各种PCR的“酶”你不行！
聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的核苷酸片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊核苷酸复制，PCR的最大特点是能将微量的核苷酸进行大幅扩增，从而达到容易鉴定和识别程度。 各种PCR到底需要哪些种类的酶？请看中心法则，分子生物学的中心教条。体外的各种聚合酶链式反应就是中心法则的完美运用。中心法则，以及酶的作用DND聚合酶——又称DNA依赖的DNA聚合酶它是以DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。DNA聚合酶根据聚合酶活力特征和外切酶活性特征的不同，有可以分为多种。在IVD领域中比较常见的酶如下： Taq DNA聚合酶——Taq DNA聚合酶是第一个被发现的热稳定DNA聚合酶，分子量65kD，从Thermus aquaticus中分离出来，是目前科研和分子诊断试剂盒里最为广泛应用的聚合酶。为了更优化PCR反应体系，Taq DNA 聚合酶被进行了一系列的性能提升和优化，其......阅读全文
让你见识一下各种“身怀绝技”的免疫细胞
我们的身体里有40到60兆的细胞，拥有2兆左右的免疫细胞，这些免疫细胞是维持身体“免疫力”的最佳医师，他们可以杀死病毒、细菌、肿瘤、细胞、细胞等，同时还可以保护我也负责免疫、，让我们的身体得到更的保护。而在这支“免疫军团”中，也有许多不同的部队，他们都有自己的职责，有自己，他们会齐心协力，保护我们的
设计引物遵循原则、引物保存和各种PCR的引物设计
一 设计引物应遵循以下原则1 、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。2 、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。3 、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上
不能遗忘袁隆平，“暂时”也不行
近日，一篇公号文章《请暂时遗忘袁隆平，我们应该认识一下这些给我们米饭吃的人们》，让中国工程院院士袁隆平在朋友圈获得了一波“新流量”。 文章努力想说明这样几个问题：袁隆平“杂交水稻之父”名不符实；“给我们米饭吃”的人，除了袁隆平还大有人在；袁隆平的成就被“过度放大”，应该被“暂时遗忘”，把“舞台
肿瘤基因检测：抽血行不行
有不少肿瘤患者和家属咨询抽血做基因检测的准确度，是否靠谱等。由于很多患者晚期多处转移，病灶不是很好取，再就是穿刺取组织样本具有一定的创伤性，会引起气胸等并发症。所以抽一管静脉血做基因检测，这不管是从体验上，还是其他方面都引起了患者和家属兴趣。 但是故事刚刚开了个头，随着很多患者交上了那么一大叠
PCR仪日常维护你知道吗
PCR仪介绍： PCR仪支持触摸与鼠标操作，支持外接U盘，打破传统PCR仪的按键式操作，使得编写程序及操作更加的灵活方便，丢弃了查看厚重说明书带来的繁琐。率先在行业领域引入互联网概念，具备新一代的信息技术，以互联网为基础，实现网络的延伸与拓展。以一台上位机为主机，可连接多达200台下位机，经过
PCR仪日常维护你知道吗
PCR仪介绍： PCR仪支持触摸与鼠标操作，支持外接U盘，打破传统PCR仪的按键式操作，使得编写程序及操作更加的灵活方便，丢弃了查看厚重说明书带来的繁琐。率先在行业领域引入互联网概念，具备新一代的信息技术，以互联网为基础，实现网络的延伸与拓展。以一台上位机为主机，可连接多达200台下位机，经过
PCR实验室建设你了解多少？
临床基因扩增实验又称 PCR实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，
Takara推出PCR领域的全能酶
幸福的PCR都是相似的，不幸的PCR各有各的不幸。PCR虽说并不是个复杂的过程，但经常会遇到各种各样的问题，比如GC含量过高、片段太长、保真度不够等等。许多DNA聚合酶就是针对这些问题而设计的，以实现“更高更快更强”。然而，PCR扩增的模板千变万化，每次都要换，这确实麻烦。若有一种全能酶，能解决
PCR反应中Taq酶的选择
随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶，能够满足多方面的实验需要。那么，如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、
基因工程操作的各种工具酶都是什么
