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转基因植物检测的探针制备过程

转基因植物检测的探针制备以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液2μL,质粒 DNA10μL,限制性内切酶I 1μL,限制性内切酶Ⅱ 1μL,用手指轻弹管壁混匀,轻微离心,置37℃水浴中酶解过夜。(2)琼脂糖凝胶电泳分离①配制浓度为1.2%的琼脂糖凝胶。②向酶切反应的离心管内加入 5μL 溴酚蓝溶液,混匀,点样。③取 2μL 分子量标准 DNA 及 10μL 未经酶切的质粒 DNA,分别与 5μL 溴酚蓝混合上样。④50V 电压,电泳1.5h,取出凝胶置紫外灯下,根据相对分子质量标准 DNA 的大小及泳动距离找出探针片段。(3)探针片段回收①在紫外灯下,用小刀片将含探针片段的条带切下,置 1.5m......阅读全文

转基因食品的检测方法,你知道多少?

  从1996年转基因作物开始进行大规模商业化以来,它在全球的种植面积迅速扩大,目前全球转基因作物种植面积已达25亿公顷,同时转基因作物的种类和转基因性状也在不断丰富。但是转基因作物作为一种新物种,其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。我国于2

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合的转基因片段...

实验材料核苷酸                                         &n

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合转基因片段实验

实验材料核苷酸试剂、试剂盒冰水8-羟基喹啉秋水仙素固定剂酶解缓冲液仪器、耗材载玻片玻璃盖玻片解剖针及镊子实验步骤原位杂交的基本操作方法(图 14 .2 ) 演化自 Southern 杂交:标底是玻片上的染色体和细胞核,探针是带标记的待测 DNA 序列 [ 本书中即是转基因和对照,图 14.3(a)

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

“四位一体”检测技术模式探索食品安全检测新路径

  科技攻关  兔年春节前夕,由辽宁检验检疫局技术中心“辽宁省食品安全检测技术重点实验室”(以下简称重点实验室)承担完成的国家质检总局课题《食品中有毒有害物质残留监控关键技术研究》顺利通过科技成果鉴定。  该课题首次采用JAVA语言B/S架构,建立了一套包括国家、省、地方三级操作界面

辽宁“四位一体”检测技术 探索食品安全检测新路径

  兔年春节前夕,由辽宁检验检疫局技术中心“辽宁省食品安全检测技术重点实验室”(以下简称重点实验室)承担完成的国家质检总局课题《食品中有毒有害物质残留监控关键技术研究》顺利通过科技成果鉴定。  该课题首次采用JAVA语言B/S架构,建立了一套包括国家、省、地方三级操作界面和

实质等同性(转录组学)实验

实验材料:小麦  试剂、试剂盒:β-巯基乙醇                                   &nb

实质等同性(转录组学)实验2

3.9 芯片数据介绍对简单的实质等同性实验来说,一个比较转基因系与对照之间基因表达的散点图就已足够了。文献 [ 5 ] 中参与两个实验的样品都标注在图15. 2中。结果用 GeneSpring 软件包显示,绘制了每组比较小麦系之间每个基因成对的平均强度,并突出显示少数感兴趣的基因(统计上显著差异表达

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合的转基...(一)

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合的转基因片段实验实验材料 核苷酸试剂、试剂盒 冰水8-羟基喹啉秋水仙素固定剂酶解缓冲液仪器、耗材 载玻片玻璃盖玻片解剖针及镊子实验步骤 原位杂交的基本操作方法(图 14 .2 ) 演化自 Southern 杂交:标底是玻片上的染色

分子标记

内容:一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来,植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的,当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时,表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状,如

转基因植物的分子检测与鉴定方法(二)

1.1.2.2  降落PCRTD-PCR是一种在一个反应管或少数几个反应管中通过一系列退火温度逐渐降低的反应循环来达到最佳扩增目的基因的PCR方案。它通过体系自身的代偿功能弥补以反应体系和并非完美的循环参数所造成的不足。此策略保证了最初形成的引物模板杂交体具最强的特异性。尽管最后一些循环采

三种植物基因克隆的策略与方法

基因的克隆就是利用体外重组技术,将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列,确定染色体定位,阐明基因的生化功能,明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物  发育,生理生化,分子遗传等学科的迅速发展,使人们

