什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA复合物或RNA复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和......阅读全文

凝胶迁移或电泳迁移率实验

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。凝胶迁移或电泳迁移率实验凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobili

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-)

实验概要凝胶迁移或电泳迁移率实验是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。通常将纯化的蛋白或细胞粗提液和标记的DNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物比非结合的探针移动得慢。标记的探针依研究的结合蛋白的不同,

什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性

凝胶迁移实验(EMSA)——凝胶迁移

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

凝胶迁移实验(EMSA)

实验方法原理 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列

凝胶迁移实验(EMSA)

            实验方法原理 一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的D

电泳迁移率

带电粒子在单位时间内移动的距离称为电泳迁移率。溶液中带电粒子在电场 (E)中向着与它相异电荷的电极移动,它的移动速度(V)是电场(E)和粒子的有效迁移率(m)的乘积,即:V=mE离子的有效迁移率是一个由许多因素(包括离子半径、溶剂化作用、介电常数、溶剂粘度、离子形状和电荷、pH、解离度和温度等)决定

凝胶迁移实验(EMSA)实验方法

凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验(EMSA,electrophoretic mobility shift assay),是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、实验原理 EMSA主要基于蛋白

由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验

            试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶 核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物 σ32 非变性胶样品缓冲液 储存缓冲液 考马斯亮蓝(CBB) 染色

由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验

试剂、试剂盒 核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物σ32 非变性胶样品缓冲液储存缓冲液考马斯亮蓝(CBB) 染色液脱色液仪器、耗材 非变性凝胶电泳装置实验步骤 材料与设备核心 RNA 聚合酶核心 RNA 聚合酶-σ32 复合物,由免疫亲和柱洗脱所得σ32,由 POROS 50S

由非变性凝胶电泳迁移率法评估均一性实验

当蛋白质在保持其天然构型不变的条件下进行电泳时,其迁移率可以作为它的均一性的一种量度。由于迁移率是电荷和形状两者的函数,因此可以预期,能将单体、二聚体等形式彼此分开。也有可能因异构体形状的差异而用非变性凝胶电泳把蛋白质的构象异构体(conformational isomer) 分开。本实验来源于蛋白

影响凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素

影响凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素有样品的物理性质、支持物介质、电场强度和缓冲液等。一、样品的物理性质:1、分子大小:线状双链DNA分子长度(碱基对数目bp)的常用对数与迁移距离成反比,以此来测定DNA片段(线性双链)的分子量准确且方便。当DNA分子大小超过20kb时,普通琼脂糖凝胶很难将它们分开,

凝胶迁移实验(EMSA)之一

实验操作方法1.探针的标记:(1) 如下设置探针标记的反应体系:待标记探针 (1.75pmol/微升)                        2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X)             1微升Nuclease-Free Water

电泳迁移率的概念

带电粒子在单位时间内移动的距离称为电泳迁移率。溶液中带电粒子在电场 (E)中向着与它相异电荷的电极移动,它的移动速度(V)是电场(E)和粒子的有效迁移率(m)的乘积,即:V=mE离子的有效迁移率是一个由许多因素(包括离子半径、溶剂化作用、介电常数、溶剂粘度、离子形状和电荷、pH、解离度和温度等)决定

凝胶迁移实验(EMSA)之三:实验步骤

实验材料:DNA样品试剂、试剂盒:    [γ-32P]ATP、T4多聚核苷酸激酶、Nuclease-Free Water、T4多聚核苷酸激酶缓冲液、醋酸铵、TE、无水乙醇、TBE buffer、重蒸水、甲叉双、丙烯酰胺、丙烯酰胺、甘油、过硫酸铵、TEMED(四甲基乙二胺)、EMSA Gel

电泳迁移率变动分析的实验方法

通常用32P标记DNA分子,而不标记蛋白质。电泳结束后,用放射自显影技术显现具放射性标记的DNA条带位置。如果细胞蛋白提取物中不存在与同放射性标记的DNA探针结合的蛋白质,那么所有放射性标记都将出现在凝胶的底部;反之,将会形成DNA-蛋白质复合物,由于受到凝胶阻滞的缘故,放射性标记的DNA条带就会出

