如何确定PCR效率

做一个标准曲线,5个标准品或者4个标准品,每个之间浓度相差10倍,然后根据得到的标准曲线计算你的斜率是不是接近3.3,越接近3.3,扩增效率就越接近100%,2.8~3.5之间都算可以了。一般的荧光定量PCR仪器有自动计算的功能,输入标准品浓度后,会计算出扩增效率是多少。......阅读全文

如何确定PCR效率

做一个标准曲线,5个标准品或者4个标准品,每个之间浓度相差10倍,然后根据得到的标准曲线计算你的斜率是不是接近3.3,越接近3.3,扩增效率就越接近100%,2.8~3.5之间都算可以了。一般的荧光定量PCR仪器有自动计算的功能,输入标准品浓度后,会计算出扩增效率是多少。

进口PCR仪可提高PCR科研效率

  进口PCR仪是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR基因扩增仪分为实时荧光定量PCR基因扩增仪,梯度PCR基因扩增仪,普通PCR基

pcr扩增效率怎么算

在网上搜到了两个计算realtime PCR扩增效率的公式,但相互不同,不知哪个才是正确的。请大家明辨!第一种计算: 第二种计算方法:两个都是通过标准曲线法计算扩增效率,其实是一样的,按照定义理解,完全扩增的话1条变2条,2条变4条,扩增效率200%,但一般通过软件计算都是提供第一种方法(用的比较多

pcr扩增效率怎么算

第一种计算: 第二种计算方法:两个都是通过标准曲线法计算扩增效率,其实是一样的,按照定义理解,完全扩增的话1条变2条,2条变4条,扩增效率200%,但一般通过软件计算都是提供第一种方法(用的比较多),扩增效率最大为100%。本质上两者是相同的。

pcr扩增效率怎么算

在网上搜到了两个计算realtime PCR扩增效率的公式,但相互不同,不知哪个才是正确的。请大家明辨!第一种计算: 第二种计算方法:两个都是通过标准曲线法计算扩增效率,其实是一样的,按照定义理解,完全扩增的话1条变2条,2条变4条,扩增效率200%,但一般通过软件计算都是提供第一种方法(用的比较多

如何提高PCR产物克隆的效率

把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法:1.直接克隆到T载体(或者U载体上)2.引物设计时引入酶切位点,PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。    方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶,New England Biol

PCR扩增效率低的原因

主要考虑是否在模板稀释过程中出现问题,是否存在高浓度样品污染低浓度样品的情况。具体的要看了你的扩增曲线、溶解曲线以及标准曲线的结果才能判断。其次题主提到的两个问题1、模板浓度过高会抑制PCR反应,可能会导致扩增效率降低。

如何提高PCR产物克隆的效率

把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法: 1.  直接克隆到T载体(或者U载体上) 2.  引物设计时引入酶切位点,PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上 3.  将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶,NewEngland

如何提高PCR的扩增效率

P不出来,如果引物没有问题那就是反应条件没有设置好了首先看看你所用的酶的效率(普通Taq酶的效率为0.8~1.2kb/s),延伸时间是不是太短了,再看看酶活性是不是还好,做个阳性对照其次看看退火温度,是不是过高或者过低再次看看你的模板,如果是基因组DNA,跑跑胶看看有没有降解,量加的够不够(基因组属

如何提高PCR产物克隆的效率

把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法:1.直接克隆到T载体(或者U载体上)2.引物设计时引入酶切位点,PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。    方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶,New England Biol

PCR扩增效率低的原因分析

(1)引物或探针不佳: 重新设计更好的引物和探针。(2)反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。(3)反应条件不够优化:可调整退火温度或改为三步扩增法。(4)反应体系中有PCR反应抑制物:一般是加入模板时所引入,应先把模板适度稀释,再加入反应体系中,减少抑制物的影响。

3分钟了解如何提高PCR电泳效率

  1,科学设计引物,注意末端匹配度,无不必要互补,CG含量,酶切位点等。  2,增加循环数  3,提纯模板  4,用好的taq酶  5,降低退火温度(可能降低特异性)

PCR扩增效率的评估扩增曲线的解读

做过PCR的小伙伴都知道,PCR前期的验证引物探针性能和确定最适反应条件是确保正式实验顺利进行的前提。PCR实验中有个相当重要的工作——即是PCR扩增效率的评估。扩增效率是PCR检测性能最重要的指标之一,也是定量分析计算结果时所需要的参数。接下来,让小编给大家细细说来吧。 什么是扩增效率 PCR是一

如何提高扩增效率和PCR的特异性

引物引物设计:引物长度适当,18-24mers,并保证序列独特性,以降低序列在非目的片段中存在的可能性,但长度大于24核苷的引物并不意味着有更高的特异性,较长的序列可能会与错误配对序列杂交,反而降低特异性,而且长序列比短序列杂交慢,影响产量; 引物浓度:引物的浓度会影响特异性。最佳的引物浓度一般在0

