恒温扩增技术与PCR区别

如果是恒温的话怎么来完成变性、退火以及延伸过程呢下面是摘录的:操作技术和普通PCR没区别,反应温度上不要高温低温中文三步,只要60度就可以。原理,在常规PCR基础上增加了3对引物(普通1对)使得引物几乎涵盖了目的基因序列的三分之一以上。如果定量加荧光探针,定性就不必了。......阅读全文

恒温核酸扩增技术的扩增速度

  由于恒温核酸扩增只需要在一个温度下进行,相比较于PCR不同温度之间的循环,恒温扩增不需要反复的升温降温过程,有些恒温扩增的速度是快于PCR的扩增速度的。例如:环介导恒温核酸扩增(LAMP),重组聚合酶扩增法(RPA)以及切刻内切酶恒温扩增(NEAR)。目前英国公司optigene已经成功的改造了

恒温核酸扩增技术通量

  在实际的产业化中,分子诊断仪器的通量往往至关重要。对于qPCR而言,由于引物设计的成熟和荧光通道的多样性,往往可以比较好的实现高通量检测。由于恒温核酸扩增技术引物设计较为困难,单一的反应温度会造成引物和模板,引物与引物之间的非特异性链接和扩增,使得恒温扩增的检测通量受到限制。但同时也得益于反应温

恒温核酸扩增技术概述

  恒温核酸扩增技术是利用各种酶,引物,脱氧核苷三磷酸(dNTP),模板DNA以及缓冲液的混合物在同一温度下温浴一定时间,让不同的酶与DNA进行反应,从而达到特定DNA片段的扩增。与传统的PCR核酸扩增相比,恒温核酸扩增不需要在不同温度之间的转换,只要保持酶反应的最佳温度,37℃、42℃、56℃或6

恒温扩增技术与PCR-区别

如果是恒温的话怎么来完成变性、退火以及延伸过程呢下面是摘录的:操作技术和普通PCR没区别,反应温度上不要高温低温中文三步,只要60度就可以。原理,在常规PCR基础上增加了3对引物(普通1对)使得引物几乎涵盖了目的基因序列的三分之一以上。如果定量加荧光探针,定性就不必了。

搞定恒温扩增分子诊断(RPA/RAA)

分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定!为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RPA, recombinase polymeras

恒温核酸扩增技术的特异性

  由于恒温核酸扩增的整个反应是没有温度的变化,模板DNA双链的打开,引物与互补片段的链接以及新片段的合成都是在同一温度下进行的。这就造成某些情况下的反应体系里引物之间形成非特异性互补,扩增,最后造成假阳性的结果。与PCR相比,恒温核酸扩增更易出现假阳性的结果。

恒温核酸扩增技术与传统PCR对比

  和传统的PCR技术相比,恒温核酸扩增不仅仅是缩短了核酸扩增的时间,更重要的是核酸扩增摆脱了对硬件的束缚。PCR技术原理是利用94℃高温使DNA双链解开,并在耐高温的DNA聚合酶的作用下扩增DNA片段。PCR反应至少需要2个不同的温度使DNA片段得到特异性的扩增。恒温核酸扩增是利用各种酶与DNA之

切刻内切酶(NEAR)恒温扩增

  切刻内切酶(NEAR)恒温扩增是目前相关研究最少的一种恒温核酸扩增技术。它是在2008年由Ionian科技公司的研究人员开发并申请ZL的(Brain等2009)。除了链置换酶(Bst)外,NEAR反应中还需添加一个切刻内切酶。NEAR反应的引物设计需要将所使用的切刻内切酶的DNA作为序列加在引物

一文搞定恒温扩增——RPA/RAA

分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问,决定开小灶,包会!哈哈~~为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RP

最简单的恒温扩增PCR——RCA/RCT

小背景滚环扩增技术,rolling circle amplification,RCA——基于DNA的扩增方法;滚环转录技术,rolling circle transcription,RCT——基于RNA的扩增方法。 滚环扩增/转录技术是基于借鉴了自然界中环状DNA/RNA复制和转录方式开发的一种恒温

恒温扩增荧光检测仪有哪些特点?

  1.体积小,重量轻,易于携带。轻松满足外出实验的需求。  2.内置7寸高清电容屏PDA,触屏操作,简便快捷。  3.Marlow高品质Peltier制冷片,结合德国高端PT1000温度传感器以及电性电阻加热补偿边缘的温度控制模式,最大升温速度6℃,最大降温速度5℃,大大缩短实验时间。  4.整板

恒温扩增荧光检测仪的用途举例

  非洲猪瘟PCR检测仪(实时荧光定量PCR仪)用于运行病毒检测实验,并对实验数据进行分析;仪器既可在实验室内操作,又可用于野外科学实验,配合相应试剂,对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、准确的定性检测。  仪器配套非洲猪瘟病毒核酸快速检测试剂盒(荧光 RPA 法)、非洲猪瘟病

恒温核酸扩增技术对引物的高要求

  自80年代PCR技术发明以来,PCR引物的设计已经相当成熟,市场上有很多关于PCR引物设计的软件可供使用。所以设计一对好的PCR的引物并不困难。恒温核酸扩增刚好相反。一对或者几对好的引物对任何一种恒温核酸扩增技术都是相当关键的,可是由于恒温核酸扩增技术各不相同,引物设计方法很难相互借鉴。目前虽然

恒温核酸扩增反应引物探针设计问题合集

重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司开发)。以此为基础的核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低,特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全

恒温扩增荧光检测仪能应用到哪些领域?

