蛋白纯化系统分离方法之疏水相互作用层析法

由于在自然界生命活动中起重要作用的蛋白质在机体细胞内的浓度比较低,并且存在于细胞的各个机构中的蛋白质几乎都是以复杂的混合形式存在的。为了在不破坏蛋白质的空间结构及上等结构,和不影响其生理功能的情况下,把蛋白质分离、纯化出来,需要使用一些技术,如重组蛋白纯化技术。疏水相互作用层析法是蛋白分离纯化的一种方法。 制备高纯度的药用蛋白,必须依靠先进的分离技术,层析技术具有分离效率高、条件温和、选择性强、操作方便等优点,是生物大分子分离纯化*有效的手段之一。蛋白质具有蛋白表面疏水性的特性,蛋白表面疏水性对于维持蛋白质的稳定构象及生物活性有着重要作用,同时又是疏水作用为主的层析分离蛋白质方法的重要依据。疏水相互作用层析法,可以根据生物分子的疏水性强弱差异而实现分离纯化,己经被广泛地用于重组蛋白分离和重组蛋白纯化等。疏水相互作用层析法(HIC法)的进行重组蛋白纯化的机理如下:生物分子表面的疏水基团在高盐浓度下逐渐暴露,通过疏水相互作......阅读全文

关于骨桥蛋白的蛋白结构的介绍

  OPN作为带负电的非胶原性骨基质糖蛋白,广泛的分布于多种组织和细胞中,其相对分子质量约为44 kDa,约含300 个氨基酸残基,其中天冬氨酸、丝氨酸和谷氨酸残基占有很高的比例,约占总氨基酸量的一半。骨桥蛋白多肽链的二级结构中包括8个α螺旋和6个β折叠结构,高度保守的RGD基元两端各有一个β折叠结

蛋白蛋白相互作用技术内容

  技术内容    蛋白质并非孤立存在的生物分子,而是具有特定三维空间结构并与其他蛋白质相互作用,共同执行功能。因此,蛋白质的模块及空间组织与其表达水平具有同样的重要性。为了解析蛋白质组的组织结构单元而开发的基于质谱的蛋白质组学方法通常结合了质谱检测与各种生化试验。其中最经典的技术为1999[1]

白蛋白球蛋白比值偏低的原因

  (1)肝脏疾病。肝硬变和急性肝坏死时明显降低;传染性肝炎、慢性肝炎和肝损伤时轻度或中度降低。  (2)肾脏疾病。肾病综合征明显降低;急性和慢性肾炎轻度或中度降低。  (3)自身免疫病。如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病、干燥综合征等可能降低。  (4)M蛋白血症。多发性骨髓瘤有明显降低。

用-GST-融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验

实验材料 结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白试剂、试剂盒 碱性缓冲液 封闭缓冲液 相互作用缓冲液PK 缓冲液还原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗涤缓冲液 1 洗涤缓冲液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP仪器、耗材 与待筛选蛋白结合的膜或滤膜Sephadex G-50 转柱实验步骤 材

用-GST-融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验

GST 融合蛋白作为在细菌中表达的重组蛋白,从它们被介绍以来,已用于成千上万个研究项目中(Smith and johnson 1988)。它们常常被用于制备抗体,这些抗体可用于研究蛋白质-蛋白质相互作用以及分析生化反应。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W

用-GST-融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验

            实验材料 结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 试剂、试剂盒 碱性缓冲液 封闭缓冲液 相

测定球蛋白含量及白蛋白与球蛋白比例的临床意义

  (1)增高:多见于炎症、免疫系统疾病和肿瘤。  1)细菌、病毒、寄生虫引起的急慢性感染:结核病、麻风病、疟疾、黑热病、血吸虫病、病毒性肝炎。  2)自身免疫性疾病:系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿热、类风湿性关节炎等。  3)多发性骨髓瘤和淋巴瘤:多发性骨髓瘤是由浆细胞恶性增殖造成的异常高的单一Ig

钙蛋白酶抑制蛋白的作用介绍

中文名称钙蛋白酶抑制蛋白英文名称calpastatin定  义一种广泛分布的内源性抑制蛋白质,能特异地抑制需钙激活的中性蛋白酶。其分子质量依来源及提取方法而异,从24kDa至400kDa。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

人蛋白多糖(蛋白多糖)ELISA试剂盒

人蛋白多糖(蛋白多糖)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 蛋白多糖 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 蛋白多糖与单抗结合,加入生物素化的抗人蛋白多糖,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Strep

