常用DAN探针制备的方法介绍光敏生物素标记
光敏生物素标记(photobiotin labeling)是Forster(1985)等报道的核酸探针制备方法。光敏生物素是一种可用光照活化的生物素衍生物,它的乙酸盐很容易溶于水,在水溶液中将光敏生物素乙酸盐与需要标记的核酸混合,用强的可见光照射,就可将生物素标记在单链或双链的 DNA 或 RNA 上,形成稳定的共价结合。大约每100～150个残基结合一个生物素,这种程度的标记不会影响杂交。目前有许多跨国公司如美国的Sigma、西德的 Serva、澳大利亚的 Bresatec 等均有商品化光敏生物素,以及其标记探针试剂盒供应。我国马立等人也研制出了光敏生物素,并首次合成了带臂的光敏生物素,提高了检测灵敏度。与其他方法相比,用光敏生物素标记核酸,具有以下优点:(1)方法简便易行、快速可靠、易于重复,不需特殊试剂,只需在水溶液中直接光照标记,因光照需要一定强度,马立等人已成功试制出光敏生物素光照标记用灯。(2)适用面广,单链、双链 ......阅读全文
核酸探针标记的实验过程
实验原理分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将
DNA探针的标记实验
探针标记法 实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一
关于探针标记的基本简介
探针是能与特异靶分子反应并带有供反应后检测的合适标记物的分子。利用核苷酸碱基顺序互补的原理，用特异的基因探针即识别特异碱基序列的有标记的一段单链DNA（或RNA）分子，与被测定的靶序列互补，以检测被测靶序列的技术叫核酸探针技术。探针制备就是将目的基因进行标记。特异性探针有三种形式——cDNA、R
DNA探针的标记实验
核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否存在互补链，可分为单链和双链探针；根据放射性标记物掺入情况，可分为均匀
常用来制备胶体金颗粒的方法介绍
根据不同的还原剂可以制备大小不同的胶体金颗粒。常用来制备胶体金颗粒的方法如下。1．枸橼酸三钠还原法（1）10nm胶体金粒的制备：取0.01%HAuCl4水溶液100ml，加入1%枸橼酸三钠水溶液3ml，加热煮沸30min，冷却至4℃，溶液呈红色。（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.01%HAuCl
随机引物法标记探针
实验概要本实验探针标记采用TAKARA公司的随机引物标记试剂盒Ver.2。实验步骤1．于1.5ml离心管中加入5μl H2O，2μl引物(N6)，5μl DNA(0.1μg-1μg)。2．充分混匀，98°C 3分钟。3．离心1秒钟，将离心管盖上的汽化水甩下。4．加入2.5μl dNTPs(各2.5m
免疫细胞化学法的常用的生物素介绍
亲合方法有:标记亲合素-生物素法(labelled avidin-biotin method LAB法)、桥连亲合素-生物素法（bridged avidin-biotin method, BAB法)及亲素-生物素-过氧化物酶复合物法(avidin-biotin-peroxidase complex
抗生物素蛋白生物素染色方法的功能介绍
中文名称抗生物素蛋白-生物素染色英文名称avidinbiotin staining定 义通过标记抗生物素蛋白与生物素高亲和性结合，检测大分子的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
蛋白芯片技术的探针的制备方法
低密度蛋白质芯片的探针包括特定的抗原、抗体、酶、吸水或疏水物质、结合某些阳离子或阴离子的化学集团、受体和免疫复合物等具有生物活性的蛋白质。制备时常常采用直接点样法，以避免蛋白质的空间结构改变。保持它和样品的特异性结合能力。高密度蛋白质芯片一般为基因表达产物，如一个cDNA文库所产生的几乎所有蛋白质均
关于禽流感基因探针制备的介绍
将禽流感病毒H9N2亚型毒株核蛋白(NP)基因3′端较为保守的、约350bp的编码序列通过限制性内切酶Hae¸；切割、分离后,用随机引物法制备Digoxigenin2112dUTP标记探针。测定该探针的浓度为100Lgö；ml。特异性试验发现该探针只能与实验室构建的、含有NP基
荧光原位杂交及其在人类基因组研究中的应用（二）
1.3信号的检测在洗去未杂交和错配对的探针分子之后，载片培养在免疫荧光试剂中，使其在探针杂交的位置上产生荧光信号，偶联了荧光素分子的抗生物素蛋白被用来标记已掺入到探针分子中的生物素。地谷新，二硝基苯，AFF和硫磺酸盐则可以用相应地标上了荧光素地抗免疫球蛋白来标记。 最常用地荧光素分子有FITC，r
如何使用生物素标记抗体或蛋白？
生物素，是一个分子量只有244.31Da的小分子，经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合，不仅可以很好地保持大分子的生物活性，而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用，使其广泛应用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究。那么如何使用生物素标记抗体或蛋白呢？下面给大家分享一下。工具/原料• 10u
胶体金的制备常用方法
胶体的制备一般采用还原法,常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。2.1柠檬酸三钠还原法制备金溶胶取0.01%氯金酸水溶液100mL加热至沸,搅动下准确加入1%柠檬酸三钠(Na3C6H5O7·2H2O)水溶液0.7mL,金黄色的氯金酸水溶液在2min内变为紫红色,继续煮沸15min
常用的几种分子标记
RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段，一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段，利用凝胶电泳分开扩增的片段，从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术，并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术，因此简便易行。 SSR 真核生物
