超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测的应用（三）
2.2.2 基于分子的病原体检测技术2.2.2.1蛋白检测目前针对病原体蛋白的直接检测使用质谱技术，基于已建立的微生物胞膜蛋白质、脂多糖、核酸等的数据库对微生物进行精准鉴定和分析。质谱方法针对培养后浓度较高、品种较为单一的待测样品，通过获得其蛋白质图谱，再与已知微生物构建的数据库的参考图谱进行比对，从而鉴定病原微生物。质谱检测技术高效快速且成本低，加之其高灵敏度、高特异性和高准确性的特点，在临床微生物检测等方面获得了广泛的应用，用于多类型样本中细菌和真菌的直接鉴定。但目前仅能处理培养后菌株等相对单纯样品，难以对原始临床标本中复杂背景样品进行病原检测，检测内容也仅限于病原体分型，在生物耐药性分析和毒力研究等方面进展较少。2.2.2.2核酸检测基于核酸的检测早期使用PCR的方式，对病原微生物基因组或转录组片段进行特异性扩增，再对扩增片段进行鉴定或片段扩增进程进行分析，从而实现病原体的鉴定。PCR技术的具体原理如上文所述，在病原微生物......阅读全文
SNP分型技术在临床检测市场的应用前景
SNP（Single nucleotide polymorphism）即单核苷酸多态性，它是由基因组DNA某一特定核苷酸位置上单个碱基的转换、颠换、插入或缺失引起的点突变, 使得群体之间和个体之间产生了差异。 SNP的检测方法很多，它们主要基于以下4种基本原理：（1）等位基因特异
SNP分型技术在临床检测市场的应用前景
SNP（Single nucleotide polymorphism）即单核苷酸多态性，它是由基因组DNA某一特定核苷酸位置上单个碱基的转换、颠换、插入或缺失引起的点突变, 使得群体之间和个体之间产生了差异。 SNP的检测方法很多，它们主要基于以下4种基本原理：（1）等位基因特异性杂交；（2）内
PCR－技术的应用应用于癌基因检测
与临床诊断有关的癌基因可分为3类,即肿瘤非特异性癌基因、肿瘤特异性癌基因和暂未证明临床意义的癌基因。用于临床诊断的癌基因主要为前两类,包括致癌基因与抗癌基因,转移基因和转移抑制基因。目前 PCR 的临床主要用于:①检测血液系统恶性肿瘤染色体易位,尤其是对微小残余病灶的检测,有助于判断白血病的疗效。②
X射线血液辐照技术及其临床应用
一、输血相关移植物抗宿主病输血本质上是血液细胞移植的过程。正常受血者（宿主）自身可识别、排斥和清除献血者淋巴细胞（移植物）。若受血者存在免疫功能缺陷，异体淋巴细胞在体内存活、增殖并对宿主器官进行免疫攻击，进而引发严重免疫性输血反应：输血相关移植物抗宿主病（transfusion-associated
数字PCR在食品安全检测的应用
食品安全日益成为一个重要的公共卫生问题, 受到社会及国家的高度重视。食源性疾病、食品原料造假、转基因食品等逐渐呈现出普遍增长的趋势。食源性疾病是指通过摄食而进入人体的有毒有害物质等致病因子所造成的疾病。比如常见的食物中毒、肠道传染病、人畜共患传染病、寄生虫病等。食源性疾患的发病率居各类疾病总发病率的
多重PCR反应的方法
一)选择目标基因由于多重PCR在同一个反应体系中需要加入多对引物,而模板直接影响扩增的结果分析,这就导致了扩增模板的选择至关重要。同时,扩增区域的选择必须符合分析的目的,如通常对于致病微生物,需要选择其保守序列,如16sRNA,或者毒力基因、毒力相关基因,以防止检测到非致病突变体而无法解释结果;对于
核酸扩增—多重PCR
多重PCR是在单一PCR基础上改进和发展起来的新技术，是在同一PCR体系中加入多对特异性引物，一次扩增多个DNA片断，实现多个基因序列或多种病原体的同时检出。多重PCR降低了检测成本，减少了工作量，提高了检测效率，并且可以解决淋球菌、衣原体等混合感染者临床症状不明显，检出率低等问题。淋病患者往往
多重－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物仪器、耗材 热循环仪实验步骤 一、材料1. 酶和酶缓冲液Taq 聚合酶许多 Taq 聚合酶都可以用；作者发现 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以满足大多数需要. 如果需要提高PCR 产物的特异性，应该使用热启动聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附带的