Western-Blot归一化看家蛋白与总蛋白

  做Western Blot的小伙伴,是不是还在为归一化方法而纠结呢?今天小编就和大家汇总一下看家蛋白和总蛋白归一化的方法。   看家蛋白归一化   使用看家蛋白的最大缺点是在样品间和不同条件下表达水平可能不一致。如使用看家蛋白进行标准化,必须先花费时间和精力来验证内参的选择。   使用看家

靶向蛋白降解技术:“借刀”清除致病蛋白

人体就像是一台精密的仪器,任何一个零件出现问题,都有可能带来意想不到的麻烦。蛋白质就是其中一类最为重要的“零件”。很多疾病是由细胞内某种蛋白质表达失衡,特别是某种蛋白质过多表达引起的。科学家想到:如果消灭掉这些不该出现的“坏”蛋白质,疾病不就迎刃而解了吗?于是,靶向蛋白降解技术应运而生,作为一颗冉冉

G蛋白偶联受体调控中的关键蛋白

  Johns Hopkins大学的科学家发现了一个“脚手架”蛋白,它将复杂的痛觉调控系统中的多种蛋白聚集在一起,包括Homer、蛋白激酶和mGluR,该发现发表在Nature Neuroscience杂志上。这一调控系统与多种神经病和神经性疾病有关,为治疗这些棘手的疾病提供了新靶点。  

急性时相反应蛋白包括什么蛋白?

  急性时相反应蛋白包括α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、C4、C3、纤维蛋白原、C反应蛋白等。其血浆浓度在炎症、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下显著上升。另外有3种蛋白质即前白蛋白、白蛋白和转铁蛋白则相应低下。增加的蛋白质称为正向APP,下降的蛋白质称为负向APP。

​蛋白聚糖核心蛋白的主要特点

与糖胺聚糖共价结合的多肽链称核心蛋白(core protein),它的种类很多,Mr从约2万~25万,其中不少于已测得其氨基酸序列。核心蛋白具有以下几个特点:(1)多数核心蛋白含有几个不同的结构域;(2)所有的核心蛋白都含有相应的糖胺聚糖结合结构域;(3)某些蛋白聚糖可通过核心蛋白中的特定结构域,锚

酪蛋白激酶分析实验_用-β酪蛋白

实验材料β-酪蛋白(溶于水)有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCASDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤1. 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:4 μl 5 ×

蛋白质代谢的降解蛋白的介绍

  1、内源蛋白降解速度不同,一般代谢中关键酶半衰期短,如多胺合成的限速酶-鸟氨酸脱羧酶半衰期只有11分钟,而血浆蛋白约为10天,胶原为1000天。体重70千克的成人每天约有400克蛋白更新,进入游离氨基酸库。  2、内源蛋白主要在溶酶体降解,少量随消化液进入消化道降解,某些细胞器也有蛋白酶活性。内

染色质蛋白非组蛋白的介绍

  非组蛋白主要是指与特异DNA序列相结合的蛋白质,所以又称序列特异性DNA结合蛋白(sequence specific DNA binding protein)。利用凝胶延滞实验(gel retardation assay),可以在细胞抽提物中进行检测。首先制备一段带有放射性标记的已知特异序列的D

诱导性蛋白与组成型蛋白差异

诱导型蛋白是指受到特定诱导信号才能表达的蛋白质,组成型蛋白是指不需要诱导,一直表达的蛋白质。诱导型蛋白和组成型蛋白的差异主要是在转录的启动子上。要获得诱导型蛋白,就要施加诱导信号,例如甲醇启动子诱导的蛋白质在发酵时添加甲醇后就能开始表达,通过对甲醇添加量、添加时间等的条件优化就能得到最大的表达量,而

《Science》从头制造复杂蛋白?还是跨膜蛋白!

  华盛顿大学蛋白质设计研究所的分子工程师3月1日在《Science》发文告诉我们,人类可以从头开始创建和定制复杂的跨膜蛋白了,甚至制造自然界中没有的跨膜蛋白来完成特定任务。图片来源于网络  在生命世界里,跨膜蛋白是嵌在所有细胞和细胞器膜中的一类蛋白,它们是细胞与外界的交互门禁,一些跨膜蛋白还参与细

植物蛋白和动物蛋白哪个更难吸收

应该都一样的吧。植物蛋白和动物蛋白在消化道内都能被分解成氨基酸被小肠上皮细胞吸收。都有酶去分解它们,不存在难易的问题吧。植物蛋白和动物蛋白有什么特殊的区别吗?我觉得没啥区别,因为都是由20种基本氨基酸构成的。也不存在什么特殊的肽键。

球蛋白和清蛋白有什么区别?