电泳迁移率变动分析的实验方法

通常用32P标记DNA分子,而不标记蛋白质。电泳结束后,用放射自显影技术显现具放射性标记的DNA条带位置。如果细胞蛋白提取物中不存在与同放射性标记的DNA探针结合的蛋白质,那么所有放射性标记都将出现在凝胶的底部;反之,将会形成DNA-蛋白质复合物,由于受到凝胶阻滞的缘故,放射性标记的DNA条带就会出

凝胶迁移率变动分析实验

凝胶迁移率变动分析实验             试剂、试剂盒 丙烯酰胺 双丙烯酰胺 过硫酸铵

凝胶迁移率变动分析实验

试剂、试剂盒 丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED(NNN'N' 四甲基乙二胺)甘油 (50%;v v)竞争 DNA迁移率变动分析探针TBE凝胶迁移率变动分析缓冲液 TE实验步骤 材料丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵(10%;w/v)TEMED(N,N,N',N', 四甲基

凝胶迁移率变动分析实验

在本实验中, 我们用 DNA 亲和层析所用的同一互补寡核苷酸 (具体序列见实验 3 的引言的末尾) 来进行 AP-1 的凝胶迁移率变动分析。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。试剂、试剂盒丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED(NNN'N'四甲基乙二胺)甘油 (50%;

电泳迁移率变动分析

中文名电泳迁移率变动分析外文名electrophoretic mobility shift assay定义用放射性同位素标记待检测的片段(即探针DNA),然后与细胞提取物共温育,形成DNA-蛋白复合物,将该复合物加到非变性聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳。

影响电泳迁移率的因素

由电泳迁移率的公式可以看出,影响电泳分离的因素很多,下面简单讨论一些主要的影响因素:1. 待分离生物大分子的性质待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说,分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。2. 缓冲液的性质缓冲液的 pH 值会影响待分

影响电泳迁移率的因素

  影响电泳迁移率的外界因素:①电场强度 ②溶液的pH值 ③溶液的离子强度 ④电渗现象  影响电泳迁移率的内在因素:①质点所带净电荷的量 ②质点的大小和形状

凝胶迁移实验系列二实验操作方法

1.探针的标记:(1) 如下设置探针标记的反应体系:待标记探针 (1.75pmol/微升)                        2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X)       1微升Nuclease-Free Water            

电泳迁移率变动分析的实验方法介绍

  通常用32P标记DNA分子,而不标记蛋白质。电泳结束后,用放射自显影技术显现具放射性标记的DNA条带位置。如果细胞蛋白提取物中不存在与同放射性标记的DNA探针结合的蛋白质,那么所有放射性标记都将出现在凝胶的底部;反之,将会形成DNA-蛋白质复合物,由于受到凝胶阻滞的缘故,放射性标记的DNA条带就

凝胶迁移实验系统提供了什么试剂?

 Promega公司提供一种凝胶迁移实验系统检测DNA结合蛋白,系统可作为这类实验的一种阳性对照。系统包括目的寡核苷酸,对照DNA结合蛋白,结合缓冲液,用于寡核苷酸探针末端标记所需的试剂。Core 系统包括含重组AP2蛋白(AP2抽提液)的大肠杆菌抽提液和AP2的同源寡核苷酸。AP2抽提液是

凝胶迁移滞后实验基本原理

凝胶迁移滞后实验(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)是近年发展起来的研究核酸与蛋白质相互作用简单、快速、敏感的方法。目前已经成为转录因子研究的经典方法。其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的

EMSA凝胶迁移-(Electrophoretic-mobility-shift-assay)实验

实验原理凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,

影响琼脂糖凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素

影响琼脂糖凝胶电泳色谱仪电泳迁移率的因素有DNA分子大小、DNA构象、凝胶浓度、琼脂糖种类、电泳缓冲液、嵌入染料的存在和使用电压等。一、DNA分子大小:DNA分子大小迁移速度与logN成反比(N为碱基对数目)。分子越大,摩擦力越大,同时大分子通过凝胶孔的效率低于较小的分子,所以大分子的迁移速度慢。