基因工程操作中涉及一系列相互关联的酶促反应。已经知道有许多重要的核酸酶，如限制性内切核酸酶、外切核酸酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、反转录酶、DNA及RNA的修饰酶等，在基因工程的操作中有着广泛的用途。 1.限制性内切核酸酶 限制性内切核酸酶(restrictionendonuclease)
教你如何做分子构建，从此迈向科研达人！
做过分子实验的人都知道，要想做的有效率有质量是很苦逼的，1 个月做 100 个克隆那都是 小 case，没点看家的本事怎么行。如果再遇到比较稀有的基因，周旋个把月，那也是家常便饭。下面就和大家分享一些载体构建的经验，从此迈向科研达人！1. 准备工作 俗话说：用欲善其事，必先利其器。建议大家在做构建之
RNA修饰相关酶PCR芯片
应用场景：通过关键酶/蛋白的RNA表达变化，确定样品表型与特定RNA 修饰的联系 优势：预制的PCR板,覆盖68个针对不同RNA修饰的Writers/Erasers/Readers基因。精心优化的引物Tm值均一，并经过了严格的预实验验证，无须摸索引物设计和测试。工业化生产的高度均一的PCR
PCR－(多聚酶链反应)
【实验目的】掌握PCR技术的原理，学习PCR技术的基本方法，了解PCR技术的应用范围与意义。【实验原理】详见14章第2节。【实验对象】特定的DNA序列。【试剂与器材】引物(primer)，根据需扩增的DNA设计相应的引物；TagDNA聚合酶； 10×PCR缓冲液(随酶一起购买)；5mmol/L dN
PCR技术要素酶及其浓度
酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应, 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶,另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时),浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少。
RTPCR、QPCR、Realtime－PCR、realtime－RTPCR你真的区分的开吗？
多少同学能将 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR区分开？有多少同学还在犯晕？今儿这贴，师兄就带你区分区分，拨开那扇 PCR 迷雾。什么是 RT-PCR？RT-PCR就是逆转录 PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR(reverse transcr
真菌dna做pcr条带总是很浅该怎么办
首先是样品DNA质量，你应测下样品DNA的OD值，在1.8-2.0为宜，纯度或pH不对也会使PCR效果不佳。然后测下浓度，我们这用50-300ng/ul,PCR上样1-2微升，DNA浓度过高反而会抑制PCR反应。另外，最好跑个电泳，看看DNA的完整性，如果完整性不行（即无一条大片段条带)，则在进行较
搞精准医学，我国到底行不行？
言及“精准”之前，我国还有多远的路要走？--美国华裔病理科医师访谈手记。 “理念行不行，当然行！但具体到每个地区、每个城市、每个人，就是另外一回事儿了！” 近年来，我国基因检测行业发展如火如荼，各类基因检测公司数量达数百家之多。主流基因测序公司的人类医学产品大类包括：辅助生殖、产前诊断、新生
－Science：儿童麻醉到底行不行
从最早华佗的麻沸散开始，麻醉发展了上千年，已经成为了现代医学的一种重要手段和工具，而儿童麻醉则一直是在争议和激辩中发展，很多家长就担心麻醉或者麻醉药物会影响儿童的智力发育，但也有人认为这种担心没有必要，那么到底儿童麻醉有没有影响呢？ 12月Science杂志的生物医学研究栏目发表题为“Rese
等温扩增到底行不行？
最近又看到一些同行写的关于等温扩增的文章。不禁想起几年前看到的RPA技术介绍。当时第一次看到这个技术的时候，简直可以用“震惊”、“惊艳”来形容。扩增速度真快啊，十几分钟就能出结果，比现在吭哧吭哧做PCR岂不是方便多了！可是几年过去了，似乎也没看到基于RPA技术的临床产品上市。说真的是有点失望的。就像
USP15酶在各种癌症治疗中的潜在作用
乔治华盛顿大学（GW）癌症中心发现，去泛素酶USP15是治疗乳腺癌和胰腺癌的潜在生物标志物，具体成果发表在《Nature Communications》。 “我们验证了USP15在维持基因组稳定性和肿瘤抑制方面的作用，并为乳腺癌提供了新的治疗方法，”医学和健康科学学院生化和分子医学助理教授Hu
聚合酶链式反应（PCR）PCR不扩增的原因
