蛋白质紫外分光测定实验
由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值(A280)与其含量呈正比关系,可用作定量测定。 由于核酸在280波长处也有光吸收,对蛋白质的测定有干扰作用,但核酸的最大吸收峰在260nm处,如同时测定260nm的光吸收,通过计算可能消除其对蛋白质测定的影响,因此溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm之光密度,方可通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。 利用紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便、不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。因此,在蛋白质和酶的生化制备中(特别是在柱色谱分离中)广泛应用。此法的缺点是(1)对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质,有一定的误差,(2)若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外线的物质,会出现较大的干扰。 不同蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的......阅读全文
蛋白质含量测定实验
Bradford法 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质纯度测定实验
实验步骤在评价样品纯度之前,首先需要鉴定待测杂质的类型,如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质,进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征)。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是,上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
蛋白质纯度测定实验
蛋白质纯度测定实验 实验步骤 在评价样品纯度之前,首先需要鉴定待测杂质的类型,如核酸、碳水化合物、脂
蛋白质含量测定实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 牛血清NaCl考马斯亮蓝仪器、耗材 分光光度计离心机实验步骤 分别在两组微量离心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白,以 0.15 mmol/l NaCl补足至100 μl,同时以两管100 μl 的0.15 mmol/l NaCl作空白对照。2. 每管各加
蛋白质含量测定实验
folin—酚试剂法 考马斯亮蓝法 实验方法原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(
核酸纯度、浓度与分子量测定实验——紫外分光光度法
核酸纯度、浓度与分子量测定可应用于:(1)分析核酸;(2)为进一步实验提供样品。实验方法原理溴化乙锭是一种荧光染料,在凝胶电泳中,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间,在紫外线激发下发出荧光,其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260 nm,在此波长下,吸光度1 A相当于一定浓度的核酸,可以
紫外分光光度法测定水中总酚的含量实验设计
紫外分光光度法测定水中总酚的含量 1、实验目的 1.1 掌握紫外分光光度法测定酚的原理和方法。1.2掌握应用紫外分光光度计进行定量分析的方法和基本操作。2、实验原理 苯酚是工业废水中的一种有害物质,如果流入江河,会使水质受到污染,因此在检测饮用水的卫
蛋白质与核酸的紫外交联实验
实验方法原理 含有胸苷卤代物如溴脱氧尿苷(BrdU)的DNA比非取代的DNA对紫外线诱导的 交联更为敏感。本方案中的紫外交联效率是0.1%〜10%,而且在单一复合物中出现1 次以上交联事件的情况十分罕见。实验材料 含有所研究结合位点的M13单链载体试剂、试剂盒 17 bp 的 M13 通用引物1×和
蛋白质与核酸的紫外交联实验
实验方法原理含有胸苷卤代物如溴脱氧尿苷(BrdU)的DNA比非取代的DNA对紫外线诱导的 交联更为敏感。本方案中的紫外交联效率是0.1%〜10%,而且在单一复合物中出现1 次以上交联事件的情况十分罕见。实验材料含有所研究结合位点的M13单链载体试剂、试剂盒17 bp 的 M13 通用引物1×和10×
蛋白质与核酸的紫外交联实验
用溴脱氧尿苷(BrdU)取代的探针进行紫外交联 实验方法原理 含有胸苷卤代物如溴脱氧尿苷(BrdU)的DNA比非取代的DNA对紫外线诱导的 交联更为敏感。本方
紫外分光和红外分光的区别
可能有五个原因:灵敏度选择太低。汽化室进样口密封垫漏气。汽化室与色谱柱或柱后至检测器之间漏气。注射针使用过久本身漏气,或汽化室温度太低。输入电缆线断路或短路,或极化电压没加上。气相色谱仪,指将分析样品在进样口中气化后通过对欲检测混合物中组分有不同保留性能的色谱柱,得到各组分的检测信号的仪器。气相色谱
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪 实验步骤 材料与设备 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液) Bradford 试剂(Coomassi
脑脊液蛋白质总量测定实验
实验方法原理 饱和硫酸铵可以沉淀球Pr.正常脑脊液中球Pr含量很低.故现阳性结果,若球Pr增多,则Ross-jones试管阳性,除去球Pt后再以乙酸沸法则ALB(白Pr).实验材料 脑脊液试剂、试剂盒 饱和硫酸铵溶液乙酸实验步骤 一、实验试剂:l、饱和硫酸铵溶液,硫酸铵85g加蒸馏水至100ml即得
