利用PCR技术诊断遗传病的途径和方法
(一)PCR技术直接诊断遗传病 对于由基因缺失突变引起的遗传病可利用缺失区域还侧的DNA序列引物直接扩增 该区域,看有无特异性的扩增产物,这对缺失部位固定的片段检测非常准确简便,只 需一对引物即可完成,而对于哪些缺失部位异质的基因则可利用多对引物进行多重 PCR,然后检查缺失带.对基因的重排来说,可通过用RT-PCR检测mRNA的融合情况来检 出,括入亦可用PCR方法来检出,当点突变影响到限制内性切酶切点时,可用PCR-RFL P进行分析,即将扩增产物用适当的内切酶切割,然后据电泳图谱复制判断有无内切 酶切点的改变,它比传统的RFLP检测法快速简便,且不受同位素的危害.若突变优点 及性质已知.可用PCR-ASO,3'特异PCR及引物镱争法进行确定,而对于突变优点不清 楚或突变优点多变的基因则可用PCR-SSCP,DGGE,CDGE,TGGE,PCR-RNSE切割,化简 错配切割,异源双链分析长久法进行筛选与遗传......阅读全文
PCR在临床检验中的应用（四）
遗传病是由于遗传基础异常而引起的疾病，人类遗传病约有3000多种，患者占总人口数的10％。遗传病大概可分为单基因、多基因及染色体遗传病。常用诊断方法有家系谱分析、染色体检查（特别是显带法）、生物化分析等。随分子生物学发展，基因诊断愈来愈表现出其优越性，PCR技术是基因诊断的主要技术之一，为快速、准确
提高玉米光能利用率和产量的途径
玉米群体的冠层特性与光能利用和玉米产量有非常密切的关系。冠层结枃特性的指标主要有茎叶夹角、叶向值、叶面积、叶面积指数、干物重等，而且随着植株生长进程的发展，群体冠层特性会不断变化。因此，在玉米试验过程中，冠层测量研究对育种人员来说至关重要。 有实践证明：高产品种在合理的群体结构条件下，叶
通过2－△△CT－方法,利用实时定量PCR技术分析相对基...（二）
要使△△CT计算方法有效，目标序列和内参序列的扩增效率必须相等。看两个反应是否具有相同的扩增效率的方法是看他们模板浓度梯度稀释後扩增产物△CT如何变化。图1 显示的是 cDNA 样品在 100 倍稀释范围内的实验结果。对于每一个稀释样本，都用GAPDH 和c-myc 特异的荧光探针及引物进行扩增。计
通过2－△△CT－方法,利用实时定量PCR技术分析相对基...（一）
通过2 -△△CT 方法,利用实时定量PCR技术分析相对基因表达差异摘要:现在最常用的两种分析实时定量 PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的 表达差异。 2 - △△ CT
通过2－△△CT－方法,利用实时定量PCR技术分析相对基...（三）
2. 2－△Cf方法2.1. 2－△Cf方法的推导通过内标RNA 可以对加入 RNA 的量的差异进行校正。2－△△CT方法的数据分析的一个特点就是能够利用实时PCR 实验的一部分数据来完成这种校正。在其它的方法不能定量初始 RNA 量的时候：例如，在能得到的 RNA 量非常有限的时候或者需要处理高通
遗传病与肿瘤的基因诊断
从DNA水平上寻找确诊遗传病的指标或探讨遗传病和肿瘤的病因等方面，已取得很大成绩，这对产前诊断，早期确诊和突变基因携带者的检出等都有重要意义。所用的方法大体有以下几种。 一、分离基因进行结构分析 利用DNA离体转化，制备探针，制备基因文库进行筛检，最后鉴定载体中插入DNA片段的特性等一系列技术，
遗传病与肿瘤的基因诊断
从DNA水平上寻找确诊遗传病的指标或探讨遗传病和肿瘤的病因等方面，已取得很大成绩，对产前诊断，早期确诊和突变基因携带者的检出等都有重要意义。所用的方法大体有以下几种。 一、分离基因进行结构分析 利用DNA离体转化，制备探针，制备基因文库进行筛检，最后鉴定载体中插入DNA片段的特性等一系
利用PCR技术获取目的基因的前提是什么
利用PCR技术获取目的基因的前提要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。
分子标记用于疾病诊断和遗传病连锁分析
