荧光蛋白的发光原理
绿色荧光蛋白是从水母体内发现的发光蛋白。分子质量为26kda,由238个氨基酸构成,第65~67位氨基酸形成发光团,是主要发光的位置。其发光团的形成不具物种专一性,发出荧光稳定,且不需依赖任何辅因子或其他基质而发光。绿色荧光蛋白基因转化入宿主细胞后很稳定,对多数宿主的生理无影响,是常用的报道基因。荧光蛋白在某种定义下可以说是革新了生物学研究——运用荧光蛋白可以观测到细胞的活动,可以标记表达蛋白,可以进行深入的蛋白质组学实验等等。特别是在癌症研究的过程中,由于荧光蛋白的出现使得科学家们能够观测到肿瘤细胞的具体活动,比如肿瘤细胞的成长、入侵、转移和新生。原理Chudakov是抓住一个偶然的机会从而培育出这种穿透性超强的深红色荧光蛋白质的。他的一个同事在逛莫斯科宠物商店时发现了一只颜色深红的海葵,出于职业的直觉,他将海葵带了回来;然后,他们对海葵的荧光蛋白质分子进行诱变,最终得到了一种能够在生物体内稳定存在,同时能发出更明亮红光的蛋白......阅读全文
LSCM绿色荧光融合蛋白表达载体的构建
绿色荧光融合蛋白表达载体的构建 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP) 及其突变体能在各种不同的生物系统中表达,这对细胞生物学的研究具有重要意义。而荧光蛋白的折叠能力及其同细胞内蛋白的融合能力,使研究 者能直接在细胞体内观察到蛋白质的特性。研究者不需要把蛋白质经过
关于绿色荧光蛋白的发展历史介绍
1962年,已经有文献报道科学家从多管水母属的发光型水螅水母(luminous hydromedusan Aequorea)中提取到了具有生物发光性质的蛋白质也就是绿色荧光蛋白。到了上世纪70年代,对生物发光的现象才有了一些新的进展。有科学家研究了多管水母属生物发光系统的分子内能量转移。到了九十
黄色荧光蛋白的结构和功能特点
黄色荧光蛋白(Yellow Fluorescent Protein ,YFP)可以看做绿色荧光蛋白的一种突变体,最初来源于维多利亚多管水母( Aequorea victoria)。相对于绿色荧光蛋白,其荧光向红色光谱偏移,而这主要是由于蛋白203位苏氨酸变为酪氨酸。其最大激发波长为514 nm,最大
关于绿色荧光蛋白的名词解释
绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,简称GFP),是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色荧光。虽然许多其他海洋生物也有类似的绿色荧光蛋白,但传统上,绿色荧光蛋白(GFP)指首先从维多利亚多管发光水母中分离的蛋白质。这种蛋白质最早是
绿色荧光蛋白(GFP)标记亚细胞定位
一、原理利用绿色荧光蛋白(GFP)来示踪胞内蛋白的技术。利用GFP融合蛋白技术来进行活细胞定位研究是目前较为通行的一种方法,在光镜水平进行研究,不需要制样,没有非特异性标记的影响。并且GFP的分子量为27kD,经激光扫描共聚集显微镜激光照射后,可产生一种绿色荧光,从而对蛋白质进行精确定位。激光扫描共
量子产率超过90%荧光标记的最强荧光——藻胆蛋白
藻胆蛋白是源自微藻和蓝细菌的光合作用光捕获蛋白家族。这些蛋白质具有共价连接的线性四吡咯基团,称为藻胆素,其在捕获光能中起关键作用。在微藻和蓝细菌中,由这些藻胆素吸收的能量通过荧光共振能量转移(FRET)有效地转移到叶绿素色素用于光合作用反应。与化学合成荧光染料相比,藻胆蛋白由于其相对高的荧光量子产率
荧光素酶报告基因与绿色荧光蛋白(GFP)有什么区别
只能先就标题的问题谈谈我的认识。后面的追问我了解得也不全面。1。两者的结果检测方法不同。gfp绿色荧光蛋白,很直观,能够直接检到荧光,在普通的细胞培养条件下都能够观察到,对细胞的生命活动和其他并行的实验安排影响很小。荧光素酶报告基因使用起来比gfp多一个步骤,因为荧光素酶是个酶,不发荧光,发荧光的是
荧光素酶报告基因与绿色荧光蛋白(GFP)有什么区别
1。两者的结果检测方法不同。gfp绿色荧光蛋白,很直观,能够直接检到荧光,在普通的细胞培养条件下都能够观察到,对细胞的生命活动和其他并行的实验安排影响很小。荧光素酶报告基因使用起来比gfp多一个步骤,因为荧光素酶是个酶,不发荧光,发荧光的是它的底物,荧光素。荧光素在细胞里(要说萤火虫细胞我就不知道了