多重－PCR－扩增实验
多重PCR扩增实验可以用于：（1）在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是用一滴血就可检测多种病原体；（2）多重PCR很适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检；（3）多种病原体在同一反应管内
多重－PCR－扩增实验
实验方法原理 多重PCR（multiplex PCR），其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定。重PCR的特点有：①高效性在同一PCR反应管内同时
血栓弹力图（TEG）检测及其临床应用
一、TEG能监测“凝血启动-血凝块生成-血凝块降解”3个阶段，每个阶段均有具体参数 1.样本低凝时上述参数可能的表现：与参考区间相比，R、K延长，Angle、MA、G、CI减低，LY30增大（如发生纤溶亢进）2.样本高凝时上述参数可能的表现：与参考区间相比，R、K缩短，Angle、MA、G、CI增
数字PCR应用（三）
Fluidigm公司于2006年底推出了基于集成流体通路（IFC）芯片的Bio-Mark™ 高通量基因剖析系统。 其创新在于集成液体通路技术：应用集成电路制造工艺（光刻）在硅片或石英玻璃上刻上许多微管和微腔体，经过不同的控制阀门控制溶液在其中的活动来完成生物样品的分液、混合、PCR扩增。图8. Bi
PCR技术的应用
PCR技术的应用1、生命科学a、人类基因组计划 随着的PCR日臻完善，科学家于2003年在完成的人类基因组“工作框架图”的基础上，经过整理、分类和排列后得到的更加准确、清晰、完整的基因组图谱。这是对人类基因组基本面貌的首次揭示，表明科学家们开始部分“读”出人类生命“天书”所蕴涵的内容。b、后基因组计
PCR技术要素酶及其浓度
酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供应, 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶,另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时),浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少。
实时荧光定量PCR试剂在临床上的应用
实时荧光定量PCR试剂在临床上的应用实时荧光定量PCR试剂是1996年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。实时
多重PCR基因芯片检测新研究
来自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片检测方法，这一方法具有较高的特异性，并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首，长期以来严重危害人民
多重PCR基因芯片检测新研究
来自疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片方法，这一方法具有较高的特异性，并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首，长期以来严重危害人民健康。其中绝大
PCR技术（六）：PCR技术应用进展
PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力.近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术 原位PCR就是在组织细胞里进行PCR反应，它结
飞行时间质谱核酸检测技术在临床检测中的应用
飞行时间(Time-of-Flight)质量分析器是一种利用静电场加速离子后，以离子飞行速度差异来分析离子质荷比的仪器，与脉冲激光源基质辅助激光解吸电离（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization, MALDI）配合，组成了飞行时间质谱。MALDI
微流控技术在临床免疫检测中的应用