1980年，Botstein等成功的将PFLP技术用于镰刀型贫血症的诊断分析，开创了基因诊断的先河。PFLP是以孟德尔方式遗传，因此可以作为染色体上致病基因座位的遗传标志。许多与相连锁的致病基因得以定位。小卫星和微卫星因其高度多态性而被广泛用于疾病诊断和遗传病的连锁分析。随着高通量SNP检测技术
不对称PCR技术的定义和方法介绍
不对称PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一对引物，PCR扩增后产生大量的单链DNA(SSDNA)。这对引物分别称为非限制引物与限制性引物，其比例一般为50——100:1。在PCR反应的最初10——15个循环中，其 扩增产物主要是双链DNA，但当限制性引物(低浓度引物)消耗完后，非限制
新诊断方法可避免试管婴儿遗传病
中美研究人员12月28日在新一期美国《国家科学院学报》上报告了一种成本低、容易操作且适用范围广的诊断新方法，只需利用单个细胞便可检测准备植入母体内胚胎的遗传缺陷，从而避免做试管婴儿的夫妇将疾病遗传给下一代。 这项研究发表在新一期美国《国家科学院学报》上。 报告作者之一、美国科学院院士、哈佛大
动物实验的接种途径和方法
动物实验的接种途径和方法是检验技师考试的内容，医学教育网搜集整理相关内容供大家参考。 动物实验的接种途径和方法包括： ①皮内接种：通常以背部皮肤为宜。 ②皮下接种：选用腹壁、背部或腹股沟等处。 ③肌肉接种：一般选用臀部和大腿部肌肉，若为禽类以胸部肌肉为宜。 ④静脉接种：家兔以耳静脉外缘为
单倍体育种的途径和方法
1.利用单性生殖获得单倍体(1)利用自然孤雌生殖①从双生苗中选择②从嵌合体中选择(2)利用远缘花粉授粉(3)延迟授粉(4)利用理化因素诱变(5)利用诱发基因及核质互作2.利用染色体有选择的消失3.细胞离体培养(1)花药培养(2)未授粉的子房和胚珠培养
利用实时定量－PCR技术通过2－△△CT－方法分析相对基因表达差
Kenneth J. Livak and Thomas D. SchmittgenDepartment of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy.Washington State University, Washington 99164-6534
PCR技术（十）：PCR产物克隆方法
平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR
PCR技术应用二：－骨肿瘤诊断
骨肿瘤较罕见，恶性骨肿瘤只占全身恶性肿瘤的1%，男多于女，性别比约为1.6 ∶1，均好发于10-30岁间，良性者以骨软骨瘤最多，依次为骨巨细胞瘤、内生软骨瘤 等，恶性者以骨肉瘤最多，依次为软骨肉瘤、纤维肉瘤等.骨恶性肿瘤的发生机理目 前认为是癌基因显性作用与抗癌基因失活的结果，是多种癌基因多阶段
反向PCR（Inverse－PCR）技术的定义和特点
1.概述：反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物
实验动物染毒途径和技术3
经皮肤染毒的目的有两种。一种是经皮染毒毒性试验，如经皮Lao测定常用大鼠，皮肤致癌试验常用小鼠‘另一种是皮肤刺激和致敏试验，皮肤刺激试验常用兔和豚鼠，皮肤致敏试验用豚鼠。 被毛的去除：试验前用机械法(剪剃毛)或化学法(硫化胸或硫化钡)脱毛。对兔和啮6类常用的脱毛剂处方为：①硫
实验动物染毒途径和技术2
实验动物 呼吸量 最低呼吸量 静式染毒2h可放动物数
实验动物染毒途径和技术4
（三)经皮肤染毒> 经皮肤染毒的目的有两种。一种是经皮染毒毒性试验，如经皮Lao测定常用大鼠，皮肤致癌试验常用小鼠‘另一种是皮肤刺激和致敏试验，皮肤刺激试验常用兔和豚鼠，皮肤致敏试验用豚鼠。 被毛的去除：试验前用机械法(剪剃毛)或化学法(硫化胸或硫化钡)脱毛。对兔和啮6类常用的脱毛剂处方为：
实验动物染毒途径和技术1
