“一锅法”,Cy5合成策略
近红外菁染料Cy5因光谱峰宽小、光稳定性强、背景吸收低等优点在分子示踪、生物成像等领域应用广泛。然而,包括Cy5在内的绝大多数荧光染料分子,主要被用作外源性有机分子,在活细胞内的原位合成受到合成条件(如空气、水、pH、温度、浓度、催化剂)和生物安全性等因素的极大限制。国内外近年来有机光化学研究的迅速发展为解决细胞环境中外源性染料分子合成的问题提供了重要机会。 近日,南京大学的冯福德教授和中国科学院化学研究所的王树研究员合作,发现染料中间体1-(3-氨丙基) -2,3,3-三甲基-3-氢-吲哚(TMI)具有特殊的光敏性质,能够在加热和白光诱导下转化为Cy5染料,提出了“一锅法”的Cy5合成策略,并阐释了Cy5共轭骨架与TMI侧基之间的结构关联、氢原子转移和迈克尔加成反应等参与的化学机制。 非常有意义的是,Cy5的光控合成在活细胞胞内环境中也可以实现。光照时间依赖性以及在特定细胞器(溶酶体)的高定位性,表明Cy5原位合成......阅读全文
“一锅法”,Cy5合成策略
近红外菁染料Cy5因光谱峰宽小、光稳定性强、背景吸收低等优点在分子示踪、生物成像等领域应用广泛。然而,包括Cy5在内的绝大多数荧光染料分子,主要被用作外源性有机分子,在活细胞内的原位合成受到合成条件(如空气、水、pH、温度、浓度、催化剂)和生物安全性等因素的极大限制。国内外近年来有机光化学研究的
耦联到抗体上的荧光团探针
荧光团探针的选择依赖于下面的重要标准: A. 仪器。比如,光源,滤片,检测系统。B. 多标记中对探针色彩区分程度的要求。例如,若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的区别明显。C. 要求的灵敏度。比如,Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针
高内涵成像技术在单抗结合检测中的应用(二)
多波长分析更准确的测定细胞响应 除了荧光图像外,ImageXpress Micro系统还可以捕捉到透射光图像(transmitted light, TL)从而更准确的鉴别细胞。在这个基于细胞的检测例子中,系统同时捕捉了透射光和荧光图像,并用MetaXpress 软件的用户自定义模块对细胞进
CY5通道和ROX通道一样吗
CY5通道和ROX通道不一样。CY5通道:CY5通道是实现多重PCR在TaqMan荧光探针连接相应的激发荧光基团CY5。ROX通道:ROX通道实现多重PCR在TaqMan荧光探针连接相应的激发荧光基团ROX。
生物学应用广泛的花青染料分类与选型
荧光素及其衍生物“花青”这个名词是来自于聚次甲基组合成染料家族中的,它是一个非系统名称,cyanin一词源自英语单词“ cyan”,通常表示蓝绿色。 花青染料的摩尔消光系数(约150,000至300,000 M-1cm-1)非常大,结合适度的量子产率,使它可以产生极其明亮的荧光信号。 事实证明,花青
阿霉素的荧光能直接用于活体成像吗
阿霉素的荧光能直接用于活体成像活体荧光成像一般有三种标记方法:荧光蛋白标记、荧光染料标记以及量子点标记。荧光蛋白适用于标记肿瘤细胞、病毒、基因等。通常使用GFP/EGFP/RFP等。荧光染料常用Cy3,Cy5以及Cy7。可以标记抗体、多肽、小分子药物。量子点标记是一种新的标记方法,
小动物活体成像原理
体动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶基因(Luciferase)标记细胞或 DNA,而荧光技术则采用绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等荧光报告基因和 FITC、Cy5、Cy7 等荧光素及量子点 (quantumdot,QD) 进行标记。小动物活体成像技术是采用高灵敏度制冷
小动物活体成像原理
体动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶基因(Luciferase)标记细胞或 DNA,而荧光技术则采用绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等荧光报告基因和 FITC、Cy5、Cy7 等荧光素及量子点 (quantumdot,QD) 进行标记。小动物活体成像技术是采用高灵敏度制冷
细胞免疫荧光步骤
实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton BSADAPI染液DABCOTris甘油仪器、耗材 玻片实验步骤 细胞爬片免疫荧光实验步骤第一天:1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次
细胞免疫荧光染色
实验概要细胞免疫荧光染色实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、1
什么是活细胞荧光
没有听说过这个术语,不过应该很好猜测,就是用荧光技术标记活细胞,可以是只有活细胞才能吸收的荧光物质,该物质被活细胞吸收后,该活细胞就发出荧光可用于观测了。而死细胞不吸收就观测不到荧光,可以区分细胞死活。
细胞免疫荧光步骤
细胞免疫荧光可应用于:可以观察组织或细胞内抗原物质的定位,以及一些特殊信号分子蛋白的出核/入核的定位变化。实验方法原理在进行细胞免疫荧光过程中,需要用到细胞爬片,通过将爬片浸在细胞培养基内,细胞在爬片上生长,进而进行细胞的免疫荧光。实验材料细胞样品试剂、试剂盒多聚甲醛70%甲醇丙酮PBSTriton
如何选择最亮的荧光染料荧光染料亮度排行汇总(一)
荧光染料是细胞生物学等科学研究中不可或缺的重要工具,荧光滤色块是荧光显微镜中至关重要的一个部件。我们大家在操作荧光染料亮度的时候,我们可以按照上面的比较方法去比较荧光染料的亮度,那么一般荧光染料亮度怎么进行比较? 荧光染料的亮度可以用来比较不同荧光染料的荧光标记效果,通过
全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用1
用特定标签标记抗体已成为生物科学和医学研究中的重要且常规程序,标签的范围从视觉标记(例如荧光染料)到半抗原分子(例如生物素),标签的作用有增强免疫复合物和蛋白质-蛋白质相互作用的可见性,以及用于蛋白质的分离和纯化。 在确定选择哪种标签类型时,应侧重于抗体的下游应用。荧光标