关于荧光蛋白的基本原理介绍
Chudakov是抓住一个偶然的机会从而培育出这种穿透性超强的深红色荧光蛋白质的。他的一个同事在逛莫斯科宠物商店时发现了一只颜色深红的海葵,出于职业的直觉,他将海葵带了回来;然后,他们对海葵的荧光蛋白质分子进行诱变,最终得到了一种能够在生物体内稳定存在,同时能发出更明亮红光的蛋白质。Chudak
GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些
检测方法:1、实验准备 Modulus单管型多功能检测仪 Blue荧光模块(P/N 9200-040) 微量适配器(P/N 9200-928) 纯化的rAcGFP1蛋白(Clontech,NO.632502) 200ul加样器与20ul加样器 TE Buffer (10 mM Tris-
Nature-Methods:评估荧光蛋白的光激活效率
光控的荧光探针,是对局部进行超高分辨率显微分析的核心。其中,荧光蛋白可以通过基因编码,实现与目的蛋白的1:1标记。所以,荧光蛋白探针特别适合于单分子计数。 近日,ICFO的科学家们首次在单分子水平上,确定了多个荧光蛋白的光激活效率,这一参数对于单分子计数非常重要。文章发表在一月五日的Nat
GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些?
检测方法:1、实验准备 Modulus单管型多功能检测仪 Blue荧光模块(P/N 9200-040) 微量适配器(P/N 9200-928) 纯化的rAcGFP1蛋白(Clontech,NO.632502) 200ul加样器与20ul加样器 TE Buffer (10 mM Tris-
关于荧光蛋白的最新研究进展-介绍
2012年12月11日,大阪大学教授永井健治领导的研究小组日前研发出一种可自主发光的蛋白,植入这种蛋白的癌细胞在实验鼠体内肉眼可见,这种发光蛋白未来或可应用到癌症的早期诊断中。此前的绿色荧光蛋白必须用紫外线照射才能发光,而这种新蛋白可自主发出亮光,有望在早期癌症诊断中发挥作用。 研究人员将一种
绿色荧光蛋白药物筛选应用研究
药物筛选 许多新发展的光学分析方法已经开始利用活体细胞来进行药物筛选,这一技术能从数量众多的化合物中快速筛选出我们所感兴趣的药物。基于细胞的荧光分析可分为三类:即根据荧光的密度变化、能量转移或荧光探针的分布来研究目标蛋白如受体、离子通道或酶的状态的变化。荧光探针分布是利用信号传导中信号分子的迁
GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些
检测方法:1、实验准备 Modulus单管型多功能检测仪 Blue荧光模块(P/N 9200-040) 微量适配器(P/N 9200-928) 纯化的rAcGFP1蛋白(Clontech,NO.632502) 200ul加样器与20ul加样器 TE Buffer (10 mM Tris-
细胞核蛋白的免疫荧光染色方法
细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%TritonX100通透10分钟,PBS洗三遍。4,与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,P
Nature-Methods:评估荧光蛋白的光激活效率
光控的荧光探针,是对局部进行超高分辨率显微分析的核心。其中,荧光蛋白可以通过基因编码,实现与目的蛋白的1:1标记。所以,荧光蛋白探针特别适合于单分子计数。 近日,ICFO的科学家们首次在单分子水平上,确定了多个荧光蛋白的光激活效率,这一参数对于单分子计数非常重要。文章发表在一月五日的Nat
细胞核蛋白的免疫荧光染色方法
细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%TritonX100通透10分钟,PBS洗三遍。4,与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,P
绿色荧光蛋白在信号转导中的应用
新近研究发现,某些突变的 GFP 能够发生荧光共振能量转移 (fluorescence resonance energy transfer,FRET)。FRET 是一种从荧光分子的激发状态到临近基态接受分子之间量子力学能量转移的现象。FRET 发生的前提条件是,荧光接受分子必须在荧光提供分子释放