球蛋白和清蛋白的区别是临床检验师考试会涉及的内容,为了帮助考生更好的复习,医学教育网小编整理了以下内容,希望对您有帮助!球蛋白是一种存在于人体中的血清蛋白,球蛋白是一种常见的蛋白,基本存在于所有的动植物体中。球蛋白具有免疫作用,因此也有人称球蛋白为免疫球蛋白。白蛋白又称为清蛋白,由肝实质细胞合成,是

关于蛋白聚糖的核心蛋白的介绍

  与糖胺聚糖共价结合的多肽链称核心蛋白(core protein),它的种类很多,Mr从约2万~25万,其中不少于已测得其氨基酸序列。核心蛋白具有以下几个特点:  (1)多数核心蛋白含有几个不同的结构域;  (2)所有的核心蛋白都含有相应的糖胺聚糖结合结构域;  (3)某些蛋白聚糖可通过核心蛋白中

含蛋白量最多的脂蛋白有哪些?

HDL是体积最小的脂蛋白,和其他脂蛋白相比,HDL含蛋白量最大(>50%),其主要的载脂蛋白为ApoAⅠ、AⅡ及少量的ApoC、E;磷脂是其主要的脂质,还有少量的胆固醇、胆固醇酯和甘油三酯在卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的作用下,游离胆固醇变成胆固醇酯,经过HDL将蓄积在组织的游离胆固醇运送到肝

Western-Blot归一化看家蛋白与总蛋白

做Western Blot的小伙伴,是不是还在为归一化方法而纠结呢?今天小编就和大家汇总一下看家蛋白和总蛋白归一化的方法。看家蛋白归一化使用看家蛋白的最大缺点是在样品间和不同条件下表达水平可能不一致。如使用看家蛋白进行标准化,必须先花费时间和精力来验证内参的选择。使用看家蛋白的第二个重大挑战是它们的

突触核蛋白与synphilin1蛋白结合

  Engelender等运用酵母双杂交技术发现synphilin-1蛋白能作为调节分子将α-突触核蛋白锚钉在参与囊泡转运和细胞骨架功能的蛋白分子上面[25];synphilin-1蛋白是一个90kDa的胞内蛋白质,含有ANKYRIN样重复单位、一个螺旋结构域和可能的ATP/GTP结合位点;Kawa

急性时相反应蛋白都包括哪些蛋白?

  急性时相反应蛋白包括α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、C4、C3、纤维蛋白原、C反应蛋白等。其血浆浓度在炎症、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下显著上升。另外有3种蛋白质即前白蛋白、白蛋白和转铁蛋白则相应低下。增加的蛋白质称为正向APP,下降的蛋白质称为负向APP。

用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪蛋白激酶

试剂、试剂盒酪蛋白激酶分析缓冲液β-酪蛋白β-酪蛋白储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物:5X 酪蛋白激酶分析缓冲液                            4 μl  β-酪蛋白                               

肌肉肌球蛋白和肌动蛋白纯化实验_DEAE纯化肌肉肌球蛋白

实验材料肌肉肌球蛋白试剂、试剂盒焦磷酸钠柱平衡缓冲液柱缓冲液高盐缓冲液肌球蛋白-DEAE 透析缓冲液仪器、耗材SDS-PAGE实验步骤一、准备 DEAE 柱和材料1. 准备贮存液和材料200 mmol/L 焦磷酸钠(NaPPi ),pH 7.0用 HCl 和 H3PO4 调 NaPPi 溶液的 pH

同步检测尿总蛋白和白蛋白有助于鉴别蛋白尿来源

检测尿蛋白分子量有助于鉴别蛋白尿来源,尤其是区别肾小球性和肾小管性蛋白尿。最近有学者应用电泳法和固定法检测了1011例患者的尿总蛋白/肌酐(uPCR)和尿白蛋白/肌酐(uACR),并计算尿白蛋白/总蛋白(uAPR),同时234例肾内科门诊患者应用检测尿肾小管蛋白标志物NAG和β-MG,并计算其与尿肌

蛋白酶的按蛋白酶水解蛋白质的方式分类

按蛋白酶水解蛋白质的方式可分为以下几种。(1)切开蛋白质分子内部肽键,生成相对分子质量较小的多肽类,这类酶一般叫内肽酶;(2)切开蛋白质或多肽分子氨基或羧基末端的肽键,而游离出氨基酸,这类酶叫外肽酶。作用于氨基末端的称为氨肽酶,作用于羧基末端的称为羧肽酶;(3)水解蛋白质或多肽的脂键;(4)水解蛋白