荧光定量PCR技术中的扩增效率什么意思

PCR原理中,反应一个循环,PCR产物扩增一倍,即为之前的2倍。……反应N个循环,理论上应为原来的2的N次方。此时,理论的扩增效率是100%,即1。但实际上,由于酶,dNTPs,引物,模板等因素,扩增效率达不到100%。因此,我们就要做标准曲线,看实际的扩增效率是多少,也就是标准曲线的斜率。理论上1

荧光定量PCR技术中的扩增效率什么意思

PCR原理中,反应一个循环,PCR产物扩增一倍,即为之前的2倍。……反应N个循环,理论上应为原来的2的N次方。此时,理论的扩增效率是100%,即1。但实际上,由于酶,dNTPs,引物,模板等因素,扩增效率达不到100%。因此,我们就要做标准曲线,看实际的扩增效率是多少,也就是标准曲线的斜率。理论上1

BioTechniques:牛凝血酶提高PCR的效率和特异性

  成功的PCR都是相似的,而不成功的PCR却有各种各样的原因。于是,人们都希望找到普遍适用的PCR增强剂。首都师范大学、北京市疾病预防控制中心和清华大学的研究人员发现,牛凝血酶(BT)在防止引物二聚体形成和增强PCR产物形成上极为有效。这项成果发表在《BioTechniques》12月刊上。  P

PCRW2系列高效率交流电源

概要交流电源的功率单元部采用PWM方式,由此实现了高效率(约75%)和低输入电流,其机身小,质量轻。此外,还备有可以在1台上通过开关切换使用相同容量的单相输出和三相输出的操作简便的型号(PCR-W2系列)。PCR-W2系列高效率交流电源特长 PCR-W2系列高效率交流电源实现可与线性放大器方式媲美的

荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办

1、调整下体系,不要自己配置反应液,最好用商品的MIX,这样各个组分都是最佳的配比。2、三步法改为两步法,退火延伸设置为一步,大部分的温度为60度,这个只是建议,具体看你买的试剂的说明书,会有具体的说明。3、很有可能有非特异性扩增,自己排查下反应体系,根据溶解曲线是否单峰,扩增曲线CT值综合分析。

绝对量子效率是外量子效率吗

不是。1、绝对量子效率亦称量子产额在光合作用中每吸收一个光量子所固定的二氧化碳分子数或释放氧气的分子数,由于所得数值为小数故通常用其道术量子需要量来表示。2、外量子效率是指单位时间内输出发光二极管外的光子数目与注入的载流子数目之比。

液相色谱仪的柱效率和溶剂效率

液相色谱仪的色谱理论主要包括柱效率和溶剂效率两方面的问题。一、柱效率:柱效率是指溶质通过液相色谱仪色谱柱后其区域宽度增加了多少。柱效率与溶质在两相中的扩散和传质情况有关,是所谓色谱的动力学过程。柱效率常以理论塔板数或理论塔板高度表示。要提高柱效率,得改善色谱柱性能和操作条件。二、溶剂效率:溶剂效率是

色谱仪分析的柱效率和溶剂效率

色谱仪分析理论主要包括柱效率和溶剂效率两方面的问题。一、柱效率:柱效率是指样品通过色谱仪色谱柱后其区域宽度增加了多少,与样品在两相中的扩散和传质情况有关,是色谱分离过程中动力学因素决定的分离效率,是所谓色谱动力学过程。柱效率又称柱效能。柱效率通常以理论塔板数或理论塔板高度表示。对单个样品组分而言,常

怎样提高实验室的管理效率和使用效率

主要还是系统性的工作方式吧,首先是从实验记录,实验记录是必须是规范化的,但是有效简化实验记录撰写过程也是非常重要的,这样的话就能对实验室实验记录统一规范,便于长期保存和后续查阅参考,极大的方便了课题的接续和和信息的共享。真实性跟及时性也是非常重要的,真实主要是对每个记录的修改均会留下记录,及时就是保

磨粉效率低?影响球磨机研磨效率的5个因素

  本文简单介绍影响球磨机研磨效率的部分因素,如钢球在筒内的运动形态、转速率、钢球的补加及尺寸大小、料位高低、助磨剂的使用。这些因素都在一定程度上对球磨机效率产生影响。  1.钢球在筒内的运动形态  准确地说,在一定程度上,研磨介质在筒内的运动形态,影响着球磨机研磨的效率。  把球磨机的工作环境分为

Troubleshooting-for-PCR-and-multiplex-PCR

Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE

多重PCR(Multiplex-PCR)

一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.    多

多重PCR(Multiplex-PCR)

一般PCR仅应用一对引物,通过PCR扩增产生一个核酸片段,主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同.    多

PCR简介/PCR仪

PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料(四种脱氧核苷酸)及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制

重叠PCR—overlap-PCR

1、简介 重叠PCR也是基本的PCR原理:变性-退火-延伸。不同的是在重叠PCR过程是两个或者几个片段重叠延伸之后,再进行指数扩增的PCR过程。  2、基本原理*步:PCR产生两个或者几个片段,这几个片段之间必须有重叠区。 第二步:以两个片段为例,见上图,*步产生的两个片段,A D链之间有互补,B

普通PCR梯度PCR-原位PCR-荧光定量PCR仪的区别

  普通PCR仪:   一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪,也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如;(ABI 2720)   梯度PCR仪:   一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)的称