  应用领域  □ 基础科学研究  □ 病原体检测  □ 肉制品掺假  □ 转基因检测  □ 食品安全检测  □ 药物开发及合理用药  □ 基因表达  □ 水体监测

荧光定量PCR-vs.-恒温扩增,谁才是分子诊断的未来?

荧光定量PCR 和恒温扩增在分子诊断方面的应用日渐受关注,两种技术孰优孰劣,且听作者娓娓道来。基于核酸扩增的分子诊断,是通过引物介导特异性扩增目的基因,以检测内源性(遗传或变异)或外源性(病原体)目的基因的存在与否,从而对疾病的诊断和治疗提供信息和决策依据。其主要应用场景有传染病的诊断,血筛,肿瘤早

多酶恒温核酸快速扩增技术MIRPA的引物与探针设计指导

  近期,顶级学术期刊连发两篇顶级论文,上半年引爆生物圈的华人科学家张锋教授团队又有新动作!这次,他在一月内,分别在《Nature》、《Science》连发两篇论文!他将CRISPR-Cas13a改造成了灵敏度达到了阿摩尔级(aM,10的负18次方摩尔每升),可以检测单分子的SHERLOCK技术。而

多酶恒温核酸快速扩增技术MIRPA的引物与探针设计指导

近期,顶级学术期刊连发两篇顶级论文,上半年引爆生物圈的华人科学家张锋教授团队又有新动作!这次,他在一月内,分别在《Nature》、《Science》连发两篇论文!他将CRISPR-Cas13a改造成了灵敏度达到了阿摩尔级(aM,10的负18次方摩尔每升),可以检测单分子的SHERLOCK技术。而这其

核酸扩增—链置换扩增技术(SDA)

  SDA是一种基于酶促反应的DNA体外等温扩增技术,采用标记的两种不同荧光基团的探针。在SDA过程中,该探针被掺入到双链扩增产物中,由限制内切酶的酶切使淬灭基团与荧光基团分开,从而释放荧光,用荧光偏振检测法定量检测。SDA较之PCR有更高的扩增效率,耗时仅30min。其基本系统包括一种限制性核酸内

博奥生物恒温扩增微流控芯片核酸分析仪获批

  国家食品药品监督管理总局经审查,2015年4月20日,批准博奥生物集团有限公司的恒温扩增微流控芯片核酸分析仪医疗器械注册。该产品是国家食品药品监督管理总局按照《创新医疗器械特别审批程序(试行)》批准注册的产品。该产品主要由仪器主机、电源线、数据线组成,其中仪器主机主要包含前面板组件、运动平台组件

食药监局将恒温核酸扩增检测仪等22个产品分类界定

《食品药品监管总局办公厅关于恒温核酸扩增检测仪等22个产品分类界定的通知》  各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局:  为适应医疗器械监督管理工作的需要,总局组织有关单位和专家对恒温核酸扩增检测仪等22个产品的管理类别进行了界定。现通知如下:  一、作为Ⅲ类医疗器械管理的产品(1个)  恒温核酸扩

核酸扩增—环介导的等温扩增法

  2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Research(核酸研究)杂志上公开了一种新的适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术,即环介导等温扩增技术,英文名称为“Loop-mediated isothermal amplification",受到了世卫组织、各国学者和相关政府部门的

核酸扩增—转录介导的扩增技术(TMA)

  TMA是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温条件下来扩增RNA或DNA的技术,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链RNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RN

沙门氏菌检验方案:恒温荧光扩增快检与传统培养方法...

沙门氏菌检验方案:恒温荧光扩增快检与传统培养方法对比一.沙门氏菌检测的原因和意义         据统计我国细菌性食物中毒中70%~80%是由沙门氏菌引起的,人一旦摄入含有大量沙门氏菌(10E5~10E6个/g)的动物性产品,就会引起细菌性感染,进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤

基因扩增PCR的扩增与克隆方法介绍

  ①引物的序列应位于基因组DNA的高度保守区,且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异性结合,提高反应的特异性  ②引物长度:15-40bp为宜。引物过短或过长均可使反应的特异性下降。  ③引物的碱基尽可能随机发布,避免出现数个嘌呤或嘧啶的连续排列,G+C碱基的含量在40%-75%

PCR扩增过程

①首先是将含有待扩增DNA样品的反应混合物放置在高温(>91℃)环境下加热1分钟,使双链DNA变性,形成单链模板DNA;②降低反应温度(约50℃),致冷1分钟,使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA发生退火作用并结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上;③将反应混合物的温度上升到72左右保温1-数分钟,在

PCR基因扩增

实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。  1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃

噬斑扩增实验

            实验方法原理 痘苗病毒可以在 HeLa S3 细胞中大量繁殖,其他的细胞系可用于噬斑纯化和扩增。 实验材料 重悬重组噬斑 贴壁生长良好的

噬斑扩增实验

实验方法原理 痘苗病毒可以在 HeLa S3 细胞中大量繁殖,其他的细胞系可用于噬斑纯化和扩增。实验材料 重悬重组噬斑贴壁生长良好的细胞HeLa S3 细胞试剂、试剂盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.5 培养基筛选试剂(麦考酚酸 黄嘌呤/次黄嘌呤)5-溴脱氧尿苷(BrdU)干冰/乙醇仪器、耗材

PCR扩增仪

聚合酶链锁反应,Polymerase chain reaction,简称PCR,是一种分子生物学技术,用于扩增特定的DNA片段,这种方法可在生物体外进行,不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。PCR这项技术,被广泛地运用在医学和生物学的实验室,例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