在毒理学试验中染毒途径的选择，应尽可能模拟人在接触该受试物的方式。最常用的染毒途径为经口、经呼吸道；经皮及注射途径。染毒的途径和方法根据实验目的、实验动物种类和药物剂型等情况确定。不同途径的吸收速率，一般是静脉注射>吸入>肌内注射>腹腔注射>皮下注射>经口>皮内注射>其他途径(如经皮等)
分子诊断发展简史
沃森和克里克提出DNA双螺旋结构，“生命之谜”被打开，经过PCR技术、生物芯片技术、DNA测序技术之后分子诊断正在快速成为人类疾病诊断的最有效方式之一。分子诊断发展四阶段第一阶段：利用分子杂交技术进行遗传病基因诊断：通过婴儿胚胎期进行产前诊断，超早期预知某些疾病发生、发展和预后。1978年著名没计划
分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术的区别、原理（二）
二、核酸序列测定 测序反应是直接获得核酸序列信息的唯一技术手段,是分子诊断技术的一项重要分支。虽然分子杂交、分子构象变异或定量PCR技术在近几年已得到了长足的发展,但其对于核酸的鉴定都仅仅停留在间接推断的假设上,因此对基于特定基因序列检测的分子诊断,核酸测序仍是技术上的金标准。 (一)第1代
分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术的区别、原理（一）
分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料，用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常，从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常，以确定受检者有无基因水平的异常变化，对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。通俗简单
PCR技术的原理与方法
PCR定义PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DN
免疫PCR技术材料方法和注意事项（一）
（一）材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备 基存免疫球蛋白（如IgG、IgM）的Fc片段上有糖在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。 （1） 将纯化的抗体（IgM或IgG， 0.1~1.0ml）在标记缓冲液（0.1Mol/L NaAc，pH值5.
免疫PCR技术材料方法和注意事项（二）
4. 免疫PCR 将生物素标记的抗体与亲和素按等分子浓度混合于含有1mg/mlBSA的PBS中，室温孵育30min，再加入两倍分 （1） 按常规ELISA方法，用饱和缓冲液稀释抗原，加到96孔塑料板或0.5mlPCR管中，4℃过夜。 （2） 用PBS洗三次，然后每孔加2
荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法
接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反
大脑无创性检测:－数字PCR技术诊断和追踪脑肿瘤
脑肿瘤诊断往往涉及侵袭性神经外科手术，对于临床医生而言能够在不需要活体组织检测的条件下监视脑肿瘤是一个福音，这让他们能追踪和尽早治疗恶性脑肿瘤。 美国马萨诸塞州总医院(MGH)研究人员研发出基于数字PCR的、检测脑肿瘤相关IDH1突变体的分子诊断方法。该公司的Xandra B
巢氏PCR（Nested－PCR）技术的定义和特点
1.定义：也称套式PCR是指利用两套PCR引物（巢式引物）进行两轮PCR扩增反应。在第一轮扩增中，外引物用以产生扩增产物，此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。在这种技术中，首先用一对外引物进行第1轮PCR，然后再使用第1对引物扩增的DNA 序列内部的一对引物再次扩增。2.优点：由于巢式PCR反应