标记抗体的方法和对应的应用

荧光素标记荧光色素是最常用于标记抗体的标记物之一。荧光素经恰当的激发可发光,从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况,主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色,是一种非常好的亚细胞水平精确定位的方法。酶标记酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成,其应用范围非常广泛,结果即时可见、敏感性高,但较难应用于定量分析。生物素标记生物素标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性,将生物素与抗体共价结合是一种非常简便、直接的标记方法。......阅读全文

标记抗体的方法和对应的应用

荧光素标记荧光色素是最常用于标记抗体的标记物之一。荧光素经恰当的激发可发光,从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况,主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色,是一种非常好的亚细胞水平精确定位的方法。酶标记酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成,其应用范围非常广泛,结果即时可见、敏感性高,但较难应用

标记抗体的概念和应用

抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体,是免疫电镜样品制备的一种方法,用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上,通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。抗体标记主要是用于抗原的

抗体的标记方法

荧光色素标记抗体1.准备好凝胶滤柱以便完成结合反应后用于分离标记抗体和游离的荧光色素。分离球形蛋白使用排除极限为20 000~50 000的凝胶介质和细粒级凝胶(直径约50μm)。所需凝胶滤柱的大小可根据偶联反应的总体积×20来确定。依据厂家说明准备好滤柱,用20倍柱床体积的PBS灌注滤柱,直至缓冲

抗体标记方法

Biotinylation of Antibody ( Contributed by Nanci Donacki)  Antibody labeling (House Ear Institute)Labeling protocols using affinity markers.  Coupling

标记抗体的应用技术

实验方法原理 ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用

HRP标记抗体的方法

   酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。  戊二醛二步法  1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。  2. 标记

脉冲追踪标记的的方法和应用

中文名称脉冲追踪标记英文名称pulse-chase labeling定  义使生物体(整体、细胞、细菌等)某成分能够被标记(如放射性标记)的环境中短暂生存,然后转入到非标记环境(如非放射性培养液)中,追踪观察被标记成分变化的实验。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

标记抗体的应用技术——ELISA

标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上,通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。常用的标记物包括荧光素、酶和放射性核素等,用这3种标记物进行标记的免疫检测技术被称为3大免疫标记技术。目前,使用的免疫标记物还有化学发光物质、铁蛋白和胶体金

藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE标记蛋白A方法

藻红蛋白标记抗体的方法:1.      巯基化藻红蛋白(PE)的制备;(1)         将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中;(2)         将以上混合液和1.2ml pH6.8的PB混合,而后装入透析袋置入50mmol/L p

藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE标记蛋白A方法

藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE-标记蛋白A方法   藻红蛋白标记抗体的方法: 1. 巯基化藻红蛋白(PE)的制备; (1) 将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中; (2) 将以上混合液和1.2ml pH6.

简述酶标记抗体的方法步骤

  1、HRP标记抗体的方法  酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。  戊二醛二步法  原理  戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般zui多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FI

酶标记抗体技术方法

   酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量

酶标记抗体技术方法

   酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量

标记抗体的应用技术——BAELISA

实验方法原理BA-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白,分子量为68 kDa,由4个亚单位组成,对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共

标记抗体的应用技术——125I标记单克隆抗体竞争结合试验

实验方法原理125I标记的单克隆抗体能与具有相应抗原的细胞结合,有数百倍以上未标记的特异性抗体同时存在的条件下,则标记抗体的结合受到竞争性抑制。根据不同稀释度抗体分别与相同数量细胞结合后所测得的特异性计数值,可以计算出每个细胞表面的平均抗原密度以及抗原和抗体的亲和力。实验材料细胞McAb抗体试剂、试

酶免疫技术抗体的酶标记方法

用于酶免疫技术的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前酶免疫技术检测中常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根过氧化

酶标记抗体技术方法(三)

3. 结果判定:  除标记物IgG量的计算,略有不同以外,其余均同戊二醛法。  IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62  4. 试剂及器材:  (1) 0.1M NaIO4:称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂,批号830602)溶于蒸馏水10ml中。  (2

酶标记抗体技术方法(二)

三、HRP标记抗体的方法  酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。  戊二醛二步法  1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白

酶标记抗体技术方法(一)

  酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...2

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和生物素标记)(3)移入透析袋中,在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液中,4℃透析过夜,更换三次缓冲液,注意避光。 (4)吸取上述醛化好的HRP溶液3ml,加入5mg IgG的碳酸盐缓冲液1ml,室温轻搅2-3小时,避光;加入5m

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...1

目前动物用单抗,在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用,大多以诊断试剂(盒)的形式提供,其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶(HRP)标记 辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖

新蛋白质交联抗体的标记和修饰使用方法

介绍现在的研究中,一个大生物分子与另一个大分子的共价结合,如抗体与酶或酶与DNA的共价结合,仍是研究人员实验中的重点之一。其中有几种方法可用于交联两个生物分子。一种常见的方法是使用一种小分子交联剂(如Sulfo-SMCC)。SMCC的一端有胺反应性NHS酯基与蛋白质的游离胺(-NH2)反应,另一端有

标记抗体的应用技术——免疫斑点试验

实验方法原理硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力,在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。因而,将抗原吸附于纤维素膜后,就可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合),然后再加入带有标记物的抗体,使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用3

       表2. ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂盒  名称 Ex(nm) Em(nm) 规格 货号 ReadiLink™xtra Rapid iFluor™350抗体标记试剂盒 344 4

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用1

     用特定标签标记抗体已成为生物科学和医学研究中的重要且常规程序,标签的范围从视觉标记(例如荧光染料)到半抗原分子(例如生物素),标签的作用有增强免疫复合物和蛋白质-蛋白质相互作用的可见性,以及用于蛋白质的分离和纯化。        在确定选择哪种标签类型时,应侧重于抗体的下游应用。荧光标

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用2

     方便的设计以取得最大的效果:         ReadiLink™快速抗体标记试剂盒利用胺反应性标记来制备共价标记的结合物。这些反应性标记选择性地靶向并结合至目标抗体上的伯胺(例如赖氨酸残基)。要标记您的抗体,只需将您的抗体溶液(浓度约1 mg / mL)与ReadiLink™

抗体的生物素化标记的方法介绍

本法可使抗体或其它蛋白质的ε-氨基通过手臂与酰化的生物素共价结合。其后,生物素化的分子可应用酶标-亲和素或荧光染料-链霉亲和素复合物来检测。小分子的水溶性生物素对细菌蛋白链霉亲和素具有高度亲和力是本法的设计基础。NHSB:N-羟基琥珀酰亚胺生物素(有商品供应)0.1 mol/L 碳酸氢钠缓冲液,pH

微卫星标记的概念和应用

微卫星DNA 是真核生物基因组重复序列中的主要组成部分,主要由串联重复单元组成,每单元长度在1-10bp 之间,1 个SSR 的总长度可达几十到几百个bp。每个微卫星DNA 都由核心序列和侧翼序列组成,其核心序列呈串联重复排列。侧翼DNA 序列位于核心序列的两端,为保守的特异单拷贝序列,能使微卫星特

光亲和标记的原理和应用

中文名称光亲和标记英文名称photoaffinity labeling定  义应用化学标记试剂R-P的亲和标记法。其中R能特异、可逆地与拟标记分子的活性部位结合,P是在黑暗中不起反应的基团,经光激活作用后,R-P转变为高度活化的中间产物,在结合的部位与拟标记分子形成共价键连接而标记。P可以是亲和物质