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤 材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液)Bradford 试剂(CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)
蛋白质含量的测定实验
实验方法原理 FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极不稳定, 易被酚类化合物还原成蓝色(蛋白质中的酚基将磷钼酸-磷钨酸还原成蓝色复合物)。在一定条件下, 蓝色强度与蛋白质的量成正比, 范围约在25~250 μg/ ml 蛋白质浓
脑脊液蛋白质总量测定实验
实验方法原理饱和硫酸铵可以沉淀球Pr.正常脑脊液中球Pr含量很低.故现阳性结果,若球Pr增多,则Ross-jones试管阳性,除去球Pt后再以乙酸沸法则ALB(白Pr).实验材料脑脊液试剂、试剂盒饱和硫酸铵溶液乙酸实验步骤一、实验试剂:l、饱和硫酸铵溶液,硫酸铵85g加蒸馏水至100ml即得.2、0
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材
蛋白质纯度测定实验(一)
在评价样品纯度之前,首先需要鉴定待测杂质的类型,如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质,进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征)。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是,上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
蛋白质含量的测定实验
FOLIN酚法 考马斯亮蓝法 实验方法原理 FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极
蛋白质纯度测定实验(二)
方法制样的方法根据所选用电泳方法的性质而定。读者可参考本卷其他章节中有关非变性凝胶电泳和等电聚焦电泳的讨论。最常用的 SDS 凝胶电泳是蛋白质纯度检测的「第一线」(front-line) 方法。由于通常纯度评价是非定量的,因此不需要关心诸如极端大小分子的非线性迁移、蛋白质修饰造成的迁移异常以
紫外分光光度计杂散光如何测定
将参比液注入配对石英石吸收池,分别放置在参比池座和试样池座内。再测定波段扫描基线并使之平滑。将减光片插入试样光路的滤光片槽内,其读数即为减光片的衰减值K.然后将减光片插入参比光路的滤光片座内,将石英吸收池中的蒸馏水依次换成上述截止滤光液,插入试样试样池座中,在相应的波段内扫描、打印;在记录纸的作标上
如何用紫外分光光度计测定VC
首先测定标准曲线,然后测定被测物质的吸光度,对比标准曲线,得到VC的浓度
紫外分光光度法测定水中的油类
一、实验目的 加深对环境中油类污染的认识,掌握油类的分析方法和技术,学会使用紫外分光光度计。 二、实验原理 水中的油类来自较高级生物或浮游生物的分解,也有来自工业废水和生活污水的污染。漂浮于水体表面的油,影响空气-水体界面中氧的交换。分散于水中的油,部分吸附于悬浮微粒上,或
紫外分光光度法粗多糖的测定
酸-苯酚比色法测食品中的粗多糖的含量而且分别用葡萄糖做标准品和用葡聚糖做标准品。结果表明前者测的结果稍偏高,大约高于4.8﹪。此方法简便快捷,正确度高,重现性好,可适用于各种粗多糖的测定。 由十个以上单糖通过糖苷键连接而成的碳水化合物称为“多糖”。它一般都是自然高分子化合物。多糖包括活性多糖和膳
紫外分光光度法测定水中总氮
微波消解- 紫外分光光度法测定水中总氮取一定量水样于聚四氟乙烯密封消解罐中, 加水至25 mL, 摇匀。分别取0.、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、12.0、13.0、15.0 mL氮标准使用液于聚四氟乙烯密封消解罐中, 加水至25 mL, 摇匀。依
紫外可见分光光度法测定苯酚
一、实验目的1、了解紫外可见分光光度计的结构、性能及使用方法2、熟悉定性、定量测定的方法二、实验原理紫外分光光度法(Ultraviolet Spectrophtometry),又称紫外吸收光谱法( Ultraviolet Moleculor Absorption Spectrophtometry),
石油类的测定紫外分光光度法
石油类的测定紫外分光光度法如下:1、适用范围:本标准规定了测定水中石油类的紫外分光光度法。本标准适用于地表水、地下水和海水中石油类的测定。当取样体积为500ml,萃取液体积为25ml,使用2cm石英比色皿时,方法检出限为0.01mg/L,测定下限为0.04mg/L。2、规范性引用文件,本标准内容引用
影响紫外分光光度法测定的因素
1.仪器是否工作正常(光源灯老化,电压不稳定,集成电路板、显示器有毛病,波长调节器有毛病等等) 2.标准溶液浓度是否准确 3.所用方法是否合理(你选用的标准方法是否符合你要测定的对象——被测定浓度范围,干扰情况,赋存状态等等) 4.所用试剂是否符合要求(纯度、干扰情况) 5.所用量器(天
苯胺紫外分光光度法测定光气测定方法原理
含光气(COCl2)的气体先经装有硫代硫酸钠和无水碳酸钠的双联玻璃球,以除去氯、二氧化氮、氨等干扰气,而后被苯胺溶液吸收,生成1,3-二苯基脲,用溶剂在酸性条件下萃取,在波长257nm处测定吸光度,其值与光气含量成正比。 在无组织排放样品分析中,当采样体积为60L时,光气的检出限为0.02mg/m3
可见分光、紫外分光和紫外可见分光光度计的区别
可见分光光度计和紫外分光光度计的区别是测定波长范围不同,一般可见光波长范围是400~1000nm,紫外光波长范围是200~400nm。所谓紫外可见分光光度计也就是说这个仪器可以通过更换光源形成紫外和可见的光区,能够测定吸收峰在紫外和可见光部分的化合物。一般测定波长在200~1000nm。