藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE标记蛋白A方法

藻红蛋白标记抗体的方法:1. 巯基化藻红蛋白(PE)的制备;(1) 将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中;(2) 将以上混合液和1.2ml pH6.8的PB混合,而后装入透析袋置入50mmol/L pH6.8的PB中于4℃透析,过夜;(3) 再换用pH7.5 PB透析6h。每个PE分子中可结合8个巯基;2. 巯基PE-IgG的制备;(1)  ......阅读全文

藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE标记蛋白A方法

藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE-标记蛋白A方法   藻红蛋白标记抗体的方法: 1. 巯基化藻红蛋白(PE)的制备; (1) 将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中; (2) 将以上混合液和1.2ml pH6.

藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE标记蛋白A方法

藻红蛋白标记抗体的方法:1.      巯基化藻红蛋白(PE)的制备;(1)         将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中;(2)         将以上混合液和1.2ml pH6.8的PB混合,而后装入透析袋置入50mmol/L p

抗体标记方法

Biotinylation of Antibody ( Contributed by Nanci Donacki)  Antibody labeling (House Ear Institute)Labeling protocols using affinity markers.  Coupling

抗体的标记方法

荧光色素标记抗体1.准备好凝胶滤柱以便完成结合反应后用于分离标记抗体和游离的荧光色素。分离球形蛋白使用排除极限为20 000~50 000的凝胶介质和细粒级凝胶(直径约50μm)。所需凝胶滤柱的大小可根据偶联反应的总体积×20来确定。依据厂家说明准备好滤柱,用20倍柱床体积的PBS灌注滤柱,直至缓冲

免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体

免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定,可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上,对抗原抗体反应进行定性和定位研究;或应用各种液相和固相免疫分析方法,对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗

HRP标记抗体的方法

   酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。  戊二醛二步法  1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。  2. 标记

酶标记抗体技术方法

   酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量

酶标记抗体技术方法

   酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量

免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术

实验方法原理目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200,RB200)。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合,标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧

新蛋白质交联抗体的标记和修饰使用方法

介绍现在的研究中,一个大生物分子与另一个大分子的共价结合,如抗体与酶或酶与DNA的共价结合,仍是研究人员实验中的重点之一。其中有几种方法可用于交联两个生物分子。一种常见的方法是使用一种小分子交联剂(如Sulfo-SMCC)。SMCC的一端有胺反应性NHS酯基与蛋白质的游离胺(-NH2)反应,另一端有

生物素标记蛋白操作方法

下面的操作方法可以使约3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合,对某些蛋白来说,生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS中透析或

生物素标记蛋白操作方法

下面的操作方法可以使约3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合,对某些蛋白来说,生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。 1.   溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS

生物素标记蛋白操作方法

1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白质量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白质的毫摩尔数。  2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg

酶标记抗体技术方法(三)

3. 结果判定:  除标记物IgG量的计算,略有不同以外,其余均同戊二醛法。  IgG量(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62  4. 试剂及器材:  (1) 0.1M NaIO4:称取241mg高碘酸钠(广州化学试剂厂,批号830602)溶于蒸馏水10ml中。  (2

酶标记抗体技术方法(二)

三、HRP标记抗体的方法  酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。  戊二醛二步法  1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白

酶标记抗体技术方法(一)

  酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质

简述酶标记抗体的方法步骤

  1、HRP标记抗体的方法  酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。  戊二醛二步法  原理  戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般zui多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FI

蛋白质标记

Biosynthetic labeling (Sefton Lab)Biotinylation of Antibody (Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl (ScienceXchange)Protein (

如何使用生物素标记抗体或蛋白?

生物素,是一个分子量只有244.31Da的小分子,经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合,不仅可以很好地保持大分子的生物活性,而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用,使其广泛应用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究。那么如何使用生物素标记抗体或蛋白呢?下面给大家分享一下。工具/原料• 10u

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用1

     用特定标签标记抗体已成为生物科学和医学研究中的重要且常规程序,标签的范围从视觉标记(例如荧光染料)到半抗原分子(例如生物素),标签的作用有增强免疫复合物和蛋白质-蛋白质相互作用的可见性,以及用于蛋白质的分离和纯化。        在确定选择哪种标签类型时,应侧重于抗体的下游应用。荧光标

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用3

       表2. ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂盒  名称 Ex(nm) Em(nm) 规格 货号 ReadiLink™xtra Rapid iFluor™350抗体标记试剂盒 344 4

全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用2

     方便的设计以取得最大的效果:         ReadiLink™快速抗体标记试剂盒利用胺反应性标记来制备共价标记的结合物。这些反应性标记选择性地靶向并结合至目标抗体上的伯胺(例如赖氨酸残基)。要标记您的抗体,只需将您的抗体溶液(浓度约1 mg / mL)与ReadiLink™

标记抗体的方法和对应的应用

荧光素标记荧光色素是最常用于标记抗体的标记物之一。荧光素经恰当的激发可发光,从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况,主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色,是一种非常好的亚细胞水平精确定位的方法。酶标记酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成,其应用范围非常广泛,结果即时可见、敏感性高,但较难应用

酶免疫技术抗体的酶标记方法

用于酶免疫技术的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前酶免疫技术检测中常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根过氧化

ACS-Nano:荧光成像膜蛋白标记方法揭示膜蛋白几何构型

  南通大学生命科学学院教师陈昌盛与德国弗莱堡大学合作,在活体细胞单分子层面构建出一种新型的荧光成像膜蛋白标记方法,可研究膜蛋白复合体的亚基组成及其几何构型。4月28日,相关研究成果《锌指蛋白介导的蛋白标记方法揭示膜蛋白的几何构型》在《美国化学学会纳米杂志》发表。  表达于细胞膜表面的膜蛋白一直以来

免疫球蛋白标记技术_125I标记单克隆抗体技术

实验方法原理氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠,在水溶液中生成次氯酸,为一种温和氧化剂,当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中,可将I2氧化为I+并结合到氨基酸上。如标记条件温和,标记后的McAb仍具有良好的结合活性,通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。实验材料McAb125I试剂、试剂盒磷酸缓冲液氯胺

靶蛋白的放射标记实验—酵母和细菌蛋白质代谢放射标记

实验材料细胞仪器、耗材基本培养基实验步骤1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基,于合适温度中度振荡培养过夜。2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物,继续温育至 107 细胞/ml (酵母)或对数期中期(细菌)。3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞,用无硫酸盐基本培养基

《自然化学》:标记蛋白质的有效新方法

  最近,奥胡斯大学的研究人员开发出一种更简单的方法,来构建DNA-蛋白质复合物。该方法可能加强疾病诊断相关的工作。  DNA与蛋白质——包括抗体相结合,提供了一种强有力的伙伴关系,可用于诊断技术、纳米技术和其他学科。DNA-蛋白质复合物——用DNA标记蛋白质,可用于诸如感光检测和生物材料可视化这样

酶标记抗体

酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量的酶(