苏时建议先只复苏一支,若首次复苏出现问题请及时与我们取得联系。2、取出冻存管,浸入37℃温水

目前细胞计数的常用方法

Countstar自动细胞计数仪技术特点:1.宽泛的样本检测范围:测量浓度范围:1×104—3×107/ml;直径范围:5-180µm,可检测各种传代细胞及原代细胞,干细胞,藻类,浮游生物,酵母细胞,白细胞等。2.经济节约的配套耗材成本:每个样品测量盘可检测5个样品,提供实验结果的平行性及可重复性检