1、PCR扩增体系问题。用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题,即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的(阳性对照)2、引物问题。用以前扩增产物做模板(稀释50倍),证明引物没有问题3、只是模板问题了。因为样本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是样
qRTPCR中SYBRGreen酶的选择
高质量的酶是保证高质量结果的前提。现在市售的酶多为2 X MIX的形式。在市售酶的选用方面，我们首先应该选择稳定、扩增效率高的酶，其次还应注意解冻后的MIX粘性不宜过大（粘性过大的MIX会导致加样时枪头出现挂液），最后应注意同一板qRT-PCR体系不宜用两管MIX，即加完一管发现不够用，继续开一管新
内切酶PCR反应中的活性
酶切反应条件如下：在20 µl PCR产物混合体系中加入5U的内切酶，按相应的反应温度温育1小时。通常20 µl PCR产物体系中含有1 µg底物DNA，1单位的Vent DNA聚合酶，1× ThermoPol Buffer [10 mM KCl， 20 mM Tris-HCl （PH 8.8@25
聚合酶链式反应（PCR）快速PCR技术与快速PCR仪的区别
快速PCR技术与快速PCR仪的区别。 1、模块升温和降温度时间 PCR仪一般会标明升温速度和降温速度,但标的大多是最大变温速度,也就是说是瞬间达到的速度。而与实验相关的平均升降温速度只有极少量厂家标明。以平均2度和4度(能做到平均升降温4度的仪器极少)来计算,从95度降到55度,分别是20秒
不得不看的载体构建的心得与体会
这两年在美帝净做克隆实验了，以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的，来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天，刚才粗粗统计了一下，在美帝一年零八个月，我构建的质粒的超过四百个，其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周，也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得
不得不看的载体构建的心得与体会
这两年在美帝净做克隆实验了，以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的，来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天，刚才粗粗统计了一下，在美帝一年零八个月，我构建的质粒的超过四百个，其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周，也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得
RTPCR内参基因选择：除了βactin还能用什么？
Q1： 要做real-time pcr，而该种的β-actin未确定，我知道一般用持家基因作内参，但似乎其他基因各有缺点，有的作者用他们做内参时被SCI杂志要求用两个内参以证实，我想知道的是除了β-actin，哪个基因是SCI公认的内参基因(不用作两个内参了)?A1： 28S和18S rRNA甘油醛
提取RNA的时候总是有DNA污染
不管RNA还是RT之后做pcr，RNA都要变成cDNA之后才能做pcr。确定用DNase I处理过，电泳没有DNA条带了。一般RT用oligo dt或者随机引物做扩增。也有用你想的目的片段的扩增引物做RT的。你看看你现在用的是什么引物，换oligo试试，不行换成你的基因特异性引物做了RT之后，再来p
GC含量高的PCR小结
xjktony扩增模板的GC 含量为66％,也不算很高,我做过更高的GC 含量(80%)的PCR.对于 这种高GC含量的PCR,要加些DMSO等,以解除其二级结构的影响,当然现在也有专门这种PCR Buffer卖.vanny宝生物有这种做高GC含量的酶和buffer，称为LA TAKARA酶，里面有
多聚酶链式反应PCR
多聚酶链式反应PCR ：(1)PCR原理：在模板DNA、引物和4种脱氧单核苷酸存在的条件下依赖于耐高温的DNA聚合酶的酶促合成反应。以欲扩增的DNA做为模板，以和模板正链和负链末端互补的两种寡聚核苷酸做为引物，经过模板DNA变性、模板引物复性结合、并在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应来合成新的模