三种植物基因克隆的策略与方法

基因的克隆就是利用体外重组  技术,将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列,确定染色体定位,阐明基因的生化功能,明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物发育,生理生化,分子遗传等学科的迅速发展,使人们

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合的转基...(二)

3.2 染色体制备无论是荧光染色还是 FISH,分裂期和分裂间期的染色体制备均于载物片上进行。建议使用蛋白水解酶对材料进行预处理,以去除细胞壁和细胞质,再将样品置于载玻片上,滴上乙酸,然后盖上玻片压片。所有操作均于室温下进行,除非是特殊说明。在洗涤和材料准备时使用小培养皿,方法见 2. 2 节。(

首届全国质谱分析学术研讨会大会报告(一)

  2014年4月26日,首届全国质谱分析学术研讨会在北京西郊宾馆盛大开幕。本届全国质谱分析学术研讨会由中国化学会、国家自然科学基金委员会联合主办,中国化学会质谱分析专业委员会和清华大学化学系/分析中心联合承办。来自79个单位的426名科研工作者参加了此次盛会,与会者汇集了院士、杰青、千人

植物基因转化常用方法-4

1.2 其它的基因附加工程在水稻、棉花、马铃薯、番茄和其它作物上也进行了δ-内毒素工程,获得昆虫抗性也不仅仅是指有着一种方法。蛋白酶抑制剂也是较好的选择,它可以一只昆虫肠道内的蛋白酶活性,阻止或减缓害虫生长,许多植物能产生蛋白酶抑制剂,如豇豆和common bean, 他们的基因

与巴基斯坦科学基金会合作研究项目初审结果发布

   2016年度国家自然科学基金委员会与巴基斯坦科学基金会合作研究项目初审结果的通知  经公开征集,2016年度国家自然科学基金委员会(NSFC)与巴基斯坦科学基金会(PSF)共收到合作研究项目申请191项。根据我委相关规定,经过初步审查,并与巴方核对清单,确定有效申请为168项,现将通过初审的项

2011中韩NSFC—NRF合作交流项目初审结果公布

  2011年国家自然科学基金委员会(NSFC)与韩国国家研究基金会(NRF)将共同资助合作交流项目。经公开征集,根据国家自然科学基金委员会有关规定并与NRF核对申请项目清单,共有以下91项申请通过初审:序号科学部编号项目名称申请人姓名依托单位韩方申请人韩方单位类别111110004黎曼与伪黎曼几何

食品"缉毒"技术综述(二)

2.限制通行基质(RAM) RAM用于分析药物和农药中的杂质和代谢物,最大的优点是可以直接进样。现在用得最普遍的是Dual-mode packings吸附剂。这个吸附剂外层是亲水的吸附剂层,内层是疏水的吸附层,有机化合物留在内层。RAM-SPE用于分析人血或其他蛋白质含量高的样品。RA

07年国家质检总局“科技兴检奖”拟奖目录公示公告

2007年度国家质量监督检验检疫总局“科技兴检奖”评审工作已经结束,共评审出拟奖项目202项,现予以公示。自公示之日起1个月内为公示期。任何单位和个人对本公告公示的项目有异议,均可在公示期内,以书面形式向国家质量监督检验检疫总局科技司科研管理处提出。    &

与比利时弗兰德研究基金会合作研究项目初审结果

2018年度国家自然科学基金委员会与比利时弗兰德研究基金会合作研究项目初审结果通知 根据国家自然科学基金委员会(NSFC)与比利时弗兰德研究基金会(FWO)双边合作协议,2018年双方共同征集和资助中比合作研究项目。经过公开征集,我委共收到项目申请116项,经初步审查并与比方核对清单,确定

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例

  活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,今天,生物发光标记物可以标记到任何一种基因上,使对基因功能的

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例

 活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,今天,生物发光标记物可以标记到任何一种基因上,使对基因功能的全

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例

   活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,今天,生物发光标记物可以标记到任何一种基因上,使对基

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例    活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或D

RNAi相关术语

1.RNAi :(RNA interference)RNA干扰一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi ,也译作RNA干预或者干涉)。它也是体内抵御外在感