蛋白质芯片技术探针的制备方法
低密度蛋白质芯片的探针包括特定的抗原、抗体、酶、吸水或疏水物质、结合某些阳离子或阴离子的化学集团、受体和免疫复合物等具有生物活性的蛋白质。制备时常常采用直接点样法，以避免蛋白质的空间结构改变。保持它和样品的特异性结合能力。高密度蛋白质芯片一般为基因表达产物，如一个cDNA文库所产生的几乎所有蛋白质均
生物素链霉抗生物素蛋白系统的方法介绍
中文名称生物素-链霉抗生物素蛋白系统英文名称biotin streptavidin system定 义利用生物素与链霉抗生物素蛋白有很高亲和结合能力设计的检测分析系统。与生物素-抗生物素蛋白系统相似，但链霉抗生物素蛋白表面所带正电荷少，且不含糖基，在实验中非特异性结合远低于抗生物素蛋白。应用学科生
切口平移法标记探针的步骤
(1)模板 DNA 的制备用限制性内切酶将载体上的外源 DNA 酶切并进行琼脂糖凝胶电泳回收纯化,琼脂糖残留可抑制切口平移反应,因此彻底清除琼脂糖至关重要。也可以用带有外源 DNA 克隆片段的重组载体为模板来切口平移制备探针。(2)切口平移标记将模板 DNA 水溶液、DNase Ⅰ、未标记的三磷酸单
关于Southern杂交的探针标记简介
用于Southern印迹杂交的探针可以是纯化的DNA片段或寡核苷酸片段。探针可以用放射性物质标记或用地高辛标记，放射性标记灵敏度高，效果好；地高辛标记没有半衰期，安全性好。人工合成的短寡核苷酸可以用T4多聚核苷酸激酶进行末端标记。探针标记的方法有随机引物法、切口平移法和末端标记法。
一文搞定恒温扩增——RPA/RAA
分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种，今天就回顾RPA/RAA，让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问，决定开小灶，包会！哈哈~~为了确保大家所认知的基本概念是一致的，请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术，RP
搞定恒温扩增分子诊断（RPA/RAA）
分子诊断技术今日不同以往，着实借力突飞猛进，恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种，今天就回顾RPA/RAA，让大家一文通俗搞定！为了确保大家所认知的基本概念是一致的，请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术，RPA, recombinase polymeras
地高辛配基随机标记DNA探针
1．标记DNA探针 每次标准的反应可标记10ng至3μg线性的DNA，也可标记更大量的DNA，但所有的成分和体积要相应增加。 （1）DNA探针热变性，煮沸10min，迅速冷却于冰/乙醇中5min以上，待用。 （2）取Eppendorf管（1.5ml）置于冰上，加下列及试剂：
双链DNA探针标记法
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连
末端标记DNA探针技术
现以Klenow片段标记3'末端为例说明末端标记的方法。1、材料：待标记的双链含凹缺3'末端的DNA。2、设备：高速台式离心机，水浴锅等。3、试剂：(1)3种不含标记的dNTP各为200mmol/L。(2)合适的限制酶。(3)[α-32P] dNTP:3000Ci/mmol, 10m
生物素酰化探针的检测实验——比色法
与放射性标记探针的比活不同，生物素标记探针的可检出性在于每千碱基对中掺入的生物素分子的数量，它可用比色法检测。实验材料DNA试剂、试剂盒磷酸酶缓冲液封阻液牛血清蛋白TENBT仪器、耗材离心机分光光度计摇床实验步骤1. 用DNA稀释缓冲液，稀释生物素酰化标准DNA，浓度为0、1、2、5、10和20
关于染色体易位检测的检测方法介绍
1．系谱分析法 系谱分析法不仅可以确定患者是否有基因病，而且对确定遗传方式也有一定作用。该分析法以已被确认的患者为线索，对系谱作回顾性调查，追踪各个家族成员的情况，包括亲属间相互关系、性别、年龄、健康状况、婚育史、生育史等，综合所有信息运用国际通用的系谱符号绘制成系谱图。根据绘制出的图解和各种
探针的非放射性标记技术2
一；仪器：同上 二：试剂：ECL标记盒，其余同上 三：操作：1：将待标记的DNA稀释至10ng/ml 2：将上述DNA在100℃5分钟，冰浴5分钟 3：离心后加入10ulECL标记混合物，混合均匀 4：加10ul戊二醛溶液混匀，37℃20分钟，此反应
简述基因探针的制备
进行分子突变需要大量的探针拷贝，后者一般是通过分子克隆（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针前，应先制备基因组文库，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外
“DNA探针”的制备过程
基因组DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法,即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别
DNA探针的种类及其特点
核酸探针按性质划分可分为基因组 DNA 探针、cDNA 探针、RNA 探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类。作为诊断试剂,较常使用的是基因组 DNA 探针和 cDNA 探针。其中,前者的应用最为广泛,它的制备可通过酶切或聚合酶链反应(PCR)从基因组中获得特异的 DNA 后将其克隆到质粒或噬菌体载体中
原位杂交组织化学实验技术6
二、快速原位杂交细胞化学技术 原位杂交免疫细胞化学技术存在的难点之一是实验手续繁琐，实验周期长。国外Liesi等（1986）和国内学者何彬等应用光敏生物素-链亲合素（Biotin-streptavidin）胶体金系统进行原位杂交，得到了快速满意的结果，全部实验可在数小时内完成。 作用把含某种多肽