一体化细胞免疫荧光技术介绍(二)
一体化免疫荧光技术应用举例超过800篇参考文献证明了使用ibidi产品进行免疫荧光检测的优势。1. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) cultured under flow conditions in μ-Slide I 0.4 Luer蓝
如何选择最亮的荧光染料荧光染料亮度排行汇总(二)
荧光标记染料 图4.将 HeLa细胞与(Tubulin +)或不与(Tubulin-)小鼠抗微管蛋白一起孵育,然后与iFluor™488山羊抗小鼠IgG缀合物(绿色,左)或AlexaFluor®488山羊抗小鼠IgG缀合物(绿色,右)。细胞核用Hoechst 33
免疫组织化学技术的应用介绍
免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一,是由Coons和他的同事(1941)建立,免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域;与激光技术、电子计算机,扫描电视和双光子显微镜等技
文献解读|分层组装的DNA线框纳米结构,可用于...(二)
这种DNA八面体的可寻址性和可预见性允许地装载不同数量的单链CA4-FS。作为概念验证,作者构建了半负载CA4-八面体(hCA4-Oct)和全负载CA4-Oct,并测定了负载效率(图1c)。为了进一步验证hCA4-Oct和CA4-Oct的可编程组装,作者接下来分别用Cy3标记的Oct-12H、Cy3
新一代蛋白研究工具――抗体芯片
蛋白组学研究是即基因组学研究后的生命科学发展的一个大方向之一。蛋白质的结构和功能最终直接影响着生命活动的变化,基因转录水平的研究只能在一定程度上反映基因表达产物的变化,而真正发挥功能的蛋白要经过转录后加工、翻译调控以及翻译后加工等许多步骤和调控才能形成,因而对蛋白质的直接研究才能真实的解释各种生命现
细胞免疫荧光染色实验
实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec
细胞免疫荧光染色实验
实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec
细胞免疫荧光实验步骤
细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导,细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合,原理就是利用抗原-抗体反应之后,采用荧光标记,标记完成后,显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少,从而做出一个定位研究,也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导,细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速
免疫荧光和细胞分离
实验步骤基 本 方 案 1 单细胞表面抗原的免疫荧光标记材 料基 本 方 案 2 固定和渗透单细胞的细胞内抗原的免疫荧光标记材 料辅 助 方 案 1 用 异 硫 氰 酸 荧 光 黄(FITC) 偶联抗体材 料6 . 计算荧光素/蛋 白 质 比(F/P ):F/P = F I T C 摩尔数/蛋白质摩
免疫荧光细胞化学技术
免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一,是由Coons等(1950)建立,经过近43年的发展,免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与亲合化学技术如葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域;与激
细胞荧光化学实验
荧光法较一般光学方法具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点,因此近年来荧光组织化学特别是免疫荧光技术有了很大的发展。利用荧光技术可研究细胞内化学成分的分布与定位,研究细胞与组织中物质的吸收与转运,进行病理鉴别以及细胞免疫等方面的研究。 当用一种波长的光(如紫外光)照射某种物质时,这种物质会在极短的时
细胞免疫荧光操作步骤
1.细胞爬片;2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮);3.PBS漂洗5min;4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理);5.PBS漂洗2次,每次5min;6.1%BSA封闭30min;7.加入1%BSA稀释的一抗,于37℃杂交2h;8.
多色流式实验荧光素的选择(二)
3. 多色流式细胞检测中荧光素选择的原则1) 根据机器配置选择荧光素了解你使用的流式细胞仪的性能,大多数流式细胞仪有两个或者多个激光器,有五种波长可供选择:紫外(355 nm)、紫色(405 nm)、蓝色(488 nm)、黄色(561 nm)和红色(640 nm)。除了激光器,具体的激光片和检测
免疫组织化学技术的发展简史
免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一,是由Coons和他的同事(1941)建立,免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域;与激光技术、电子计算机,扫描电视和双光子显微镜等技
免疫组织化学技术的发展简史和应用特点
免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一,是由Coons和他的同事(1941)建立,免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域;与激光技术、电子计算机,扫描电视和双光子显微镜等技