与生化项目使用的微流控芯片相比，在临床免疫分析项目的芯片相对较为简单，加样后通常通过微泵和阀门的配合，进行样本混合、捕获和检测。毛细管道的相对表面积非常大，在抗体包被在表面后，可以更有效地捕获低浓度抗原[11]。但是在检测模块上，免疫芯片的抗体标记方法众多，与生化芯片相比，检测方式也更加多样；除了酶
非培养检测技术在曲霉菌感染中的临床应用
曲霉菌在环境中广泛存在，主要通过呼吸道吸入霉菌胞子进入人体。首先侵人感染肺部进而发肺曲霉菌病。在血液系统疾病、肺结核、慢性支气管炎、支气管扩张、肺癌等免疫抑制患者中曲霉已成为仅次于白色念珠菌的重要致病真菌。曲霉菌感染已成为最常见的、传播最广的条件致病霉菌之一，但早期诊断困难，常常导致治疗时机延误，病
PCR－技术的应用应用于法医学检测
由于 PCR 技术的高度灵敏性,即使是多年残存的痕量 DNA 也能够被检测出来。近年来,在 PCR 基础上,又发展出许多基因位点分型系统,用于法医物证的 DNA 分析,其中发展最为完善并得到公认的是 HLA-DQa 位点的分型系统,此系统成为国际上法医科学中应用 PCR 技术进行个人识别和亲子鉴定最
PCR检测输血传播病毒DNA的临床应用
在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、急性重型肝炎及肝硬化病例中，有部分病例无法用已建立的甲、乙、丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型。继1995年发现庚型肝炎病毒（HGV）后，1997年日本学者Nishizawa等［1］报道了应用代表性分析法发现了一种可能与输血后肝炎相关的病毒，暂时称为输血传
应用多重PCR方法鉴定RHD基因型的研究
作者：徐华1，叶世辉1，王宝燕2，刘孟黎1，吴大洲1，贺晨1 作者单位：(1. 陕西省血液中心血型研究室，陕西西安710061;2. 西安交通大学医学院第一附属医院输血科，陕西西安710061) 【摘要】 目的建立一种可靠的PCR方法，用于RHD血型基因型的研究。方法根据RHD血型基因的
荧光标记基团的选择及其在荧光定量PCR中的应用
PCR实验室产品选择指南 荧光 基团是吸收一定波长的光子后发射特定波长的光波，可以作为抗体等分子的标记物，实时荧光定量PCR中的Taqman探针常用荧光基团FAM标记荧光基团和TAMRA标记。 荧光基团 吸收特定波长的光子后荧光染料(通常称为“荧光基团”或简称为“荧光素”)的化
地质勘测研究先进技术及其应用概述（三）
四、X-Trace LIBS遥测分析系统X-Trace LIBS元素遥测分析系统由欧洲工程技术中心（CEITEC）研制生产，用于岩矿、材料、塑料、土壤及植物等的元素分析和元素分布2D成像，可广泛应用于地质科学、材料科学、土壤科学、生物科学、环境科学、考古学、生物医学等领域样品分析。系统主要由移动
PCR技术应用社会学DNA的检测
目前广泛采用的 DNA 测序方法有化学法和双脱氧法两种,它们对模板的需要量比较大。利用 PCR 方法可以比较容易地测定位于两个引物之间的序列。利用 PCR 测序有下列几种方法。(1)双链直接测序将 PCR 产物进行电泳回收或利用分子筛等方法除去小分子物质。采用热变性或碱变性的方法使双链 DNA 变成
实时荧光定量PCR检测及临床应用
实时荧光定量PCR技术的应用定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Appliedbiosystems公司推出，它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团，利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的
PCR实验技术（三）
【注意事项】1. PCR引物设计：引物设计可能是PCR扩增成功最关键的因素。如引物设计欠佳，可能导致扩增产物不足，甚至扩增失败，其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体，此又成为PCR反应的竞争性产物，从而进一步抑制PCR产物形成。在引物设计时必须考虑以下几个因素，其中最重要的是引
电泳技术及其临床应用新进展
电泳技术是一门古老而又年轻的技术。早在1809年俄国物理学家Reuss就进行了世界上第一次电泳实验，此后各种电泳技术及仪器相继问世，广泛应用于蛋白质、氨基酸、核酸、其他有机化合物甚至无机离子等领域的分离和／或鉴定。近年来，先进的电泳技术和各种自动电泳分析系统被越来越多的临床实验室所采用检验