转基因植物检测的探针制备过程
转基因植物检测的探针制备以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液2μL,质粒 DNA10μL,限制性内切酶I 1μL,限制性内切酶Ⅱ 1μL,用手指轻弹管壁混匀,轻微离心,置37℃水浴中酶解过夜。(2)琼脂糖凝胶电泳分离①配制浓度为1.2%的琼脂糖凝胶。②向酶切反应的离心管内加入 5μL 溴酚蓝溶液,混匀,点样。③取 2μL 分子量标准 DNA 及 10μL 未经酶切的质粒 DNA,分别与 5μL 溴酚蓝混合上样。④50V 电压,电泳1.5h,取出凝胶置紫外灯下,根据相对分子质量标准 DNA 的大小及泳动距离找出探针片段。(3)探针片段回收①在紫外灯下,用小刀片将含探针片段的条带切下,置 1.5m......阅读全文
转基因植物检测的探针制备过程
转基因植物检测的探针制备以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液
“DNA探针”的制备过程
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别
以大肠杆菌为材料探讨转基因植物检测的探针制备方法
以含中间载体质粒的大肠杆菌材料为例进行介绍。(一)中间载体质粒 DNA 提取(略)(二)质粒 DNA 限制酶切及探针片段回收1、操作(1)限制性内切酶消化在0.5mL Eppendorf 管中,按如下顺序及用量加入试剂,建立 20μL 酶切体系:无菌蒸馏水6μL,10倍缓冲液2μL,质粒 DNA10
沙门氏菌探针检测法的检测过程
1、样品制备①前增菌 在非选择性培养基中对试样进行前增菌使沙门氏菌开始生长。前增菌方法因产品类型而不同,但必须按 AOAC967.26A 或《细菌分析手册》现行版执行。②选择性增菌 按常规培养方法分别移取培养后的前增菌的培养物1mL 转种于装有10mL 亚硒酸盐胱氨酸肉汤管中(预热至35℃)和装
cDNA－探针的制备方法
首先需分离纯化相应mRNA，这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到，如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后，在逆转录酶的作用下，就可以合成与之互补的DNA(即cDNA)，cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序，但内含子已在加工过程中切除。
简述基因探针的制备
进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针前，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外
DNA探针的制备方法
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针，常常是比较烦琐的。以细菌为例，细菌的基因组大小约为5×106碱基，约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针，通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法，即将细菌DNA切成小片段后（如用限制性内切酶做不完全水解）分别
基因探针的制备－方法
进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外重组
转基因植物TETR基因PCR检测试剂盒样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。。也可以选购本公司的一管式病毒DNAOUT或其升级版柱式病毒 DNAOUT。本试剂盒免费赠送15次DNA病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAOUT的成分)。稀释阳性对照(以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标
基因探针的制备相关介绍
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针前,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将
基因组探针的制备方法
进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外重组
PCR扩增制备带标记探针
实验概要用标记脱氧单核苷酸部分代替PCR反应体系中的脱氧核苷酸（一般是带标记的dUTP代替dTTP），经PCR扩增后标记基团随机搀入扩增产物－DNA探针中。这样使探针浓度高，可检测标记基团量多，灵敏度高，与缺口平移法制备探针相比，具有方便简捷的特点，并且由于具高灵敏度因此在检测低丰度，低拷贝数的目的
转基因植物Gus报告基因的检测
一、原理Gus (b-glucuronidase)基因作为一种报告基因，在植物遗传转化研究中有广泛的用途。Gus基因来自于大肠杆菌，编码b－葡聚糖苷酶（一种水解酶），可催化底物5－溴－4－氯－3－吲哚葡聚糖醛酸苷（5－bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为
生物素酰化探针的制备实验
切口平移法 随即寡核苷酸引物合成法 实验材料 DNA 试剂、试剂
高地辛标记的DNA探针制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒 TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵 乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材 SpeedVac 旋转浓缩器
关于禽流感基因探针制备的介绍
将禽流感病毒H9N2亚型毒株核蛋白(NP)基因3′端较为保守的、约350bp的编码序列通过限制性内切酶Hae¸；切割、分离后,用随机引物法制备Digoxigenin2112dUTP标记探针。测定该探针的浓度为100Lgö；ml。特异性试验发现该探针只能与实验室构建的、含有NP基
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
试剂、试剂盒TE牛肠碱性磷酸酶缓冲液T4 多核苷酸激酶缓冲液TBE 加样缓冲液TBE质粒 DNA合适的限制酶粉 氯仿氯仿 异戊醇（3-甲基-1-丁醇）乙醇牛肠碱性磷酸酶[γ-32P]ATPT4 多核苷酸激酶乙酸铵乙酸钠丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸铵TEMED仪器、耗材SpeedVac 旋转浓缩器实验步骤
高地辛标记的DNA探针制备实验
基本方法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
生物素酰化探针的制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 DNA聚合酶dNTP2-疏基乙醇生物素甘油NaClEDTASDS无水乙醇仪器、耗材 注射器电泳仪离心机培养箱实验步骤 1. 混合以下物质于100 μl 反应体积：（1）10 μl 10×大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ缓冲液（2）10 μl 0.5 mmol/l 3dNTP
寡核苷酸探针的制备方法
寡核苷酸探针是人工合成的，与已知基因DNA互补的，长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量，也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列，并用化学方法合成。
DNA－酶－I－足迹探针的制备实验
DNA 酶 I 足迹探针的制备实验 试剂、试剂盒 TE 牛肠碱性磷酸酶缓冲液 T4 多核苷
荧光原位杂交（FISH）探针的制备
实验概要本实验介绍了荧光原位杂交（FISH）探针的制备原理及技术。实验原理染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合，这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。其基础是Southern blot原理，以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针，探针和
蛋白芯片技术的探针的制备方法
低密度蛋白质芯片的探针包括特定的抗原、抗体、酶、吸水或疏水物质、结合某些阳离子或阴离子的化学集团、受体和免疫复合物等具有生物活性的蛋白质。制备时常常采用直接点样法，以避免蛋白质的空间结构改变。保持它和样品的特异性结合能力。高密度蛋白质芯片一般为基因表达产物，如一个cDNA文库所产生的几乎所有蛋白质均
转基因植物的分子检测与鉴定方法（二）
1.1.2.2 降落PCRTD-PCR是一种在一个反应管或少数几个反应管中通过一系列退火温度逐渐降低的反应循环来达到最佳扩增目的基因的PCR方案。它通过体系自身的代偿功能弥补以反应体系和并非完美的循环参数所造成的不足。此策略保证了最初形成的引物模板杂交体具最强的特异性。尽管最后一些循环采用的退火温
转基因植物的分子检测与鉴定方法（三）
3 转基因植株外源基因表达情况的检测与鉴定尽管在mRNA水平也能一定程度地研究外源基因的表达，但存在mRNA在细胞质中被特异性地降解等情况，mRNA与表达蛋白质的相关性不高(相关系数低于0.5)，基因表达的中间产物mRNA水平的研究并不能取代基因最终表达产物的研究。转基因植株外源基因表达的产物一般
转基因植物的分子检测与鉴定方法（四）
4.2 试纸条技术与ELISA原理相似，不同之处是以硝化纤维膜代替聚苯乙烯反应板为固相载体。先将特异性抗体吸附在膜上，将膜放入混有样品的溶液中，蛋白质随着液相扩散，遇到抗体，发生抗原-抗体反应，通过阴性对照筛选阳性结果，并给出转基因成份含量的大致范围。试纸条方法是一种快速简便的定性检测方法，将试纸条