绿色荧光蛋白离心菌体能看到绿色吗
本人亲身体验证明,真的可以看见,颜色类似于抹茶沙拉酱,破菌后可以看到明显的亮绿色。当然跟表达量也有关系,本人表达量为4mg/L菌液。
绿色荧光蛋白在自然生活中起到的作用
绿色荧光蛋的发光机理比荧光素/荧光素酶要简单得多。一种荧光素酶只能与相对应的一种荧光素合作来发光,而绿色荧光蛋白并不需要与其他物质合作,只需要用蓝光照射,就能自己发光。 在生物学研究中,科学家们常常利用这种能自己发光的荧光分子来作为生物体的标记。将这种荧光分子通过化学方法挂在其他不可见的分子上
科研人员研发出接头蛋白STING配体荧光探针
免疫治疗是延长肿瘤患者生存时间、提高生活质量的有效手段。环状鸟嘌呤核苷酸腺嘌呤核苷酸合成酶cGAS作为模式识别受体,在天然免疫信号通路中起到重要作用。在哺乳动物细胞中,cGAS与双链DNA分子结合后被激活合成2'3'-cGAMP,随后2'3'-cGAMP作为信使代谢物
GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹2
第二部分:免疫印迹染色[仪器、材料与试剂](一)仪器与器具1.电泳仪(要求为大电流低电压)2.电泳转移槽及转移夹3.水平摇床4.小塑料盒5.镊子6.搪瓷盘(二)材料1.醋酸纤维膜2.滤纸3.一次性塑料手套(三)试剂1.转移电泳缓冲液25mmo1/L Tris,192mmo1/L 甘氨酸,20%甲醇,
绿色荧光蛋白是怎样的一种物质
绿色萤光蛋白(green fluorescent protein),简称GFP,这种蛋白质最早是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助,
揭秘神奇荧光蛋白:让老鼠和猪也“发光”
据美国《连线》杂志报道,凭借在绿色荧光蛋白质(GFP)研究领域取得的重要成就,3名科学家上周最终问鼎诺贝尔化学奖,他们分别是马丁·查尔菲(Martin Chalfie)、钱永健(Roger Y. Tsien)和下村修(Osamu Shimomura)。绿色荧光蛋白质可以帮助科学家了解细胞机制如何工作
报告基因实验——荧光蛋白(FP)-的显微检测
实验材料活体组织仪器、耗材落射荧光显微镜汞灯实验步骤表达突光蛋白的材料一般首先用落射荧光显微镜(epi-fluorescent microscopy) 来观察 ,尤其当研究表皮上表达的荧光蛋白或者用反褶积软件去掉从焦点之外采集的荧光时[18]。然而,对于较厚的材料,必须使用共聚焦显微镜,因为它可以
GFP(绿色荧光蛋白基因)的免疫印迹1
[实验原理]免疫印迹(Western blotting 或 Immunoblotting)一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上,用得最多的材料
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白
在过去的五年中,荧光蛋白在监测体内生物学研究中,起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是zui早被我们应 用的荧光蛋白,但是随着时间的推移,现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富,包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋 白。它们都可以
美用生物荧光蛋白观察神经元内蛋白质运动过程
据物理学家组织网8月22日报道,最近,美国南加州大学一个研究小组利用从水母体内分离出的生物荧光蛋白,照亮了神经元内部并拍摄了一段视频,揭示了蛋白质在神经细胞区室内运动的情景,可“看到”蛋白质定向地通过神经元以及大脑重建的过程。相关论文最近发表在《细胞·报告》杂志上。 神经元内部区室分两种:轴突部
美用生物荧光蛋白观察神经元内蛋白质运动过程
网易探索8月26日报道 据物理学家组织网8月22日报道,最近,美国南加州大学一个研究小组利用从水母体内分离出的生物荧光蛋白,照亮了神经元内部并拍摄了一段视频,揭示了蛋白质在神经细胞区室内运动的情景,可“看到”蛋白质定向地通过神经元以及大脑重建的过程。相关论文最近发表在《细胞・报告》杂志上。